Staphylococcus aureus procedentes de quesos costeños de Valledupar; susceptibilidad a antibióticos y perfil plasmídico / Staphylococcus aureus from Valledupar cheeses; susceptibility to antibiotics and plasmid profile

Resumen En este estudio se investigó la susceptibilidad a antibióticos y el perfil plasmídico de S aureus aislado de queso costeño, blando, semiduro y duro, expendidas en diferentes puntos de venta de la ciudad de Valledupar. Por el método de Difusión del disco en agar, se determinó la resistencia a antibióticos y con la técnica de lisis alcalina y electroforesis en gel de agarosa, el perfil plasmídico. Como resultado, se obtuvo una carga microbiana por encima de 103 UFC/g, que está sobre el valor promedio máximo permitido, según la norma covenin 1538-92, el cual indica que se puede desencadenar brotes por intoxicación con estafilocócos. Se demostró la presencia de S. aureus en los quesos costeños blandos (75%), seguidos por los quesos semiduros (25%) ambos de origen (artesanal), los cuales son de alto consumo en Valledupar. Se establecieron 4 patrones diferentes de resistencia en las cepas de S. aureus aisladas de los quesos, siendo el patrón TER común para dos cepas, el resto de los patrones fueron únicos (PR, CR y EI). Una cepa fue resistente a P, productora de β-lactamasas, su CMI más alta fue 32µg/ml; todas las cepas mostraron sensibilidad a oxacilina, gentamicina, ciprofloxacina, cefoxitin, clindamicina, trimetoprim sulfa, vancomicina, rifampin, e imipenen. Hubo bandas plasmídicas con tamaños de 23kb encontrándose cepas con 1 plásmidos.

Abstract In this study, the antibiotic susceptibility was investigated and the plasmid profile of S aureus isolated from coastal cheese, soft, semi-hard and hard, expended in different outlets of the city of Valledupar. For the method of diffusion of the agar disk, the antibiotic resistance was determined and with the technique of alkaline lysis and electrophoresis in the agarose gel, the plasmid profile. As a result, was obtained one microbial load, above of 103 UFC/g, which is on average the maximum allowed value, according to the standard covenin 1538-92, which indicates that it can trigger outbreaks by Staphylococcal poisoning. The presence of S.aureus in coastal soft cheese was shown (75%), followed by semi-hard cheeses (25%) both home (handmade), which are of high consume in Valledupar. four different resistance patterns were established in the strains of the S.aureus isolated from the cheeses, being TER the common pattern for five strains, the rest of the patterns were unique (PR, CR and EI). One strain was resistant to P, producer of the β-lactamases, the CMI more tall was 32µg/ml; All the strains show sensibility to oxacillin, gentamycin, ciprofloxacin, cephoxitin, clindamycin, trimetoprim sulfa, vancomycin, rifampin, and imipenem. There plasmid bands with sizes between 23kb, being 1 strains with plasmids.

Detection of multidrug-resistant Enterobacteriaceae isolated from river waters flowing to the Guanabara Bay and from clinical samples of hospitals in Rio de Janeiro, Brazil / Detección de enterobacterias multirresistentes aisladas en aguas de los ríos que desembocan en la bahía de Guanabara y en muestras de hospitales de Río de Janeiro, Brasil

Abstract Introduction: The use of antibiotics in humans, animal husbandry and veterinary activities induces selective pressure leading to the colonization and infection by resistant strains. Objective: We evaluated water samples collected from rivers of the Guanabara Bay, which have suffered minor and major environmental degradation, and clinical samples of hospital origin to detect evidence of the presence of resistance genes to aminoglycosides, beta-lactam antibiotics and fluoroquinolones in strains of Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae, K. pneumoniae subsp. ozaenae and Escherichia coli. Materials and methods: For isolation of the water strains we employed culture media containing 32 μg/ml cephalotin and 8 μg/ml gentamicin. The strains from clinical materials were selected using culture media containing 8 μg/ml gentamicin. The strains were identified and subjected to antimicrobial susceptibility testing (AST), plasmid DNA extraction and polymerase chain reaction (PCR) to detect genes encoding enzymes modifying aminoglycosides (EMA), extended-spectrum beta-lactamases (ESBL) and plasmid mechanisms of quinolone resistance (PMQR). Results: The AST of the isolates recovered from water samples showed multidrug-resistance profiles similar to those found in isolates recovered from clinical materials. All isolates from water samples and 90% of the isolates from clinical samples showed at least one plasmid band. In the PCR assays, 7.4% of the isolates recovered from water samples and 20% of those from clinical materials showed amplification products for the three antimicrobial classes. Conclusion: We believe that the detection of microorganisms presenting genetic elements in environments such as water is necessary for the prevention and control of their dissemination with potential to infect humans and other animals in eventual contact with these environments.

Resumen Introducción. El uso de antibióticos en seres humanos, en la industria pecuaria y en las actividades veterinarias induce una presión selectiva que resulta en la colonización e infección con cepas resistentes. Objetivo. Determinar la presencia de genes de resistencia a aminoglucósidos, betalactámicos y fluoroquinolonas en cepas de Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae, K. pneumoniae subsp. ozaenae y Escherichia coli, obtenidas de muestras de agua de los ríos que desembocan en la bahía de Guanabara y de muestras clínicas de hospitales de Río de Janeiro. Materiales y métodos. En la selección de las cepas resistentes obtenidas de las muestras de agua de los ríos, se emplearon medios de cultivo que contenían 32 μg/ml de cefalotina y 8 μg/ ml de gentamicina. En el caso de las muestras de especímenes clínicos, se usaron medios de cultivo que contenían 8 μg/ml de gentamicina. Las cepas se identificaron y se sometieron a pruebas de sensibilidad antimicrobiana, extracción de ADN plasmídico y pruebas de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para detectar los genes que codifican aquellas enzimas que modifican los aminoglucósidos, las betalactamasas de espectro extendido (BLEE) y los mecanismos de resistencia a las quinolonas mediados por plásmidos. Resultados. Se encontraron perfiles de resistencia a los antimicrobianos similares en los dos grupos. En todas las bacterias obtenidas de las muestras de agua y en 90 % de las muestras clínicas, se evidenciaron bandas de plásmidos asociados con la transferencia de genes de resistencia. En las pruebas de PCR, se obtuvieron productos de amplificación de los genes de resistencia para las tres clases de antimicrobianos analizados, en el 7,4 % de las bacterias recuperadas de las muestras de agua y en el 20 % de aquellas recuperadas de las muestras clínicas. Conclusión. La detección de microorganismos con elementos genéticos que confieren resistencia a los antibióticos en ambientes como el agua, es una estrategia necesaria para prevenir y controlar la diseminación de estos agentes patógenos con potencial para infectar a humanos y a otros animales en dichos ambientes.

Asociación de la resistencia al mercurio con la resistencia a antibióticos en Escherichia coli aislados del litoral de Lima, Perú / Association of mercury resistance with resistance to antibiotics in Escherichia coli isolated from the coast of Lima, Peru

El objetivo de este estudio fue investigar la resistencia al mercurio y los antibióticos, y la transferencia de resistencia al mercurio por plásmidos conjugativos en 55 cepas de Escherichia coli aisladas de aguas superficiales del litoral de Lima, Perú. Se determinó la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) a diversos antibióticos y al mercurio en las cepas aisladas. Para confirmar la resistencia plasmídica al mercurio, se realizó la curación de estos con dodecil sulfato de sodio (SDS) 10%. El ensayo de transferencia de plásmidos por conjugación se realizó usando la cepa receptora E. coli DH5α sólo con las cepas que mostraron sensibilidad al mercurio después de la curación. La extracción de los plásmidos de resistencia fue realizada sólo en las cepas transconjugantes resistentes al mercurio. 41 (74.5%) cepas fueron resistentes al mercurio (HgR), presentando CMIs entre 30 μM (8.25 ppm) y 300 μM (82.5 ppm), de estás, 33 fueron HgR mediante plásmidos y de este último grupo, 14 fueron también resistentes a antibióticos. Sólo 6 cepas poseían plásmidos conjugativos con resistencia al mercurio, mostrando una frecuencia de transconjugación entre 9.41x10-4 y 4.76x10-2%. La alta prevalencia de cepas de E. coli HgR aisladas de la costa limeña podría ser un problema de salud pública y ambiental. En este sentido, los plásmidos congugativos pueden contribuir con la diseminación de mercurio y/o resistencia a antibióticos entre comunidades bacterianas en ambientes marinos.

The Lima coast is highly affected by anthropogenic effluents from wastewater from contaminated urban rivers that flow into the coast. The objective of this study was to investigate the resistance to mercury and antibiotics, and the transfer of resistance to mercury by conjugative plasmids in 55 strains of Escherichia coli isolated of surface seawater from coastal Lima, Peru. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) was determined for various antibiotics and for mercury in the isolated strains. To confirm the plasmid resistance to mercury, the curing was carried out with 10% sodium dodecyl sulfate (SDS). The plasmid transfer assay by conjugation was performed using the E. coli DH5α as recipient strain only with the strains that showed sensitivity to mercury after curing. The extraction of the resistance plasmids was carried out only in the transconjugant strains resistant to mercury. 41 (74.5%) strains were resistant to mercury (HgR), with MICs between 30 μM (8.25 ppm) and 300 μM (82.5 ppm), of these, 33 were HgR by plasmids and of this last group, 14 were also resistant to antibiotics. Only 6 strains had conjugative plasmids with mercury resistance, showing a transconjugation frequency between 9.41x10-4 and 4.76x10-2%. The high prevalence of HgR in E. coli strains isolated from the coast of Lima could be a public and environmental health problem. In this sense, congugative plasmids can contribute to the spread of mercury and/or resistance to antibiotics among bacterial communities in marine environments.

Determinación de perfiles plasmídicos de Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae productoras de ß-lactamasas de espectro extendido aisladas en urocultivos / Plasmid profile determination of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae producers of extended spectrum ß-lactamase isolated in urocultives

Introducción. El aumento de las tasas de resistencia en bacterias uropatógenas y su propagación se han convertido en un problema de salud pública a nivel mundial, cobrando mayor importancia la diseminación de aislamientos resistentes productores de ß-lactamasas de espectro extendido, resultando útil la caracterización molecular de plásmidos y otros elementos genéticos de las bacterias para establecer la relación genética que existe entre ellas y tener datos relevantes que puedan sugerir la dirección de propagación de este tipo de resistencia. El objetivo de nuestra investigación fue determinar los perfiles plasmídicos en aislamientos de Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae productoras de ß-lactamasas de espectro extendido de urocultivos del Instituto Nacional de Salud del Niño, Lima, Perú. Métodos. Estudio descriptivo, observacional de corte transversal. Resultados. Se determinaron diferentes patrones electroforéticos, obteniéndose de 1 hasta 7 bandas por muestra y en total 15 bandas de distinto tamaño, variando desde 1.5 kb hasta más de20 kb. Teniendo en cuenta los patrones de huella obtenidos, los aislamientos estudiados se distribuyeron en diferentes grupos o ramas, usando el programa NTSYSpc 2.1 y el algoritmo de agrupamiento UPGMA. Conclusión. No se encontró similitud genética marcada entre los aislamientos de origen comunitario y de origen asociado a atención sanitaria, por lo que no se puede establecer una relación significativa y determinar un origen común entre los mismos.

Introduction. The increase in resistance rates in uropathogenic bacteria and their spread has become in a significant worldwide public health, becoming more important the spread of resistant isolates producing of extended spectrum ß-lactamases, which are useful the molecular characterization of plasmids and other genetic elements of the bacteria to establish the genetic relationship between them, to have relevant data that we can suggest the direction of propagation of this type of resistance. The object of research was to determine the plasmid profiles in isolates of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae producing of extended spectrum ß-lactamases from urine cultures of the National Institute of Child Health, Lima, Peru. Methods. Descriptive, observational cross-sectional study. Results. Were detected different electrophoretic patternsin the samples, obtained from 1-7 bands per sample and a total of 15 bands of different sizes, which varied from 1.5 kb to more than 20 kb. Considering the fingerprint patterns, the isolates analyzed were distributed into different clusters or branches, using the NTSYSpc 2.1 program and the UPGMA clustering algorithm. Conclusions. No genetic similarity was found between isolates of community origin and of origin associated with health care, so it is not possible to establish a meaningful relationship and to determine a common origin among them.

Caracterización de los plásmidos de cepas de escherichia coli aislados de coprocultivos de niños sanos / Characterization of plasmids of escherichia coli strains isolated from stool culture of healthy children

La microbiota intestinal representa una reserva potencial de organismos resistentes a los antimicrobianos, y el sitio donde los genes de resistencia pueden ser transferidos desde la microbiota comensal a los microorganismos virulentos. En este trabajo se caracterizaron los perfiles fenotípicos de resistencia a diversos agentes antimicrobianos, en aislados de Escherichia coli, obtenidos de niños sanos, menores de 5 años de edad, y la capacidad de transmisibilidad de esos determinantes de resistencia, mediante ensayos de conjugación. Los aislados de E. coli se obtuvieron partir de coprocultivos de niños sanos mediante el uso de placas de Mc Conkey suplementadas con ampicilina y se les determinó el perfil de resistencia a diversos antibióticos, para luego realizar ensayos de conjugación. A partir de 90 coprocultivos, fueron aisladas 33 cepas de E. coli resistentes a algún antibiótico, presentándose un 66,6% del total de las cepas resistentes en al menos dos antibióticos. Luego de los ensayos de conjugación, se encontró que un 47,4% de las cepas presenta plásmidos conjugativos, transfiriendo marcadores de resistencia. Los patrones generados por enzimas de restricción fueron distintos entre ellos. Estos resultados nos permiten sugerir que estos elementos extracromosomales sean los responsables de la rápida diseminación de la resistencia a los antimicrobianos en la población bacteriana de niños sanos.

Gastrointestinal microbiota represents the potential reserve of antimicrobial-resistant organisms, and the site where resistance genes can be transferred from the commensally microbiota to virulent microorganisms. In this work we characterized the phenotypic resistance profiles to various antimicrobial agents in strains of Escherichia coli isolated from healthy children, less than 5 years of age, and the ability of these determinants of resistance to be mobilized by conjugation. The isolation of E. coli strains from stool culture from healthy children was made through the use of Mc Conkey media supplemented with ampicillin. The profile of resistance to various antibiotics was determined and then conjugation was carried out. From 90-stool culture 33 strains of E. coli resistant to some antibiotic were isolated, 63.6% of bacteria were resistant to -at least- two antibiotic. It have be demonstrated that 47.4% of the isolates harbored conjugative plasmids, which can mobilize markers of resistance. Restriction profiles analysis showed that all patterns were different. These results allow us to suggest that these extracromosomals elements are responsible for the rapid spread of resistance to antimicrobials in the bacterial population of healthy children.

Detection and characterization of multidrug-resistant enterobacteria bearing aminoglycoside-modifying gene in a university hospital at Rio de Janeiro, Brazil, along three decades / Detección y caracterización de enterobacterias resistentes a múltiples fármacos, portadoras del gen modificador de aminoglucósidos en un hospital universitario de Río de Janeiro, Brasil, durante tres décadas

Introduction: Multidrug-resistant Enterobacteriaceae, particularly those resistant to gentamicin, have become one of the most important causes of nosocomial infections. Objective: We sought to investigate the presence of genes conferring resistance to aminoglycosides, specially to gentamicin, in Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli multidrug-resistant strains isolated from different clinical materials among patients hospitalized in a university hospital in Rio de Janeiro, Brazil. Materials and methods: Ten colonization strains and 20 infection strains were evaluated during three decades (1980 to 2010) using selective media containing 8 µg/ml of gentamicin. Thirty strains were tested for antimicrobial susceptibility. Twenty two strains were subjected to plasmid DNA extraction and 12 to hybridization assays using as probe a 1.9 kb plasmid DNA fragment from one of the K. pneumoniae strains isolated from faecal samples. This fragment was sequenced and assigned to the GQ422439 GenBank record. PCR was also performed using oligonucleotides designed for aminoglycoside-modifying enzymes. Results: An accC2 acetylase, besides transposons and insertion sequences, were evidenced. Twenty-four (80%) of the isolates were positive for the aacC2 gene in agreement with antibiotic susceptibility testing profiles, indicating the persistent presence of this gene throughout the three decades. We detected high molecular weight plasmids in 54,5% of the strains. Of the tested strains, 91% showed positive signal in the hybridization assays. Conclusion: A gene codifying for one specific aminoglycoside-modifying enzyme was detected all throughout the three decades. Our data back the adoption of preventive measures, such as a more conscious use of antimicrobial agents in hospital environments, which can contribute to control the dissemination of microorganisms harboring resistance gene plasmids.

Introducción. Las enterobacterias resistentes a la gentamicina se asocian frecuentemente a infecciones hospitalarias. Objetivo. Verificar la presencia de los genes que confieren resistencia a los aminoglucósidos, específicamente a la gentamicina, en cepas de Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli multirresistentes, obtenidas de pacientes internados en un hospital universitario de Río de Janeiro. Materiales y métodos. Se recolectaron y evaluaron 10 cepas de colonización y 20 de infección entre 1980 y 2010, utilizando medios selectivos enriquecidos con gentamicina (8 µg/ml). Se obtuvieron 30 cepas en las que se determinó la resistencia a los antibióticos por medios fenotípicos. Veintidós muestras se sometieron a extracción de ADN plasmídico y se hicieron ensayos de hibridización en 12 de ellas, usando como sonda un fragmento de ADN plasmídico de 1,9 kb obtenido de una cepa de K. pneumoniae aislada de muestra fecal. Este fragmento fue secuenciado y correspondió al registro GQ422439 del GenBank. Se verificó la presencia de genes de enzimas modificadoras de aminoglucósidos mediante reacción en cadena de la polimerasa. Resultados. En las cepas analizadas se evidenció la presencia de la acetilasa accC2, además de transposones y secuencias de inserción. Veinticuatro aislamientos (80 %) fueron positivos para el gen aacC2 en concordancia con los perfiles de sensibilidad a los antibióticos, lo que indicó su persistencia a lo largo de las tres décadas. Se detectaron plásmidos de alto peso molecular en 54,5 % de las cepas. El 91 % de las cepas analizadas mostró signos positivos en las pruebas de hibridación. Conclusión. Se detectó la persistencia de un gen codificador de una enzima modificadora de aminoglucósidos a lo largo de las tres décadas. Los resultados indican que las medidas de prevención, tales como un uso más responsable de los agentes antimicrobianos en el ambiente hospitalario, pueden contribuir al control de la diseminación de microorganismos que albergan plásmidos de genes de resistencia.

Infección por neisseria gonorrhoeaey fenotipos de resistencia antimicrobiana,Mar del Plata, 2005-2010 / Neisseria gonorrhoeae infection and phenotypes of antimicrobial resistance, Mar del Plata, 2005-2010 / Infecção por Neisseria gonorrhoeae e fenótipos de resistência antimicrobiana, Mar del Plata, 2005-2010

Se realizó un estudio epidemiológico de tipo descriptivo retrospectivo, para determinar la tasa de infección por Neisseria gonorrhoeae y sus fenotipos de resistencia a los antimicrobianos, en 666 pacientes adultos de ambos sexos que asistieron al servicio al Servicio de ITS del Instituto Nacional de Epidemiología "Dr. Juan H. Jara"- ANLIS "Dr. Carlos G. Malbrán", de la ciudad de Mar del Plata, entre los años 2005-2010. Para el diagnóstico de infección por N. gonorrhoeae, las muestras fueron obtenidas por hisopados endocervicales e hisopados uretrales a varones y luego cultivadas. Los aislamientos fueron remitidos al Laboratorio Nacional de Referencia en ITS para completar el estudio de sensibilidad antimicrobiana. Se obtuvo una tasa de infección por N. gonorrhoeae del 12,2% [IC 95%: 9,83-14,95]. Los fenotipos de resistencia más prevalentes resultaron QRNG/CMRNG (resistencia a quinolonas conjuntamente con resistencia cromosómica a penicilina y tetraciclina), QRNG (resistencia a quinolonas), PPNG (cepa productora de penicilinasa) y CMTR (resistencia cromosómica a tetraciclina). En el marco de la vigilancia epidemiológica de las infecciones producidas por N. gonorrhoeae, el rol del laboratorio consiste no sólo en monitorear la incidencia de casos en la población sino también el perfil de resistencia a los antibióticos de uso terapéutico, a fin de controlar la enfermedad.

An epidemiological retrospective descriptive study was conducted in order to determine the rate of Neisseria gonorrhoeae infection and the antimicrobial resistance phenotypes in 666 adult patients of both sexes who attended the Sexually Transmitted Disease Service, at the National Institute of Epidemiology "Dr. Juan H. Jara"- ANLIS city of Mar del Plata, between the years 2005- 2010. For the diagnosis of N. gonorrhoeae infection, samples were obtained by endocervical swabs and urethral swabs in men. Microbiological growth on selective culture medium was identified using carbohydrate utilization. N. gonorrhoeae isolates were subsequently submitted to the National Reference Laboratory in STI for the study of antimicrobial susceptibility by determining the minimum inhibitory concentration. The N. gonorrhoeae infection rate was 12.2% [CI 95%: 9.83-14.95]. The most prevalent resistance phenotypes were QRNG/CMRNG (quinolone resistance in addition to chromosomal resistance to penicillin and tetracycline), QRNG (resistance to quinolone), PPNG (penicillinase producing strain) and CMTR (chromosomal resistance to tetracycline). As part of the epidemiological surveillance of infections by N. gonorrhoeae, the role of the laboratory is not only to monitor the incidence of cases in the population but also the antibiotic resistance profile for therapeutic use, in order to control the disease.

Um estudo epidemiológico de tipo descritivo retrospectivo foi realizado para determinar a taxa de infecção por Neisseria gonorrhoeae e seus fenótipos de resistência aos antimicrobianos em 666 pacientes adultos de ambos os sexos que compareceram no Serviço de ITS do Instituto Nacional de Epidemiología "Dr. Juan H. Jara, ANLIS "Dr. Carlos G. Malbrán" da cidade de Mar del Plata, entre os anos de 2005-2010. Para o diagnóstico de infecção por N. gonorrhoeae, as amostras foram obtidas por esfregaços endocervicais e esfregaços uretrais em homens e em seguida cultivadas. Os isolados foram encaminhados para o Laboratório Nacional de Referência em ITS para completar o estudo da sensibilidade antimicrobiana. Uma taxa de infecção de 12,2% em N. gonorrhoeae [IC 95%: 9,83-14,95] foi obtida. Os fenótipos de resistência mais prevalentes foram QRNG/CMRNG (resistência às quinolonas em conjunto com a resistência cromossômica à penicilina e tetraciclina), QRNG (resistência a quinolonas), PPNG (cepa produtora de penicilinase) e CMTR (resistência cromossômica à tetraciclina). Sob o controle epidemiológico das infecções produzidas por N. gonorrhoeae, o papel do laboratório é não só monitorar a incidência de casos na população, mas também o perfil de resistência aos antibióticos de uso terapêutico, visando a controlar a doença.

Antibiotic- and heavy-metal resistance in bacteria isolated from deep subsurface in El Callao region, Venezuela / Resistencia a antibioticos y metales pesados en bacterias aisladas de subsuelo en la región El Callao, Venezuela

Se investigó el efecto de la contaminación con mercurio (Hg) en las comunidades bacterianas del subsuelo profundo en la región de El Callao (Estado Bolívar, Venezuela). Se estudiaron comunidades bacterianas de dos niveles de profundidad (-288 m y -388 m) en una mina de oro con el propósito de describir las características más relevantes de las bacterias indígenas cultivables que colonizaban esta mina. Se evaluaron los patrones de resistencia a antibióticos y metales pesados, presencia del gen merA y plásmidos en aislados resistentes. Se encontró una elevada frecuencia de bacterias indígenas resistentes al Hg y otros metales pesados. De 76 aislados Hg-resistentes probados 73.7 % fueron adicionalmente resistentes a ampicilina; 86.8 % a cloranfenicol; 67.1 % a tetraciclina; 56.6 % a estreptomicina y 51.3 % a kanamicina. Además, se encontró que 40.74 % (-328 m) y 26.53 % (-388 m) de las bacterias Hg-resistentes fueron simultáneamente resistentes tanto a cuatro como a cinco de estos antibióticos. Se detectó la presencia de plásmidos de alto y bajo peso molecular y, a pesar de que los aislados mostraban resistencia a compuestos mercuriales, la presencia del gen merA fue detectada solo en 71.05 % de los cepas. Estos resultados sugieren que la exposición a Hg podría ser una presión selectiva en la proliferación de bacterias resistentes a antibióticos y promover el mantenimiento y propagación de estos genes de resistencia. Sin embargo, la existencia de tales resistencias a estas profundidades podría también apoyar la idea de que la resistencia a antibióticos en estas bacterias es natural y tiene un origen más antiguo que su exposición al Hg.

The effect of contamination with mercury (Hg) in the deep subsurface bacterial communities in the region of El Callao (Bolívar State, Venezuela) was investigated. Bacterial communities from two deep levels (-288 m and -388 m) in a gold mine were studied with the aim of describe the most relevant features of their colonizing indigenous culturable bacteria. Antibiotic and heavy metals resistance patterns, presence of the merA gene and plasmids in resistant isolates were evaluated. A high frequency of resistant indigenous bacteria to Hg and other heavy metals was found. From 76 Hg-resistant isolates tested 73.7 % were, in addition, resistant to ampicillin, 86.8% to chloramphenicol, 67.1 % for tetracycline, 56.6 % streptomycin, and 51.3 % kanamycin. Furthermore, it was found that 40.74 % (-328 mm) and 26.53 % (-388 m) of Hg-resistant bacteria were simultaneously resistant to both four and five of these antibiotics. The presence of low and high molecular weight plasmids was detected and, despite that isolated showed resistance to mercurial compounds, the presence of the gene merA was detected only in 71.05 % of strains. These results suggest that exposure to Hg could be a selective pressure on the proliferation of antibiotic-resistant bacteria and promote the preservation and propagation of these resistance genes. However, the existence of such resistances to these depths could also support the idea that antibiotic resistance in these bacteria is natural and has a more ancient origin than their exposure to Hg.

Susceptibilidad antimicrobiana y genotipificación de Pseudomonas aeruginosa de pacientes con fibrosis quística y otras patologías en Cartagena (Colombia) / Antimicrobial susceptibility and genotypification of Pseudomonas aeruginosa from cystic fibrosis patients and other diseases in Cartagena (Colombia)

Objetivo: el objetivo de este estudio fue analizar el genotipo y susceptibilidad antimicrobiana de Pseudomonas aeruginosa de pacientes con fibrosis quística y otras patologías. Materiales y métodos: se analizaron 20 aislados de pacientes con fibrosis quística y 20 de pacientes con otras enfermedades por medio de la prueba de susceptibilidad antimicrobiana por microdilución en caldo y técnica del ADN polimorfo amplificado aleatorio. Resultados: se observó que los aislados de pacientes con fibrosis quística presentaron mayor resistencia (56 %) en comparación con aislados de pacientes sin fibrosis quística (25 %). Los antimicrobianos más efectivos en ambos grupos fueron cefepima, ceftriaxona y meropenem. Desde el punto de vista genotípico, se observa heterogeneidad entre las cepas de pacientes con fibrosis quística y dos grupos con cepas idénticas de origen hospitalario, lo que sugiere una posible transmisión cruzada. Conclusión: Concluimos que los porcentajes de resistencia de Pseudomonas aeruginosa en este estudio son altas, y este hallazgo se acentúa en el caso de pacientes con fibrosis quística, lo cual deja muy pocas opciones de tratamiento. La tipificación por técnica del ADN polimórfico amplificado aleatorio permitió conocer la variabilidad de genotipos para tener control sobre la transmisión de cepas, lo cual constituye un tópico de importancia en el sistema de salud y el mejoramiento de la calidad de vida de los pacientes.

Objective: Our aim was to analyze genotype and antimicrobial susceptibility of Pseudo-monas aeruginosa from cystic fibrosis patients and other diseases. Materials and methods: We analyzed 20 isolates from cystic fibrosis patients and 20 from patients with other diseases by dilution antimicrobial susceptibility test and random amplified polymorphic DNA technique. Results: We found that isolates from cystic fibrosis patients had higher resistance (56 %) than isolates from patients without cystic fibrosis (26 %). The most effective antimicrobi-als in both groups were cefepime, ceftriaxone and meropenem. With regard to the geno-type, we observed heterogeneity between strains from cystic fibrosis patients and two clus-ters with identical strains from hospital origin, suggesting a possible cross transmission. Conclusion: We concluded that the resistance rate of Pseudomonas aeruginosa in this study was high and this finding is accentuated in patients with cystic fibrosis, leaving few treatment options. Typification by random amplified polymorphic DNA technique allowed us to know the variability of genotypes to control strain transmission; this is an important topic to optimize health services and the quality of life of our patients.

IS CR1 asociado con genes blaCTX-M-1 y bla CTX-M-2 en plásmidos IncN e IncFIIA aislados en Klebsiella pneumoniae de origen hospitalario en Mérida, Venezuela / IS CR1 associated with bla CTX-M-1 y bla CTX-M-2 genes in IncN and IncFIIA plasmids isolated from Klebsiella pneumoniae of nosocomial origin in Mérida, Venezuela

Introducción. Las secuencias de inserción tales como IS CR1 promueven la captura, transposición y expresión de los genes bla CTX-M, facilitando, de esta manera, su diseminación rápida en la población bacteriana. Objetivo. Se determinó la presencia del elemento IS CR1 y su asociación con genes bla CTX-M-1 y bla CTX-M-2 en plásmidos de diferentes grupos de incompatibilidad en Klebsiella pneumoniae de origen hospitalario. Materiales y métodos. Se aislaron tres cepas de K. pneumoniae con sensibilidad disminuida a cefalosporinas de amplio espectro, de neonatos con septicemia hospitalaria. La presencia de β -lactamasas de espectro expandido (BLEE) fue determinada fenotípicamente. Los plásmidos se aislaron y clasificaron según grupos de incompatibilidad por tipificación del replicón por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Los genes bla BLEE y su asociación a IS CR1 se determinaron por PCR y secuenciación directa, usando varios juegos de iniciadores. Resultados. Todas las cepas demostraron un perfil fenotípico indicativo de producción de BLEE, transferibles por conjugación. Los ensayos de PCR para para cefotaximasas (CTX-M) y el análisis de la secuenciación, revelaron que las cepas portaban genes bla CTX-M-1 y bla CTX-M-2. Estos genes se encontraron en plásmidos conjugados de 150 kb, aproximadamente, relacionados con los grupos IncN e IncFIIA, respectivamente. IS CR1 se encontró ´aguas arriba´ ( upstream ) y asociado con los genes bla CTX-M-1 y bla CTX-M-2. Conclusión. Este es el primer reporte realizado en Venezuela donde la presencia de IS CR1 está estrechamente asociada con la movilización de los genes bla CTX-M-1 y bla CTX-M-2 en plásmidos conjugativos IncN y IncFIIA en cepas de K. pneumoniae que circulan en una Unidad de Alto Riesgo Neonatal.

Introduction: Insertion sequences such as IS CR1 promote capture, transposition and expression of bla CTX-M genes. Thus, gene dissemination in bacterial populations occurs rapidly. Objective: To determine the presence of IS CR1 sequence genes and their association with bla CTX-M-1 and bla CTX-M-2 on plasmids IncN and IncFIIA from K. pneumoniae of nosocomial origin, was determined. Materials and methods: Three strains of K. pneumoniae with reduced susceptibility to extendedspectrum cephalosporins were isolated from neonatal sepsis cases of nosocomial origin. Phenotypic tests showed the presence of ESBLs. Plasmids were isolated and classified according to incompatibility groups by PCR replicon typing. Detection and association of IS CR1 with bla CTX-M genes were determined by PCR and direct sequencing through the use of several sets of PCR primers. Results: All strains showed phenotypic profile consistent with ESBL-producing transferred by conjugation. PCR amplification assay for CTX-M together with sequencing analysis revealed that strains carrying bla CTX-M-1 y bla CTX-M-2 genes were localized in plasmids of approximately 150 kb related to IncN and IncFIIA groups, respectively. IS CR1 was found upstream and associated with bla CTX-M-1 y bla CTX-M-2 genes. Conclusion. Thus far, this is the first Venezuelan report, in which IS CR1 presence is closely related to bla CTX-M-1 y bla CTX-M-2 gene mobilization in IncN and IncFIIA conjugative plasmids located in K. pneumonaiae strains circulating at a neonatal high risk unit.

Characterization of Bacillus thuringiensis soil isolates from Cuba, with insecticidal activity against mosquitoes

Chemical insecticides may be toxic and cause environmental degradation. Consequently, biological control for insects represents an alternative with low ecological impact. In this work, three soil isolates (A21, A51 and C17) from different regions of the Cuban archipelago were identified, characterized and evaluated against Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus. The new isolates were compared with reference IPS82 strain and two strains isolated from biolarvicides Bactivec and Bactoculicida, respectively. The differentiation was done by morphological, biochemical, bioassays activity and molecular methods (SDS-PAGE, plasmid profile and random amplified polymorphic analysis). All isolates were identified as Bacillus thuringiensis. The A21, A51 and C17 isolates showed higher larvicide activity than Bactivec’s isolated reference strain, against both A. aegypti and C. quinquefasciatus. A21 isolate had a protein profile similar to IPS82 and Bactivec strain. A51 and C17 isolates produced a characteristic proteins pattern. A21 and A51 isolates had plasmid patterns similar to IPS82 standard strain, while C17 isolate had different both plasmid profile and protein bands. All the studied isolates showed a diverse RAPD patterns and were different from the strains previously used in biological control in Cuba. Rev. Biol. Trop. 59 (3): 1007-1016. Epub 2011 September 01.

El uso prolongado de insecticidas ha conducido al desarrollo de resistencia en diferentes especies de mosquitos y al incremento de la degradación del ambiente. El control biológico de insectos ha devenido como una alternativa útil y de bajo impacto ambiental. En nuestro estudio fueron identificados, caracterizados tres aislamientos de suelos procedentes de diferentes regiones del archipiélago cubano y comparados con cepas de referencia: aisladas de los biolarvicidas Bactivec y Bactoculicida, además de IPS82. La diferenciación de los mismos se llevó a cabo mediante métodos morfológicos, bioquímicos y moleculares (SDSPAGE, perfil plasmídico, RAPD). Los aislamientos fueron identificados como Bacillus thuringiensis; A21, A51 y C17 mostraron una mayor actividad contra larvas de Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus que la cepa aislada del biolarvicida Bactivec, utilizada como referencia en este estudio. Dos de los aislamientos poseían perfiles proteicos y plasmídicos similares al de la cepa control IPS82, pero el restante difería de ellos. Los tres mostraron patrones de RAPD diferentes lo que nos permitió su diferenciación. Estos patrones de RAPD también diferían del observado para las cepas utilizadas comúnmente en el control biológico en nuestro país.

The emergence of qnr-mediated quinolone resistance among Enterobacteriaceae in Jamaica / Surgimiento de la resistencia a las quinolonas mediada por qnr entre las Enterobacteriaceae en Jamaica

OBJECTIVE: Quinolone resistance is usually caused by various chromosomal mutations, but has been more recently associated with plasmids which carry the qnr determinant. The aim of this study is to investigate the prevalence of qnr genes in clinical isolates of Enterobacteriaceae in Jamaica. METHODS: A total of 255 non-duplicate fluoroquinolone-resistant Enterobacteriaceae clinical isolates, comprising 232 Escherichia coli, 20 Klebsiella species and three Enterobacter spp were collected between October 2007 and November 2008 from hospitalized patients in Jamaica. The presence of the qnr gene was screened by PCR using specific primers for qnrA, qnrB and qnrS in extracted plasmid DNA. RESULTS: Eighty-three (32.5%) of these isolates were qnr-positive, of which 47.0% housed the qnrA gene only, 1.2% qnrB and 9.6% qnrS only. Another 36.1% possessed both qnrA and qnrS genes. Approximately 30% of the quinolone-resistant E coli isolates harboured the qnr gene while 50% Klebsiella spp and all Enterobacter spp were positive. CONCLUSION: The emergence of qnr-mediated quinolone resistance among clinical Enterobacteriaceae isolates is described for the first time in Jamaica.

OBJETIVO: La resistencia a la quinolona es generalmente causada por varias mutaciones cromosomáticas, pero más recientemente ha sido asociada con plásmidos portadores del determinante qnr. El objetivo de este estudio fue investigar la prevalencia de genes qnr en los aislados clínicos de Enterobacteriaceae en Jamaica. MÉTODOS: Un total de 255 aislados clínicos no duplicados de Enterobacteriaceae resistentes a la fluoroquinolona, incluyendo 232 de Escherichia coli, 20 especies de Klebsiella y tres Enterobacter spp, fueron recogidos entre octubre de 2007 y noviembre de 2008, de pacientes hospitalizados en Jamaica. La presencia del gen qnr fue tamizada mediante marcadores PCR, usando primers específicos para qnrA, qnrB y qnrS en el ADN plásmido extraído. RESULTADOS: Ochenta y tres (32.5%) de éstos aislados fueron qnr-positivos. De ellos, 47.0% alojaban solamente el gen qnrA, 1.2% el qnrB y 9.6% el qnrS solamente. Otro 36.1% poseía tanto genes qnrA cuanto genes qnrS. Aproximadamente 30% de los aislados E. coli resistentes a la quinolona, albergaban el gen qnr mientras que 50% de Klebsiella spp y todas las Enterobacter spp fueron positivas. CONCLUSIÓN: Se describe por primera vez el surgimiento de la resistencia a las quinolonas mediada por qnr en Jamaica.

Caracterización de ß-lactamasas de espectro extendido (BLEE) en cepas nosocomiales de K. pneumoniae Sucre-Venezuela / Characterization of extended-spectrum ß-lactamases in nosocomial strains of Klebsiella pneumoniae Sucre Venezuela

En este estudio, 25 cepas de K. pneumoniae aisladas de pacientes con infección nosocomial durante el periodo agosto 2002 a diciembre de 2003 fueron examinadas para determinar su susceptibilidad antimicrobiana, perfil plasmídico, transferencia de determinantes de resistencia y los tipos de genes blaTEM , blaSHV , blaCTX-M. Diecinueve cepas presentaron susceptibilidad disminuida a las cefalosporinas de tercera generación y al aztreonam y fueron productoras de ß-lactamasas de espectro extendido (BLEE). Todas las cepas presentaron plásmidos transferibles con una frecuencia de conjugación de 10-3 a 10-4 transconjugantes/célula donante. El análisis de los patrones de restricción reveló la presencia de tres tipos de plásmidos. Las cepas E. coli transconjugantes, además de ser productoras de BLEE, expresaron resistencia a aminoglucósidos y cloranfenicol. Se encontró la presencia del gen blaTEM en todos los plásmidos transferibles y los genes blaSHV y blaCTX en plásmidos transferibles y no transferibles. Las enzimas identificadas fueron TEM-1, SHV-5-2a y CTX-M-2. Los plásmidos presentes en las cepas de K. pneumoniae, juegan un papel importante en la diseminación de los genes que codifican resistencia a los ß-lactámicos y otros antimicrobianos.

In this study, 25 strains of K. pneumoniae, isolated from patients with nosocomial infections from August 2002 to December 2003, were examined to determine their antimicrobial susceptibility, plasmid profile, transfer capacity of resistance determinants and blaTEM, blaSHV, and blaCTX-M genes. Nineteen nosocomial strains revealed a weakened susceptibility to third-generation cephalosporins and aztreonam, and were extended-spectrum ß-lactamases (ESBLs) producers. All strains presented conjugable plasmids with a conjugation frequency of 10-3 to 10-4 transconjugants/donor cell. The analysis of restriction patterns revealed the presence of three differents plasmids. The Escherichia coli transconjugants were ESBLs producers and expressed resistance for aminoglucosides and chloramphenicol. The blaTEM gen was found in all transferables plasmids and the blaSHV and blaCTX genes were found in transferables and no transferables plasmids. The enzymes identified in the isolates were TEM-1 SHV-5-2a and CTX-M-2. The plasmids present in the K. pneumoniae strains play an important role in the dissemination of the genes encoding resistance to ß-lactams and other antimicrobial agents.

Evaluación de la presencia del gen mer A implicado en la detoxificación de mercurio a partir de actinomicetos nativos del humedal de La Conejera / Evaluation of the presence of mer A gen implied in the mercury detoxification from native actinomycetes of La Conejera wetland

Se aislaron diez cepas de actinomicetos nativos del humedal La Conejera a partir de muestras de sedimento y agua, con el fin de determinar la capacidad de resistencia y detoxificación de mercurio, evaluando la presencia del gen mer A involucrado en el proceso. La prueba de resistencia fue realizada mediante un test de sensibilidad tomando concentraciones desde 3,68x10-3 mM hasta 10 mM de HgCl2. Se realizaron curvas de crecimiento de 192 h para las cepas resistentes al mercurio, en un medio suplementado con 0,01 mM y 0,05 mM de HgCl2, realizando una fermentación discontinua y midiendo el crecimiento por la técnica de peso seco. A partir de estos resultados se determinó un tiempo de adaptación de 24 h y una producción máxima de biomasa de 2,72 g·L-1 a la hora 72. Paralelamente, se realizó la secuenciación de los genes de resistencia al mercurio de Streptomyces lividans 1326, por medio del diseño de los oligonucleótidos capaces de amplificar el extremos 3’ del gen mer A, codificador de la enzima mercurio reductasa. Se optimizaron las condiciones de amplificación por PCR para obtener un producto amplificado de 686 pb aproximadamente. Finalmente, se realizó una electroforesis en campo pulsado comprobando la presencia de plásmidos en la cepa KH7 con tamaños aproximados de 50, 90 y 300 Kb, no integrados al cromosoma y posiblemente asociados a la resistencia presentada frente al metal.

Ten native actinomycete strains were isolated from water and sediment samples collected in La Conejera wet-lands to assess mercury resistance and detoxification ability for evaluating the presence of the mer A gene involved in that process. Sensitivity assays were performed using 3.68 x 10-3 mM to 10 mM HgCl2 concentrations. Growth curves were generated for each resistant strain after 192 h in discontinuous fermentation in medium supplemented with 0.01 mM and 0.05 mM HgCl2. Biomass growth was then measured by dry weight, maximum value (2.37 g·L-1) being obtained after 72 h. Primer pairs were designed based on the sequence encoding the mercury-reductase enzyme in Streptomyces lividans 1326. PCR conditions for amplifying that region were standardised. The mer A gene was identified in the KH7 strain, resulting in an amplified product of around 686 bp. The KH7 strain electrophoresis profile obtained by pulsed field gel electrophoresis showed 50, 90 and 300 Kb plasmid DNA which could be related to metal resistance in this strain.

Integrones clase 1 asociados a plásmidos en cepas de Klebsiella pneumoniae / Class 1 integrons associated to plasmids in Klebsiella pneumoniae strains

Los integrones son elementos genéticos captadores de genes de resistencia, usualmente localizados en plásmidos y responsables de la diseminación de la resistencia en bacilos gramnegativos. En el presente trabajo se estudió la presencia de integrones clase 1 y su asociación con plásmidos en 23 cepas de Klebsiella pneumoniae, aisladas de diferentes servicios del Hospital Universitario “Antonio Patricio de Alcalᔠestado Sucre-Venezuela. La transferencia de los determinantes de resistencia fue evaluada mediante conjugación bacteriana y la presencia de integrones clase 1 por la reacción en cadena de la polimerasa. Todos los aislamientos presentaron resistencia para ceftazidima y aztreonan. Los ensayos de conjugación demostraron la presencia de plásmidos conjugativos en todas las cepas de K. pneumoniae analizadas. Los integrones clase 1 fueron detectados en 10 (43,47%) aislamientos. Nueve cepas contenían un integrón y una cepa dos elementos. Todos los integrones identificados están asociados a plásmidos. La presencia de integrones clase 1 en las moléculas plasmídicas juega un papel importante en la epidemiología de la resistencia a los agentes antimicrobianos en las cepas clínicas.

Integrons are genetic elements able to capture resistance genes, usually located in plasmids and responsible for dissemination of resistance in Gram negative bacilli. The presence of class 1 integrons and its association with plasmids in 23 multiresistant Klebsiella pneumoniae strains, isolated from different services of hospital “Antonio Patricio de AlcalᔠSucre-Venezuela was studied. By bacterial conjugation and polymerase chain reaction the transference of resistance determinants and the presence of integrons class 1 were evaluated. All isolates were resistant to ceftazidime and aztreonam. Conjugation assays demonstrated the presence of conjugative plasmids in all K. pneumoniae strains analyzed. Integrons were detected in 10 (43.47%) isolates. One integron element was present in nine strains and two elements in one single strain. Integrons identified were associated a plasmids. The presence of integrons class 1 carried by plamids must play an important role in the epidemiology of antibiotic resistance in clinical strains.

Plásmidos conjugativos aislados de cepas multirresistentes de pacientes de cuatro centros de salud del área metropolitana de Caracas / Conjugated plasmids isolated from multi resistant strains obtained at four health centers in the Caracas metropolitan area

Resumen Los plásmidos conjugativos y movilizables son las estructuras extracromosomales de mayor importancia epidemiológica, responsables de la propagación horizontal de múltiples genes de resistencia. En este trabajo, se evaluaron cepas de E. coli y K. pneumoniae para determinar la presencia de plásmidos conjugativos y su relación con la adquisición, estabilización y diseminación de múltiples genes de resistencia. Utilizando ensayos de conjugación, se demostró la presencia de plásmidos conjugativos en el 67% de las cepas analizadas. El análisis del tratamiento con enzimas de restricción demostró que existen cepas bacterianas aisladas en diferentes áreas del mismo hospital que portan plásmidos con idénticos patrones de restricción. Los perfiles de resistencia de las cepas transconjugantes revelaron que se transfirieron determinantes de resistencia contra todas las familias de antibióticos analizadas, evidenciándose la contribución de los plásmidos al fenotipo de múltiple resistencia. Nuestros resultados sugieren que las cepas de E. coli y K. pneumoniae aisladas de pacientes de cuatro centros de salud del área metropolitana han podido adquirir el fenotipo de multirresistencia mediante la adquisición de plásmidos portadores de múltiples genes que codifican resistencia a diversos agentes antimicrobianos.

Abstract Conjugative and movable plasmids are the extra chromosomal structures of greater epidemiological importance, responsible for the horizontal propagation of multiple resistance genes. In this study we evaluated E. coli and K. pneunoniae strains to determine the presence of conjugative plasmids and their relationship with the acquisition, stabilization and dissemination of multiple resistance genes. Using conjugation assays we demonstrated the presence of conjugative plasmids in 67% of the strains analyzed. The analysis of restriction enzyme treatments demonstrated that there were bacterial strains isolated from different hospital areas with identical restriction patterns. The resistance profiles of the transconjugating strains revealed that there was transfer of resistance determinants against all the antibiotic families analyzed, demonstrating the plasmid contribution to the multiple resistance phenotype. Our results suggest that the E. coli and K. pneumoniae strains isolated from patients in four health centers of the metropolitan areas may have acquired the multi resistance phenotype through the acquisition of plasmids that bear multiple genes that codify resistance to various antimicrobial agents.

PRESENCIA DE INTEGRONES Y SU RELACIÓN CON LA RESISTENCIA A ANTIMICROBIANOS EN CEPAS DE Pseudomonas aeruginosa / PRESENCE OF INTEGRONS AND THEIR RELATIONSHIP WITH ANTIMICROBIAL RESISTANCE IN Pseudomonas aeruginosa STRAINS

Debido a que en nuestro medio existe una carencia de datos estadísticos con respecto a la incidencia de infecciones producidas por P. aeruginosa en la población y la resistencia que presenta frente a una variedad de antimicrobianos, el presente estudio tiene como propósito fundamental aportar información y datos sobre la distribución y frecuencia (previa estandarización de la técnica para la detección) de los integrones clase 1 y 2 y su relación con la multirresistencia a antimicrobianos. Para este fin, se obtuvieron muestras de P. aeruginosa de diferentes laboratorios y hospitales del Departamento, a las que se les realizó la prueba de susceptibilidad antimicrobiana, crecimiento de las bacterias a presión selectiva, extracción de ADN y por último detección de integrones clase 1 y 2 con partidores específicos. De 41 muestras obtenidas de P. aeruginosa. se detectó usando PCR, la presencia de integrones clase 1 y clase 2, identificándose éstos en el 58.5 % de las cepas. El 29.27 % de los aislados, llevaba integrones clase 1, el 12,20 % integrones clase 2 y el 17.07 % llevaba ambas clases de integrones. La asociación entre integrones clase 1 y la resistencia múltiple a antimicrobianos fue estadísticamente significativa (chi-cuadrado 0.0033), demostrando la existencia de una fuerte correlación, caso contrario a lo que ocurrió con la asociación entre integrones clase 2 (chi-cuadrado 0.8528). La autenticidad de los productos obtenidos de la PCR, se confirmaron realizando ensayos de restricción con la enzima SphI y la enzima HaeIII. Este es el primer reporte que muestra la prevalencia de integrones clase 1 y la relación con la multirresistencia en aislados de P. aeruginosa en Cochabamba, Bolivia.

Due to the fact that in our environment there is an absence of statistical data related to the incidence of infections produced by P. aeruginosa in our population and the resistance that it presents with respect to a variety of antimicrobial agents, this study aims basically at providing information and data about distribution and frequency (after having standardized the detection techniques) of the integrons classes 1 and 2, and their relationship with their multi resistance to antimicrobial agents. For this purpase, samples of P. aeruginosa were obtained from different laboratories and hospitals in the State of Cochabamba, which were tested for antimicrobial sensibility, as well as for growth of bacteria under selective pressure, DNA extraction and finally detection of integrons class 1 and 2 with specific primers. Using PCR, integrons class 1 and 2 were detected in 41 samples of P. aeroginosa, identifying these ones in 58.5% of the strains: 29.7% of those isolated, carried integrons class 1, 12.2% had integrons class 2, and 17.07% had integrons of both classes. The association between class 1 integrons and multiple resistance to antimicrobial agents was statistically significant (chi square = 0.0033) thus showing a strong correlation, as opposed to what happened with the association among class 2 integrons (chi square = 0.8528) The authenticity of the products obtained from the PCR was confirmed through restriction tests made with SphI and HaeIII enzymes. This is the first report that shows prevalence of class 1 integrons and the relation with multi resistance aisolated strains of P. aeruginosa in Cochabamba, Bolivia.

Construction of a cassette for cloning and analysis of replicons / Construccion de un cassette para el clonamiento y analisis de replicones

The aim of this work was the construction of a cassette, i.e., a non-replicative molecule formed by linkage of an antibiotic resistance gene and a multiple cloning site. This cassette would allow the cloning and analysis of a wide range of replicons. The aac(6')-lc amikacin gene was isolated and ligated to the multiple clining site of the pUC18 vector. This construction was HindIII digested and cloned in the HindIII site of the vector. The resulting pHJ13 clone conferred to the recipient cells the ability to grow in presence of amikacin (cassette marker) and ampicillin (vector gene). By restriction analysis, the cassette orientation was established. Cassette versatility is provided by the presence of the unaltered multiple cloning site segment, and also because it allows sequencing of any replication origin inserted. Cassette funcionality was demonstrated by ligation to a replicative region of H plasmid pHH1457. Presence of the ori region from pHH1457 and the aac(6')-lc gene was confirmed in E. coli transformed clones. The incompatibility properties of the pHH1457 and its capability to replicate in a Poll defective strain were preserved in the pHJII14 construct. Currently, the amikacin cassette is being used in the characterization of H Complex plasmids.

El objetivo de este trabajo es la construcción de un cassette ­ molécula no replicativa ­ formada por un gen de resistencia a un antibiótico y una región de múltiple sitios de clonamiento. Este cassette permitirá el clonamiento y análisis de una amplia variedad de replicones. El gen que determina resistencia a amikacina (aac (6')-Ic) fue aislado y ligado a la región de múltiple sitios de clonamiento del vector pUC18. La construcción resultante fue digerida con Hind III y clonada en el sitio Hind III del vector. El clon pHJ13 resultante confirió a las células receptoras la capacidad de crecer en presencia de amikacina (marcador del cassette) y ampicilina (marcador del vector). Mediante análisis con enzimas de restricción se determinó la orientación del cassette. La versatilidad del cassette se sustenta en la presencia, sin modificaciones, de la región de múltiple sitios de clonamiento, que permitirá obtener la secuencia de nucleótidos de cualquier origen de replicación insertado. La funcionalidad del cassette fue demostrada mediante el ligamiento a una región de replicación del plásmido pHH1457 (Complejo H). La presencia de la región ori de pHH1457 y del gen aac (6')-Ic fue confirmada en clones de E. coli. Las propiedades de incompatibilidad del plásmido H y su capacidad para replicarse en una cepa defectiva en PolI se conservaron en el plásmido pHJII14 construido. El cassette de amikacina está siendo utilizado en la caracterización de plásmidos del Complejo H. P