ABSTRACT
Naturally occurring mutations in morphogenetic protein 15 (BMP15) are associated with decreased ovulation rate (OR), litter size (LS), and sterility. It is of a great interest to elucidate BMP15 gene in Cholistani sheep breed to uplift socio-economic status and the knowledge of Cholistani sheep breeding in Southern Punjab, Pakistan. In our study, a total of 50 infertile Cholistani sheep aged between 2-6 years and having no blood relation were screened for BMP15 mutations. For this purpose, a high-quality DNA was extracted from the blood of sheep followed by primer designing, Polymerase Chain Reaction (PCR) amplification, DNA sequencing, and in silico analyses. Out of total 50 samples, 9 samples including case 1 (T3), case 2 (T8), case 3 (T17), case 4 (T22), case 5 (T25), case 6 (T33), case 7 (T40), case 8 (T44), and case 9 (T47) were found positive for a variety of already reported and novel BMP15 mutations. Further in silico analyses of the observed mutations have shown the functional impact of these mutations on different characteristics (molecular weight, theoretical PI, estimated half-life, instability index, sub-cellular localization, and 3D confirmation) of the encoded proteins, possibly altering the normal functionality. In a nutshell, findings of this study have confirmed the possible essential role of the BMP15 mutations in the infertility of the Cholistani sheep.
Mutações de ocorrência natural na proteína morfogenética 15 (BMP15) estão associadas à diminuição da taxa de ovulação (TO), tamanho da ninhada (TN) e esterilidade. Estudar a BMP15 na raça Cholistani para elevar o status socioeconômico e o conhecimento da criação de ovinos Cholistani no sul de Punjab, Paquistão. Em nosso estudo, 50 ovelhas Cholistani inférteis sem parentesco sanguíneo foram rastreadas para mutações BMP15. Para tanto, um DNA de alta qualidade foi extraído do sangue dessas ovelhas, seguido de concepção do primer, amplificação da reação em cadeia da polimerase (PCR), sequenciamento de DNA e análises in silico. Do total de 50 amostras, 9, incluindo caso 1 (T3), caso 2 (T8), caso 3 (T17), caso 4 (T22), caso 5 (T25), caso 6 (T33), caso 7 (T40), caso 8 (T44) e caso 9 (T47), foram consideradas positivas para uma variedade de mutações BMP15 novas e já relatadas. Mais análises in silico das mutações observadas mostraram o impacto funcional dessas mutações em diferentes características (peso molecular, PI teórico, meia-vida estimada, índice de instabilidade, localização subcelular e confirmação 3D) das proteínas codificadas, possivelmente alterando a funcionalidade normal. Nossos achados confirmaram o possível papel essencial das mutações BMP15 na infertilidade de ovelhas Cholistani.
Subject(s)
Animals , Sheep , Infertility , Mutation/geneticsABSTRACT
Abstract Naturally occurring mutations in morphogenetic protein 15 (BMP15) are associated with decreased ovulation rate (OR), litter size (LS), and sterility. It is of a great interest to elucidate BMP15 gene in Cholistani sheep breed to uplift socio-economic status and the knowledge of Cholistani sheep breeding in Southern Punjab, Pakistan. In our study, a total of 50 infertile Cholistani sheep aged between 2-6 years and having no blood relation were screened for BMP15 mutations. For this purpose, a high-quality DNA was extracted from the blood of sheep followed by primer designing, Polymerase Chain Reaction (PCR) amplification, DNA sequencing, and in silico analyses. Out of total 50 samples, 9 samples including case 1 (T3), case 2 (T8), case 3 (T17), case 4 (T22), case 5 (T25), case 6 (T33), case 7 (T40), case 8 (T44), and case 9 (T47) were found positive for a variety of already reported and novel BMP15 mutations. Further in silico analyses of the observed mutations have shown the functional impact of these mutations on different characteristics (molecular weight, theoretical PI, estimated half-life, instability index, sub-cellular localization, and 3D confirmation) of the encoded proteins, possibly altering the normal functionality. In a nutshell, findings of this study have confirmed the possible essential role of the BMP15 mutations in the infertility of the Cholistani sheep.
Resumo Mutações de ocorrência natural na proteína morfogenética 15 (BMP15) estão associadas à diminuição da taxa de ovulação (TO), tamanho da ninhada (TN) e esterilidade. Estudar a BMP15 na raça Cholistani para elevar o status socioeconômico e o conhecimento da criação de ovinos Cholistani no sul de Punjab, Paquistão. Em nosso estudo, 50 ovelhas Cholistani inférteis sem parentesco sanguíneo foram rastreadas para mutações BMP15. Para tanto, um DNA de alta qualidade foi extraído do sangue dessas ovelhas, seguido de concepção do primer, amplificação da reação em cadeia da polimerase (PCR), sequenciamento de DNA e análises in silico. Do total de 50 amostras, 9, incluindo caso 1 (T3), caso 2 (T8), caso 3 (T17), caso 4 (T22), caso 5 (T25), caso 6 (T33), caso 7 (T40), caso 8 (T44) e caso 9 (T47), foram consideradas positivas para uma variedade de mutações BMP15 novas e já relatadas. Mais análises in silico das mutações observadas mostraram o impacto funcional dessas mutações em diferentes características (peso molecular, PI teórico, meia-vida estimada, índice de instabilidade, localização subcelular e confirmação 3D) das proteínas codificadas, possivelmente alterando a funcionalidade normal. Nossos achados confirmaram o possível papel essencial das mutações BMP15 na infertilidade de ovelhas Cholistani.
ABSTRACT
Abstract Background: The production of biofuels has caused an increase in the prices of agricultural commodities. Thus, the ecological footprint, social inclusion and profitability of production systems have encouraged the use of agro-industrial products as an alternative in ruminant feeds. Objective: To evaluate carcass yields, non-carcass components, and the economic viability of including licuri oil in diet of Santa Ines ewes. Methods: A total of 32 Santa Ines ewes (multiparous, non-lactating, 2-4 years old, and 36.7±0.87 kg of body weight-BW) were allotted to a randomized block design with four treatments (diets containing 0, 2, 4 or 5% licuri oil) with eight replicates per treatment, and confined for 77 days. Results: The incremental inclusion of licuri oil promoted a quadratic response on slaughter BW, carcass and true yields, chest widths, heart fat, pancreas, omental fat, and ribeye area (p<0.05). Carcass, heart and loin weight, shank yield, fat thickness and loin fat were reduced (p<0.05); while cooling losses, left half-carcass weight, saw blade yield, and proportion of meat in the loin increased (p<0.05) with increasing dietary levels of licuri oil. The control diet resulted in the best gross revenue (USD$609.39); however, there was a loss (USD$50.96) regarding economic performance indicators. Conclusion: The use of up to 2% licuri oil in the diet increased carcass yield of discard ewes.
Resumen Antecedentes: La producción de biocombustibles ha provocado un aumento en los precios de los productos agrícolas básicos. Por lo tanto, la huella ecológica, la inclusión social y la rentabilidad de los sistemas productivos han incentivado la busqueda de productos agroindustriales como alternativa para la alimentación de rumiantes. Objetivo: Evaluar el rendimiento en canal, los componentes ajenos a la canal, y la viabilidad económica de incluir aceite de licuri en dietas para ovejas de raza Santa Ines. Métodos: Un total de 32 ovejas Santa Ines (multíparas, no lactantes, de 2 a 4 años y de 36,7±0,87 kg de peso corporal-PC) fueron asignadas a un diseño de bloques al azar con cuatro tratamientos (dieta basal adicionada con 0, 2, 4 o 5% de aceite de licuri) con ocho repeticiones por tratamiento, y confinadas por 77 días. Resultados: Los niveles incrementales de aceite de licuri tuvieron un efecto cuadrático sobre el PC al sacrificio, el rendimiento real y de la canal, el ancho del pecho, la grasa del corazón, el páncreas, la grasa del epiplón y el área del ojo del lomo (p<0,05). Se redujo (p<0,05) el peso de la canal, el corazón y el lomo, el rendimiento del jarrete, el grosor de la grasa y la grasa del lomo; y aumentaron las pérdidas por enfriamiento, el peso de media canal restante, el rendimiento de la hoja de sierra y la proporción de carne en el lomo (p<0,05) con niveles incrementales de aceite de licuri. La dieta control resultó en el mejor ingreso bruto (USD$609,39); sin embargo, hubo una pérdida (USD$50,96) en los indicadores de desempeño económico. Conclusión: El uso de hasta un 2% de aceite de licuri en la dieta incrementa el rendimiento en canal de las ovejas de descarte.
Resumo Antecedentes: A produção de biocombustíveis tem causado um aumento nos preços das commodities agrícolas. Assim, a pegada ecológica, a inclusão social e a rentabilidade do sistema de produção têm incentivado o uso de produtos agroindustriais como alternativa alimentar para ruminantes. Objetivo: Avaliar os rendimentos de carcaça, componentes não carcaça e a viabilidade econômica da inclusão do óleo de licuri em dietas para ovelhas Santa Inês. Métodos: Um total de 32 ovelhas Santa Inês (multíparas, não lactantes, 2-4 anos e 36,7±0,87 kg de peso corporal-PC) foram distribuídas em delineamento em blocos casualizados com 4 tratamentos (dietas contendo óleo de licuri a 0, 2, 4 e 5% de matéria seca) com 8 repetições por tratamento e confinadas por 77 dias. Resultados: A inclusão de óleo de licuri promoveu efeito quadrático no PC de abate, rendimentos de carcaça e verdadeiros, largura de peito, gordura do coração, pâncreas, gordura omental e área de olho de lombo (p<0,05). Os pesos de carcaça, coração e lombo, rendimento de pernil, espessura de gordura e gordura do lombo foram reduzidos (p<0,05), e as perdas por resfriamento, peso de meia carcaça esquerda, rendimento de lâmina de serra e proporção de carne no lombo aumentaram (p<0,05) com um aumento nos níveis de óleo de licuri. A dieta controle resultou na melhor receita bruta (USD$609,39); no entanto, houve uma perda (USD$50,96) em relação aos indicadores de desempenho econômico. Conclusão: O uso de até 2% de óleo de licuri na dieta proporcionou aumento nos rendimentos de carcaça de ovelhas de descarte.
ABSTRACT
Abstract Background: Ivermectin may affect the levels of cytokines and immunoglobulins in sheep, considering that avermectins have an effect on the immune system. Objective: To determine whether ivermectin has an effect on cytokines and immunoglobulins in sheep. Methods: After administration of ivermectin to 10 healthy sheep, sheep-specific interferon-α, tumor necrosis factor-α, interleukin-2, interleukin-6, interleukin-10, immunoglobulin G, immunoglobulin M, and immunoglobulin E levels were measured with an ELISA reader. Results: Significant (p<0.05) fluctuations were detected in interleukin-2 and interleukin-10 levels. Transient increases (p<0.05) were measured in tumor necrosis factor-α and immunoglobulin E levels (p<0.05). Conclusion: Ivermectin may affect immune system parameters in healthy sheep; however, the effects of ivermectin administration on infected sheep should be investigated.
Resumen Antecedentes: La ivermectina puede alterar los niveles de citocinas e inmunoglobulinas en ovinos, dado que las avermectinas afectan el sistema inmunológico. Objetivo: Determinar si la ivermectina tiene algún efecto sobre las citocinas e inmunoglobulinas en ovinos. Métodos: Después de la administración de ivermectina a 10 ovejas sanas los niveles de interferón-α específico de oveja, factor de necrosis tumoral-α, interleucina-2, interleucina-6, interleucina-10, inmunoglobulina G, inmunoglobulina M, e inmunoglobulina E se midieron con un lector ELISA. Resultados: Se detectaron fluctuaciones significativas (p<0,05) en los niveles de interleucina-2 e interleucina-10. También se encontraron aumentos transitorios (p<0,05) en los niveles de factor de necrosis tumoral-α e inmunoglobulina E (p<0,05). Conclusión: la ivermectina puede afectar los parámetros del sistema inmunitario en ovejas sanas.
Resumo Antecedentes: A ivermectina pode alterar os níveis de citocinas e imunoglobulinas em ovinos, visto que as avermectinas afetam o sistema imunológico. Objetivo: Determinar o efeito da ivermectina nas citocinas e imunoglobulinas em ovinos. Métodos: Após a administração de ivermectina a 10 ovelhas saudáveis, interferon-α específico de ovelha, fator de necrose tumoral-α, interleucina-2, interleucina-6 e interleucina-10, os níveis de imunoglobulina G, imunoglobulina M e imunoglobulina E foram medidos com Leitor de ELISA. Resultados: Flutuações estatisticamente significativas (p<0,05) foram detectadas nos níveis de interkeukin-2 e interkeukin-10. Aumentos transitórios (p<0,05) foram medidos nos níveis de fator de necrose tumoral-α e imunoglobulina E (p<0,05). Conclusão: A ivermectina pode afetar parâmetros do sistema imunológico em ovinos saudáveis, entretanto, os efeitos da administração de ivermectina em ovinos infectados devem ser investigados.
ABSTRACT
Abstract Background: Assessment of animal growth based on live weight (LW) in traditional sheep production systems is limited by the high cost of purchase and maintenance of livestock scales. Objective: To develop and evaluate equations for LW prediction using heart girth (HG) in growing Pelibuey sheep. Methods: A dataset (n=415) of clinically healthy male Pelibuey sheep from two months to one year of age, with an average LW of 25.96 ± 10.25 kg and HG of 68.31 ± 10.53 cm, were used. Three equations were evaluated: LW (kg) = −37.70 + 0.93 × HG (Eq. 1); LW (kg) = −1.74 + 0.19 × HG + 0.008 × HG2 (Eq. 2); and LW (kg) = 0.003 × HG2.68 (Eq. 3). Results: The correlation coefficient between LW and HG was r = 0.94 (p<0.001). The three equations showed a high concordance correlation coefficient (CCCs≥0.97). However, the random error was the main component of the mean square partition of the prediction error (≥82.78%) only for Eqs. 1 and 2. The test for parameter identity (intercept=0; slope=1) was accepted only for Eq. 2 (p>0.05). On the other hand, for Eqs. 1 and 3 the intercept was different from zero and the slope was different from one (p<0.05). Conclusion: The second-degree equation accurately and precisely estimated body weight of growing Pelibuey sheep using the HG as a sole predictor variable.
Resumen Antecedentes : Debido a las condiciones de los sistemas tradicionales de producción ovina, la evaluación del crecimiento animal en función del peso vivo (PV) está limitada por el alto costo de la báscula ganadera y su mantenimiento. Objetivo: Desarrollar y evaluar ecuaciones para predecir el peso corporal utilizando el perímetro torácico (PT) en ovinos Pelibuey en crecimiento. Métodos : Se utilizó un conjunto de datos (n=415) de ovinos Pelibuey machos clínicamente sanos, de dos meses a un año de edad y peso promedio de 25,96 ± 10,25 kg y PT de 68,31 ± 10,53 cm. Se evaluaron tres ecuaciones: PV (kg) = −37,70 + 0,93 × PT (Ec. 1), PV (kg) = −1,74 + 0,19 × PT + 0,008 × PT2 (Ec. 2) y PV (kg) = 0,003 × PT2,68 (Ec. 3). Resultados: El coeficiente de correlación entre PV y PT fue r=0,94 (p<0,001). Las tres ecuaciones mostraron alto coeficiente de correlación de concordancia (CCCs≥0,97). Sin embargo, el error aleatorio fue el componente principal de la partición cuadrática media del error de predicción (≥82,78%) solo para las Ecs. 1 y 2. Sin embargo, la prueba de identidad de parámetros (intersección = 0; pendiente = 1) solo se aceptó para la ecuación 2 (p>0,05). Por otro lado, el intercepto fue diferente de cero y la pendiente fue diferente de uno (p<0.05) para las Ecs. 1 y 3. Conclusión: La ecuación de segundo grado estima con exactitud y precisión el peso corporal de ovinos Pelibuey en crecimiento utilizando la PT como única variable predictora.
Resumo Antecedentes: Devido às condições dos sistemas tradicionais de produção de ovinos, a avaliação do crescimento animal com base no peso corporal (PV) é limitada pelo alto custo da balança pecuária, bem como pela manutenção sofisticada necessária. Objetivo: Desenvolver e avaliar equações para predizer o PV usando o perímetro torácico (PT) em ovinos Pelibuey em crescimento. Métodos: Um conjunto de dados (n=415) de ovinos Pelibuey machos clinicamente saudáveis de dois meses a um ano de idade, com peso médio de 25,96 ± 10,25 kg e PT de 68,31 ± 10,53 cm foi utilizado para o desenvolvimento das equações. Três equações foram avaliadas: PV (kg) = -37,70 + 0,93 × PT (Eq. 1), PV (kg) = -1,74 + 0,19 × PT + 0,008 × PT2 (Eq. 2) e PV (kg) = 0,003 × PT2,68 (Eq. 3). Resultados: O coeficiente de correlação entre PV e PT foi r = 0,94 (P < 0,001). As três equações apresentaram alto coeficiente de correlação e concordância (CCCs≥0,97). No entanto, o erro aleatório foi o principal componente da partição do quadrado médio do erro de predição (≥82,78%) apenas para as Eqs. 1 e 2. No entanto, o teste de identidade dos parâmetros (intercepto = 0; inclinação = 1) foi aceito apenas para a Eq. 2 (p>0,05). Por outro lado, para a Eq. 1 e 3, o intercepto foi diferente de zero e a inclinação foi diferente de um (p<0,05). Conclusões: A equação de segundo grau estima com precisão e acurácia o peso corporal de ovinos Pelibuey em crescimento usando o PT como única variável preditora.
ABSTRACT
O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da inclusão de cilostazol no meio de maturação in vitro de oócitos sobre produção in vitro de embriões ovinos. Para isso, foram realizadas colheitas de oócitos oriundos de ovários obtidos em abatedouro por meio do método de aspiração folicular com bomba de vácuo. Os oócitos foram divididos em quatro grupos de maturação: grupo CON, onde os complexos cumulus oócitos foram imersos em TCM-199, suplementado com 500 UI de penicilina, 0,5 mg de estreptomicina, 1,25 µg de anfotericina, 0,2 mM de piruvato de sódio, 10% (v/v) de soro fetal bovino (SFB), 10 ng/mL de fator de crescimento epidérmico (EGF), 10 ug/m de FSH, 10 µg/mL de LH, 10 ug/mL de estradiol e 100 µM de cisteamina; e nos grupos CILO0,3; CILO1 e CILO10, os oócitos foram maturados no meio do grupo CON, mas sem a adição de cisteamina e suplementado com as concentrações de 0,3; 1 e 10 µM, respectivamente. Após 24h, os oócitos foram avaliados quanto a presença ou não de células do cumulus e quanto ao grau de expansão e destinados à fecundação in vitro, em meio FIV, juntamente com espermatozoides. Após a FIV, os presumíveis zigotos seguiram para o cultivo in vitro. Foram avaliadas clivagens no dia 2, sendo dia 0 o dia do início do CIV. Os resultados foram expressos em porcentagem e as variáveis de expansão das células do cumulus e número de estruturas clivadas foram comparadas por meio do teste qui-quadrado do software Epi Info (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, EUA, 2021). Os resultados foram considerados significativos quando P<0,05. Em relação à expansão das células do cumulus, todos os grupos apresentaram 100% de expansão. Não houve diferenças significativas quanto ao grau de expansão das células do cumulus entre os grupos suplementados com cilostazol e cisteamina (P>0,05), assim como não houve diferenças significativas entre as taxas de clivagem entre os grupos suplementados com cilostazol e cisteamina (P > 0,05).
The objective of this study was to evaluate the effect of including cilostazol in the in vitro maturation medium of oocytes on the in vitro production of sheep embryos. Oocytes were collected from ovaries obtained from a slaughterhouse by follicular aspiration with a vacum pump. The oocytes were divided into four maturation groups: the CON group, where the cumulus-oocyte complexes were immersed in TCM-199 supplemented with 500 IU of penicillin, 0.5 mg of streptomycin, 1.25 µg of amphotericin, 0.2 mM of sodium pyruvate, 10% (v/v) fetal bovine serum (FBS), 10 ng/mL of epidermal growth factor (EGF), 10 µg/mL of FSH, 10 µg/mL of LH, 10 µg/mL of estradiol, and 100 µM of cysteamine; and in the CILO0.3, CILO1, and CILO10 groups, the oocytes were matured in the CON group medium without the addition of cysteamine and supplemented with concentrations of 0.3, 1, and 10 µM of cilostazol, respectively. After 24 hours, the oocytes were evaluated for the presence or absence of cumulus cells and the degree of expansion and then subjected to in vitro fertilization (IVF) with sperm in FIV medium. After IVF, the presumptive zygotes were cultured in vitro. Cleavage was evaluated on day 2, with day 0 being the start of IVF. Results were expressed as a percentage, and variables such as cumulus cell expansion and the number of cleaved structures were compared using the chi-square test in the Epi Info software (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, USA, 2021). Results were considered significant when P < 0.05. All groups showed 100% cumulus cell expansion, and there were no significant differences in cumulus cell expansion degree between the cilostazol- and cysteamine-supplemented groups (P > 0.05), as well as no significant differences in cleavage rates between the cilostazol- and cysteamine-supplemented groups (P > 0.05).
El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la inclusión de cilostazol en el medio de maduración in vitro de ovocitos sobre la producción in vitro de embriones ovinos. Para ello, se realizaron recolecciones de ovocitos provenientes de ovarios obtenidos en un matadero mediante el método de aspiración folicular con bomba de vacío. Los ovocitos se dividieron em cuatro grupos de maduración: grupo CON, donde los complejos cúmulus ovocitos se sumergieron en TCM-199, suplementado con 500 UI de penicilina, 0,5 mg de estreptomicina, 1,25 ug de anfotericina, 0,2 mM de piruvato de sodio, 10% (v/v) de suero fetal bovino (SFB), 10 ng/mL de factor de crecimiento epidérmico (EGF), 10 ug/m de FSH, 10 µg/mL de LH, 10 µg/mL de estradiol y 100 µM de cisteamina; y en los grupos CILO0,3; CILO1 y CILO10, los ovocitos se maduraron en el medio del grupo CON, pero sin la adición de cisteamina y suplementado con las concentraciones de 0,3; 1 y 10 µM, respectivamente. Después de 24 horas, los ovocitos se evaluaron en cuanto a la presencia o no de células del cúmulus y em cuanto al grado de expansión y se destinaron a la fecundación in vitro, en medio FIV, junto con espermatozoides. Después de la FIV, los presuntos cigotos siguieron para el cultivo in vitro. Se evaluaron las clivajes en el día 2, siendo el día 0 el día del início del CIV. Los resultados se expresaron en porcentaje y las variables de expansión de las células del cúmulos y número de estructuras clivadas se compararon mediante la prueba del chi-cuadrado del software Epi Info (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, EE. UU., 2021). Los resultados se consideraron significativos cuando P < 0,05. En relación a la expansión de las células del cúmulus, todos los grupos presentaron el 100% de expansión. No hubo diferencias significativas en cuanto al grado de expansión de las células del cúmulus entre los grupos suplementados con cilostazol y cisteamina (P > 0.05), así como no hubo diferencias significativas entre las tasas de clivaje entre los grupos suplementados con cilostazol y cisteamina (P>0,05).
Subject(s)
Animals , Sheep/physiology , Cysteamine/analysis , Cilostazol/administration & dosage , Cilostazol/analysis , Immunodeficiency Virus, Feline , In Vitro Oocyte Maturation Techniques/veterinaryABSTRACT
Background: The main transmission route of Chlamydia abortus is by ingesting the microorganism that has been eliminated in vaginal secretions, placental membranes or abortions that contaminate the environment and, possibly, through milk and colostrum. Elimination through vaginal secretions is well documented. However, there are no reports about isolation and identification of C. abortus in the colostrum or milk of infected sheep, so it is important to determine whether or not C. abortus may be present in these secretions, which are the only food of lambs. Objective: To detect C. abortus in colostrum, milk, and vaginal secretions of sheep with a history of reproductive disorders. Methods: Colostrum, milk, and vaginal exudates were collected from 66 sheep. The samples were inoculated in mouse fibroblast cell cultures and the presence of C. abortus determined by direct immunofluorescence. Results: 19 out of 66 colostrum samples (28.7%), 14 out of 66 milk samples (21.2%) and 17 out of 66 vaginal swabs (25.7%) were positive for C. abortus. The 50 samples positive for isolation and detected by immunofluorescence, together with 42 negative samples were subjected to qPCR to amplify a fragment of the ompA gene from C. abortus. Thirty-eight of the 92 samples processed by this technique were positive for C. abortus. Conclusion: The results demonstrated the presence of C. abortus in a high proportion in colostrum, milk and vaginal secretions of infected sheep. To the best of our knowledge, this is the first field study confirming the presence of C. abortus in colostrum, which shows that excretion of Chlamydia by lactogenesis could occur in the first hours after birth.
Antecedentes: La principal vía de transmisión de C. abortus es la ingestión del microorganismo que ha sido eliminado en las secreciones vaginales, membranas placentarias, abortos y, posiblemente, a través de la leche y el calostro. La eliminación a través de secreciones vaginales está bien documentada. Sin embargo, no existen reportes del aislamiento e identificación de C. abortus en el calostro o la leche de ovejas infectadas, por lo que es importante determinar si la bacteria puede o no estar presente en estas secreciones, que son el único alimento de los corderos. Objetivo: Detectar la presencia de C. abortus in calostro, leche y secreciones vaginales de ovejas con antecedentes de problemas reproductivos. Método: Con el propósito de aislar e identificar C. abortus en estas secreciones, se recolectó calostro, leche y exudado vaginal de 66 ovejas. Las muestras fueron inoculadas en cultivos celulares de fibroblastos de ratón y se determinó la presencia de la bacteria por inmunofluorescencia directa. Resultados: Fueron positivas 19 de 66 muestras de calostro (28,7%), 14 de 66 muestras de leche (21,2%) y 17 de 66 hisopos vaginales (25,7%). Las 50 muestras positivas al aislamiento y detectadas por inmunofluorescencia, junto con 42 negativas se sometieron a qPCR para amplificar un fragmento del gen ompA de C. abortus; 38 de las 92 muestras procesadas por esta técnica fueron positivas para C. abortus. Conclusión: Los resultados del presente estudio demostraron la presencia de C. abortus en una alta proporción en el calostro, la leche y las secreciones vaginales de ovejas infectadas. Este es el primer estudio de campo que confirma la presencia de C. abortus en calostro, lo que demuestra que la excreción de clamidia por lactogénesis podría ocurrir en las primeras horas después del nacimiento.
Antecedentes: A principal via de transmissão da Chlamydia abortus é a ingestão do microrganismo que foi eliminado nas secreções vaginais, membranas placentárias ou abortos que contaminam o meio ambiente e, possivelmente, através do leite e colostro. A eliminação pelas secreções vaginais está bem documentada. No entanto, não há relatos de isolamento e identificação de C. Abortus no colostro ou leite de ovelhas infectadas, por isso é importante verificar se a bactéria pode estar ou não presente nessas secreções, único alimento dos cordeiros. Objetivo: Detectar a presença de C. Abortus no colostro, leite e secreções vaginais de ovelhas com histórico de distúrbios reprodutivos Métodos: Para isolar e identificar C. Abortus nessas secreções, foram coletados colostro, leite e exsudato vaginal de 66 ovelhas. As amostras foram inoculadas em cultura de células de fibroblastos de camundongo e a presença da bactéria determinada por imunofluorescência direta. Resultados: 19 de 66 amostras de colostro (28,7%), 14 de 66 amostras de leite (21,2%) e 17 de 66 esfregaços vaginais (25,7%) sendo positivos. As 50 amostras positivas para isolamento e detectadas por imunofluorescência, juntamente com as 42 negativas, foram submetidas a qPCR para amplificar um fragmento do gene ompA de C. Abortus. Trinta e oito das 92 amostras processadas por esta técnica foram positivas para C. Abortus. Conclusão: Os resultados do presente estudo demonstraram a presença de C. Abortus em alta proporção no colostro, leite e secreções vaginais de ovelhas infectadas. Este trabalho é o primeiro estudo de campo na literatura científica confirmando a presença de C. Abortus no colostro, o que mostra que a excreção da clamídia por lactogênese pode ocorrer nas primeiras horas após o nascimento.
ABSTRACT
Abstract Introduction In surgical training, large animal models are more suitable as their anatomy is more similar to humans. In otology, there have been relatively few studies about large animal models for surgical training. Objective In this study, we aimed to do a neuroradiologic evaluation and surgical insertion of a cochlear implant electrode array on a sheep head model. Methods Twenty cadaveric sheep heads were studied. A computed tomography scan and neuroradiologic evaluation was performed on each head, obtaining measurements of the inner ear for each sheep. Sheep measurements were compared to those from temporal bone computed tomography scans from 20 female humans. Surgical procedures were first trained with 13 of the sheep temporal bones, after which cochlear implantation was performed on the remaining 7 temporal bones. The position of the inserted electrode array insertion was confirmed by computed tomography scan after the procedure. Results Neuroradiologic evaluation showed that, relative to the 20 female humans, the mean ratio for sheep was 0.60 for volume of cochlea, 0.70 for height of cochlea, 0.73 for length of cochlea; ratios for other metrics were >0.80. For the surgical training, the round window was found in all 20 sheep temporal bones. Computed tomography scans confirmed that electrode insertions were fully complete; the mean value of electrode array insertion was 18.3 mm. Conclusion The neuroradiologic and surgical training data suggest that the sheep is a realistic animal model to train cochlear implant surgery and collection of perilymph samples, but less so for surgical training of mastoidectomy due to pneumatization of the mastoid.
Resumo Introdução No treinamento cirúrgico, os modelos animais de grande porte são mais adequados, pois sua anatomia é mais semelhante à humana. Em otologia, existem relativamente poucos estudos com modelo animal de grande porte para treinamento cirúrgico. Objetivo Fazer a avaliação neurorradiológica e a inserção cirúrgica de um eletrodo de implante coclear em um modelo de ovelha. Método Vinte cabeças de cadáveres de ovelhas foram estudadas. Foram feitas tomografia computadorizada e avaliação neurorradiológica de cada cabeça, obtiveram‐se medidas da orelha interna de cada ovelha. As medidas das ovelhas foram comparadas às de tomografias computadorizadas do osso temporal de 20 mulheres. Os procedimentos cirúrgicos foram inicialmente treinados com 13 dos ossos temporais de ovelhas, após o qual o implante coclear foi feito nos 7 ossos temporais restantes. A posição de inserção do arranjo de eletrodos foi confirmada por tomografia computadorizada após o procedimento. Resultados A avaliação neurorradiológica mostrou que, em comparação às 20 mulheres, a proporção média para as ovelhas foi de 0,60 para o volume da cóclea, 0,70 para a altura da cóclea, 0,73 para o comprimento da cóclea; as proporções para as outras medidas foram > 0,80. Em relação ao treinamento cirúrgico, a janela redonda foi encontrada em todos os 20 ossos temporais de ovelhas. A tomografia computadorizada confirmou que as inserções dos eletrodos foram totalmente completas; o valor médio da inserção do arranjo de eletrodos foi de 18,3 mm. Conclusão Os dados do treinamento neurorradiológico e cirúrgico sugerem que a ovelha é um modelo animal realista para o treinamento da cirurgia de implante coclear e coleta de amostras da perilinfa, mas não tão realista para o treinamento cirúrgico de mastoidectomia devido à pneumatização da mastoide.
ABSTRACT
Abstract Gastrointestinal nematodes are responsible for great economic losses in sheep raising, and their control has long been carried out almost exclusively by the administration of anthelmintics, which have led to serious resistance problems. In the search for alternative control measures, phytotherapic research is highlighted. The aim of this study was to evaluate the action of Anethum graveolens (dill) essential oil on different stages of Haemonchus contortus life cycle, as well its cytotoxicity MDBK (Madin-Darby bovine kidney) cells. H. contortus larvae and eggs were obtained from infected sheep feces, and essential oil extracted from plant seeds through the Clevenger apparatus. 9.4, 4.7, 2.35, 1.17. 0.58 and 0.29 mg/mL concentrations were evaluated. The Egg Hatch Inhibition (HI), Larval Development Inhibition (LDI) and Larval Migration Inhibition (LMI) techniques were used. Thybendazole 0.025 mg/mL in HI and Levamisole 0.02 mg/mL in the LDI and LMI tests were used as positive controls, while distilled water and a Tween 80 solution were used as positive negative controls. The inhibition results obtained for the highest oil concentration were: HI 100%, LDI 98.58% and LMI 63.7%, differing ( <0.05) from negative controls. Main A. graveolens oil components present in 95.93% of the total oil were Dihydrocarvone (39.1%), Carvone (22.24%), D-Limonene (16.84%), Apiol (10.49%) and Trans-dihydrocarvone (7.26%). Minimum A. graveolens essential oil concentrations required to inhibit 50% (IC50) of egg hatching, larval development and larval migration were 0.006 mg/mL, 2.536 mg/mL and 3.963 mg/mL, respectively. Cell viability in MDBK (Madin-Darby bovine kidney) cells, when incubated with A. graveolens essential oil, was 86% for the highest (9.4 mg/mL) and 99% for the lowest concentration (0.29 mg/mL). A. graveolens essential oil, according to the results obtained in this study, is a promising alternative in sheep gastrointestinal nematode control.
Resumo Os nematoides gastrintestinais são responsáveis por grandes perdas econômicas na ovinocultura, e seu controle tem sido realizado quase exclusivamente pela administração de anti-helmínticos, que levaram a sérios problemas de resistência. Na busca de medidas alternativas de controle, destaca-se a pesquisa fitoterápica. O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação do óleo essencial de Anethum graveolens (endro) em diferentes estágios de Haemonchus contortus, bem como testar a viabilidade celular para o óleo. Larvas e ovos de H. contortus foram obtidos de fezes de ovinos infectados e óleo essencial extraído de sementes de plantas através do aparelho de Clevenger. As concentrações avaliadas foram 9,4, 4,7, 2,35, 1,17, 0,58 e 0,29 mg/mL. Verificou-se a Inibição de eclosão dos ovos (IE), Inibição de Desenvolvimento Larval (IDL) e Inibição de Migração Larval (IML). Tiabendazol 0,025 mg/mL em IE e Levamisole 0.02 mg/mL nos testes IDL e IML foram usados como controles positivos, enquanto água destilada e uma solução Tween 80 foram usados como controles negativos. Os resultados de inibição obtidos para a maior concentração de óleo foram: IE 100%, IDL 98,58% e IML 63,7%, diferindo ( <0,05) dos controles negativos. Os principais componentes presentes em 95,93% do óleo total de A. graveolens foram Di-hidrocarvona (39,1%), Carvona (22,24%), D-Limoneno (16,84%), Apiol (10,49%) e Trans-di-hidrocarvona (7,26%). As concentrações mínimas de óleo essencial de A. graveolens necessárias para inibir 50% (IC50) de eclosão dos ovos, desenvolvimento larval e migração larval foram de 0,006 mg/mL, 2,536 mg/mL e 3,963 mg/mL, respectivamente. A viabilidade celular nas células MDBK (rim bovino Madin-Darby), quando incubadas com o óleo essencial de A. graveolens, foi de 86% para a maior (9,4 mg/mL) e 99% para a menor concentração (0,29 mg/mL). O óleo essencial de A. graveolens mostrou ser uma alternativa promissora no controle de nematoides gastrintestinais de ovinos.
Subject(s)
Animals , Oils, Volatile/pharmacology , Anethum graveolens , Haemonchus , Anthelmintics/pharmacology , Cattle , Sheep , Plant Extracts/pharmacology , LarvaABSTRACT
Abstract The aim of this study was to evaluate the seroprevalence and factors associated with the presence of anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies in sheep from Paraná state. The detection of antibodies for T. gondii and N. caninum was performed by homemade and commercial indirect ELISA, respectively. Multiple logistic regression analysis was used to verify the factors associated with the seroprevalence. Antibodies anti-T. gondii and anti-N. caninum were observed in 42.7% and in 17.6% of the animals, respectively. The protective factors associated to seropositive were "some level of confinement" (full or semi-extensive confinement) (OR=0.53) for T. gondii and "use of skilled labor" (OR=0.64) for N. caninum. The risk factors were "presence of cats" (OR=1.75) for T. gondii and "feeding of dogs with sheep placental remains" (OR=1.79) for N. caninum. In addition, to presenting a significant and simultaneous seroprevalence for both agents (9.9% of the animals), the results also indicate that deficiencies in management and environmental sanitation, the presence of reservoirs, and types of exploitation enhance the seropositivity. Thus, studies like this might support sanitary programs and public policies for the prevention of T. gondii and N. caninum in the sheep herds of Paraná state.
Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar a soroprevalência e os fatores de risco associados à presença de anticorpos contra Toxoplasma gondii e Neospora caninum em ovinos do Paraná. A detecção dos anticorpos para T. gondii e N. caninum foi realizada, usando-se testes de ELISA indireto caseiro e comercial, respectivamente. A análise de regressão logística múltipla foi usada para verificar os fatores de risco associados à soroprevalência. Anticorpos anti-T. gondii e anti-N. caninum foram observados em 42,7% e em 17,6% dos animais, respectivamente. Os fatores de proteção associados à soropositividade foram "algum nível de confinamento (confinamento ou semiextensivo)" (OR=0,53) para T. gondii e "presença de mão de obra especializada" para N. caminum (OR=0,64). Os fatores de risco foram "presença de gatos" para T. gondii (OR=1,75) e "alimentação de cães com resíduos placentários" (OR=1,79) para N. caninum. Além de apresentar uma significante e simultânea soroprevalência para ambos os agentes (9,9% dos animais), os resultados também indicam que as deficiências em gestão e saneamento ambiental, a presença de reservatórios e os tipos de exploração favorecem a soropositividade. Dessa forma, estudos como estes podem auxiliar em programas sanitários e políticas públicas para a prevenção de T. gondii e N. caninum nos rebanhos ovinos do Paraná.
Subject(s)
Animals , Female , Pregnancy , Cats , Dogs , Sheep Diseases/diagnosis , Sheep Diseases/epidemiology , Cat Diseases , Coccidiosis/veterinary , Neospora , Dog Diseases , Toxoplasma , Brazil/epidemiology , Sheep , Antibodies, Protozoan , Seroepidemiologic Studies , Toxoplasmosis, Animal/diagnosis , Toxoplasmosis, Animal/epidemiology , PrevalenceABSTRACT
This study aimed to evaluate the neutrophil oxidative metabolism and phagocytosis of Zymonsan particles of primiparous and pluriparous Lacaune ewes during the first 30 days after lambing. A total of 20 ewes were evaluated, 10 primiparous (GPR) and 10 pluriparous (GPL). Evaluation of basal oxidative metabolism was performed using the nitroblue tetrazolium (NBT) technique, stimulating neutrophil phagocytosis with Zymosan particles. Blood samples were collected at parturition day (M1) and 1, 3, 7, 15 and 30 days after parturition, corresponding to M2, M3, M4, M5 and M6, respectively. In relation to the groups, GPR presented lower oxidative basal metabolism neutrophils in M1 compared to M4, in M3 with M1, M2, M4 and M5. In M4 and M5 differences were found at all times and in M6 with M4 and M5. Higher percentage of neutrophils than phagocytes were found in M4, M5 and M6 than in M1 and M2 in GPL animals. At all times GPR presented a lower percentage of phagocytosis than GPL. Thus it is concluded that the immune response in pluriparous sheep was more efficient than in primiparous sheep.(AU)
Subject(s)
Animals , Female , Phagocytosis , Sheep/blood , Metabolism , Neutrophils/physiology , Postpartum Period/bloodABSTRACT
Com o objetivo avaliar a qualidade microbiológica do leite de ovelha in natura, coletaram-se mensalmente amostras de leite do tanque de expansão ou tarros, em quatro unidades produtivas (UP). Não foi evidenciada a presença de Salmonella contudo, isolaram-se E. coli (3 UP), S. aureus e L. murrayi (1 UP). Observaram-se coágulos homogêneos (38,7%) (sugestivo de bactérias láticas) e sem líquido (38,7%) (indicativo da presença de inibidores bacterianos). O teste de redutase indicou a maioria (54,8%) das amostras com qualidade muito boa e a contagem média de mesófilos foi 2x107UFC/mL e de coliformes termotolerantes de 2x106 UFC/mL. Os microrganismos isolados, assim como os resultados das provas de lactofermentação e redutase, foram indicativos da adoção de práticas de higiene ineficientes das instalações ou do sistema de ordenha, passíveis de correção por meio de manejo adequado.
Subject(s)
Animals , Bacterial Load , Milk/microbiology , Food Microbiology , Sheep , Food QualityABSTRACT
A fim de se avaliar o uso do óleo essencial de Croton nepetifolius Baill (OECn) na penetrabilidade cervical em ovelhas mestiças, 40 ovelhas foram distribuídas ao acaso em quatro grupos (n=10): controle, misoprostol, OECn50 e OECn100 (50 e 100µg do OECn, respectivamente). Após a sincronização do estro, utilizando CIDR e eCG (200UI), a profundidade de penetração da cérvix foi mensurada utilizando-se uma pipeta de inseminação artificial de bovino graduada, no período de zero até 72h após a retirada do CIDR. Os resultados foram expressos em média ± erro-padrão, submetidos à ANOVA seguida do teste de Tukey, enquanto os dados, em porcentagem, foram submetidos aos testes de Fisher ouqui-quadrado. Nenhuma diferença significativa (P>0,05) foi encontrada quanto ao grau de penetrabilidade cervical. Quanto ao tempo de passagem, os grupos misoprostol e OECn100 apresentaram um menor tempo de penetrabilidade às 60h(1,7±0,6 e 1,5±0,6min, respectivamente), quando comparados ao grupo controle (4,1±0,6min), que não diferiu significativamente do grupo OECn50 (2,3±0,6min). Portanto, o óleo essencial de Croton nepetifolius Baill pode ser utilizado para encurtar o tempo de penetrabilidade cervical em ovelhas submetidas à sincronização estral.(AU)
In order to evaluate the use of the essential oil of Croton nepetifolius Baill (EOCn) on cervical penetration in crossbred ewes, 40 ewes were randomly allocated into four groups (n= 10): CONTROL, MISOPROSTOL, EOCn50 and EOCn100 (50 e 100µg of the EOCn, respectively). After estrus synchronization, using CIDR and eCG (200IU), depth of cervical penetration was measured using artificial insemination gun for bovine species which was graduated and used from 0 to 72h after CIDR removal. Results were expressed as mean ± standard error mean, submitted to ANOVA and Tukey test while data in percentage were submitted to Fisher or Chi-Square test. No significant difference (P> 0.05) was observed at grade of cervical penetration. Concerning trespassing time, MISOPROTOL and EOCn100 groups presented a lower trespassing time at 60h (1.7±0.6 and 1.5±0.6min, respectively) than CONTROL group (4.1±0.6min), which did not differ significantly from EOCn50 (2.3±0.6min) group. Therefore, the essential oil of Croton nepetifolius Baill can be used to shorten the cervical penetration time in estrus synchronized ewes.(AU)
Subject(s)
Animals , Female , Pregnancy , Estrus , Sheep , Euphorbiaceae , Parturition , Estrus SynchronizationABSTRACT
This study evaluated the effect of Morus nigra leaf extract, with or without supplementation, on morphology, activation and DNA damage of preantral follicles cultured within sheep ovarian tissue. Ovaries were collected and divided into fragments, being one fixed for histological and Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) analysis (fresh control). The remaining fragments were cultured for 7 days in alpha minimum essential media (α-MEM) supplemented with bovine serum albumin (BSA), insulin, transferrin, selenium, glutamine, hypoxanthine and ascorbic acid (α-MEM+; control medium) or into medium composed of M. nigra extract without supplements (0.1; 0.2 or 0.4mg/mL) or supplemented with the same substances described above for α-MEM+ (MN 0.1+; 0.2+ or 0.4+mg/mL). Then, tissues were destined to histological and TUNEL analysis. The α-MEM+ treatment had more morphologically normal follicles than all M. nigra extract treatments. However, α-MEM+ treatment also showed signs of atresia because the percentage of TUNEL positive cells was similar in α-MEM+ and in 0.1mg/mL M. nigra without and with supplements. Moreover, a reduction in the primordial follicles and an increase in the growing ones were observed in all treatments, except 0.2mg/mL M. nigra. In conclusion, the follicles cultured at 0.1mg/mL M. nigra extract were in good condition and able to continue their development, as demonstrated by the same rates of DNA damage and follicular activation as the control medium.(AU)
Este estudo avaliou o efeito do extrato das folhas de Morus nigra, com ou sem suplementos, sobre a morfologia, a ativação e o dano ao DNA de folículos pré-antrais cultivados inclusos em tecido ovariano. Os ovários foram coletados e divididos em fragmentos, sendo um fixado para análise histológica e ensaio de marcação de terminações dUTP mediada por desoxinucleotidil transferase terminal (TUNEL) (controle fresco). Os fragmentos restantes foram cultivados durante 7 dias em meio essencial mínimo alfa (α-MEM) suplementado com albumina sérica bovina (BSA), insulina, transferrina, selênio, glutamina, hipoxantina e ácido ascorbico (α-MEM+; meio controle) ou em meio composto de extrato de M. nigra sem suplementos (0,1; 0,2 or 0,4mg/mL) ou suplementado com as mesmas substâncias descritas para α-MEM+ (MN 0,1+; 0,2+ or 0,4+mg/mL). Então, os tecidos foram destinados à análise histológica e TUNEL. O tratamento do α-MEM+ apresentou mais folículos morfologicamente normais que todos os tratamentos do extrato de M. nigra. No entanto, o tratamento com α-MEM+ também mostrou sinais de atresia, pois a porcentagem de células TUNEL positivas foi semelhante em α-MEM+ e em 0,1mg/mL M. nigra sem e com suplementos. Além disso, observou-se uma redução nos folículos primordiais e um aumento nos folículos em crescimento em todos os tratamentos, exceto 0,2mg/mL M. nigra. Em conclusão, os folículos cultivados com 0,1mg/mL de extrato de M. nigra estavam em boas condições e aptos a continuar seu desenvolvimento, como demonstrado pelas taxas de dano ao DNA e de ativação folicular semelhantes ao meio controle.(AU)
Subject(s)
Animals , Female , Oocytes/growth & development , Ovary/cytology , DNA Damage , Sheep , Morus , Ovarian Follicle , In Vitro TechniquesABSTRACT
ABSTRACT: The aim of the present research was to evaluate differences in chemical properties and physical structure of yoghurt produced with milk from different species (sheep, cow, and goat). For each trial, whole raw sheep (S), cow (C), and goat (G) milk were used to manufacture 4L of yoghurts (Y) from each species (SY, CY, and GY, respectively). The SY demonstrated the greatest (P<0.05) values of total solids, protein, and lipid contents, reflecting on greater (P<0.05) firmness, apparent viscosity and water-holding capacity, and lower (P<0.05) syneresis index than CY and GY. Consequently, SY exhibited a more compact microstructure and homogeneous matrix with fewer pores. Furthermore, CY and GY microstructure contained a greater number of pores, which exhibited greater size heterogeneity than SY. Therefore, based on the evaluated physicochemical and microstructural properties of yoghurt, SY demonstrated the most desirable parameter values for dairy industry representing an alternative substitution for cow's milk yogurt.
RESUMO: O objetivo da presente pesquisa foi avaliar as diferenças nas propriedades químicas e na estrutura física do iogurte produzido com leite de diferentes espécies (ovinos, bovinos e caprinos). Para cada experimento, leite de ovelha cru (S), vaca (C) e cabra (G), foram usados para fabricar 4L de iogurtes (Y) de cada espécie (SY, CY e GY, respectivamente). O SY demonstrou os maiores (P<0,05) valores de sólidos totais, proteína e conteúdo lipídico, refletindo em maior (P<0,05) firmeza, viscosidade aparente e capacidade de retenção de água e menor (P<0,05) índice de sinérese do que CY e GY. Consequentemente, o SY exibiu uma microestrutura mais compacta e uma matriz homogênea com menos poros. Além disso, a microestrutura CY e GY continha um maior número de poros, que exibiam maior heterogeneidade de tamanho do que o SY. Portanto, com base nas propriedades físico-químicas e micro estruturais avaliadas do iogurte, o SY demonstrou os valores de parâmetros mais desejáveis para a indústria de laticínios, representando uma alternativa de produto adequada aos iogurtes à base de leite de vaca.
ABSTRACT
Polymorphisms in the BMP-15 gene related to Galway (FecXG) and Inverdale (FecXI) and in the BMPR-1B gene known as Booroola (FecB) mutations were investigated using the Polymerase Chain Reaction - Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) method, on sheep from the breeds Santa Inês (n= 574) and Morada Nova (n=282). DNA was extracted and amplified through PCR with specific primers that introduced a restriction site in association with the mutation. The PCR products were submitted to endonucleases. The experiment found no FecXG and FecXI mutations. Six samples of animals with multiple offspring/birth history presented polymorphism for FecB similar to control samples, but this pattern was not confirmed by nucleotide sequencing. Although the absence of these mutations in the studied breeds, other factors related to prolificacy should be investigated to explain the inherent prolificity mechanisms.(AU)
Polimorfismos Galway (Fec XG ) e Inverdale (Fec XI), relacionados ao gene BMP-15, e Booroola (FecB), localizado no gene BMPR-1B, foram investigados usando-se a técnica de reação em cadeia da polimerase - polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrição (PCR-RFLP), em ovelhas Santa Inês (n= 574) e Morada Nova (n=282). O DNA foi extraído e amplificado por PCR com iniciadores específicos, que introduziram um sítio de restrição associado à mutação, em seguida os amplicons foram submetidos à ação de endonucleases. Não foram observadas as mutações Fec XG e Fec XI nas amostras estudadas. Amostras de seis animais com histórico de partos gemelares apresentaram polimorfismo para FecB semelhantes às amostras controle, mas esse padrão não foi confirmado pelo sequenciamento de nucleotídeos. Apesar da ausência dessas mutações nos animais das raças estudadas, outros fatores relacionados à prolificidade devem ser pesquisados para explicar os mecanismos da alta prolificidade desses animais.(AU)
Subject(s)
Animals , Polymorphism, Genetic , Sheep/genetics , Polymerase Chain Reaction/veterinary , Polymorphism, Restriction Fragment LengthABSTRACT
Abstract The aims of this study were to diagnose coenurosis by means of computerized tomography (CT) scan imaging and molecular characterization of the CO1 gene using the polymerase chain reaction (PCR). Sheep and calves were necropsied, and CT scans on the cephalic region were performed on the animals. Sections of brain tissue infected with parasites were then stained with hematoxylin and eosin for microscopic examination. Material collected from brain cysts was fixed in 70% ethanol. PCR amplification was carried out using the CO1 mitochondrial gene. A total of 60 calves and 80 sheep were examined clinically and, of these, 15 calves and 38 sheep showed signs of depression, with counterclockwise circling movements and altered head carriage. Four sheep and one calf were necropsied, and C. cerebralis cysts were detected in all of them. A hypodense cyst was monitored in the right cerebellar hemisphere on a CT scan on one sheep. A cyst was found in the left frontal lobe on a CT scan on one calf. Microscopically, C. cerebralis cysts were surrounded by a fibrous or epithelial wall that presented necrosis on cerebral sections of both the sheep and the cattle. The CO1-PCR assay yielded a 446 bp band, which was sequenced and phylogenetically analyzed: the results confirmed the presence of T. multiceps. This study reports the first use of CT imaging on naturally infected calves and sheep for diagnosing coenurosis.
Resumo Os objetivos deste estudo foram diagnosticar cenurose por tomografia computadorizada (CT) por imagem de digitalização e caracterização molecular do gene CO1, usando a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Ovelhas e bezerros foram necropsiados, e uma tomografia computadorizada da região cefálica foi realizada nos animais. Em seguida, cortes microscópicos de cérebro infectado com parasitas foram corados com hematoxilina e eosina e posterior avaliação ao microscópio de luz. Em seguida, o material recolhido de cada cisto cerebral foi fixado em etanol a 70%. A amplificação pela PCR foi realizada utilizando-se o gene mitocondrial CO1. Um total de 60 bezerros e 80 ovelhas foram clinicamente examinados e, desses, 15 bezerros e 38 ovelhas apresentaram sinais de depressão, com movimentos circulares em sentido anti-horário, e desvio da cabeça. Quatro carneiros e uma vitela foram necropsiados, e cistos de C. cerebralis foram detectados nos animais. Um cisto hipodenso foi monitorado no hemisfério cerebelar direito por imagem do CT de um carneiro. O cisto foi encontrado no lobo frontal esquerdo por imagem do CT de um bezerro. Microscopicamente, cistos de C. cerebralis foram envolvidos por uma parede fibrosa ou epitelial, apresentando necrose em ambos os cortes cerebrais de ovinos e de bovinos. O ensaio CO1-PCR produziu uma banda de 446 pb, sequenciado e submetido à filogenia, confirmou ser T. multiceps. Este estudo relata a primeira utilização de imagens de CT em bezerros e ovelhas naturalmente infectados para o diagnóstico de coenurosis.
Subject(s)
Animals , Cattle , Sheep Diseases/diagnostic imaging , Taenia/isolation & purification , Cattle Diseases/diagnostic imaging , Neurocysticercosis/veterinary , Sheep Diseases/genetics , Taenia/genetics , Sheep , Tomography, X-Ray Computed/veterinary , Cattle Diseases/genetics , Neurocysticercosis/genetics , Neurocysticercosis/diagnostic imagingABSTRACT
Abstract Gastrointestinal nematodes are responsible for great economic losses in sheep raising, and their control has long been carried out almost exclusively by the administration of anthelmintics, which have led to serious resistance problems. In the search for alternative control measures, phytotherapic research is highlighted. The aim of this study was to evaluate the action of Anethum graveolens (dill) essential oil on different stages of Haemonchus contortus life cycle, as well its cytotoxicity MDBK (Madin-Darby bovine kidney) cells. H. contortus larvae and eggs were obtained from infected sheep feces, and essential oil extracted from plant seeds through the Clevenger apparatus. 9.4, 4.7, 2.35, 1.17. 0.58 and 0.29 mg/mL concentrations were evaluated. The Egg Hatch Inhibition (HI), Larval Development Inhibition (LDI) and Larval Migration Inhibition (LMI) techniques were used. Thybendazole 0.025 mg/mL in HI and Levamisole 0.02 mg/mL in the LDI and LMI tests were used as positive controls, while distilled water and a Tween 80 solution were used as positive negative controls. The inhibition results obtained for the highest oil concentration were: HI 100%, LDI 98.58% and LMI 63.7%, differing ( 0.05) from negative controls. Main A. graveolens oil components present in 95.93% of the total oil were Dihydrocarvone (39.1%), Carvone (22.24%), D-Limonene (16.84%), Apiol (10.49%) and Trans-dihydrocarvone (7.26%). Minimum A. graveolens essential oil concentrations required to inhibit 50% (IC50) of egg hatching, larval development and larval migration were 0.006 mg/mL, 2.536 mg/mL and 3.963 mg/mL, respectively. Cell viability in MDBK (Madin-Darby bovine kidney) cells, when incubated with A. graveolens essential oil, was 86% for the highest (9.4 mg/mL) and 99% for the lowest concentration (0.29 mg/mL). A. graveolens essential oil, according to the results obtained in this study, is a promising alternative in sheep gastrointestinal nematode control.
Resumo Os nematoides gastrintestinais são responsáveis por grandes perdas econômicas na ovinocultura, e seu controle tem sido realizado quase exclusivamente pela administração de anti-helmínticos, que levaram a sérios problemas de resistência. Na busca de medidas alternativas de controle, destaca-se a pesquisa fitoterápica. O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação do óleo essencial de Anethum graveolens (endro) em diferentes estágios de Haemonchus contortus, bem como testar a viabilidade celular para o óleo. Larvas e ovos de H. contortus foram obtidos de fezes de ovinos infectados e óleo essencial extraído de sementes de plantas através do aparelho de Clevenger. As concentrações avaliadas foram 9,4, 4,7, 2,35, 1,17, 0,58 e 0,29 mg/mL. Verificou-se a Inibição de eclosão dos ovos (IE), Inibição de Desenvolvimento Larval (IDL) e Inibição de Migração Larval (IML). Tiabendazol 0,025 mg/mL em IE e Levamisole 0.02 mg/mL nos testes IDL e IML foram usados como controles positivos, enquanto água destilada e uma solução Tween 80 foram usados como controles negativos. Os resultados de inibição obtidos para a maior concentração de óleo foram: IE 100%, IDL 98,58% e IML 63,7%, diferindo ( 0,05) dos controles negativos. Os principais componentes presentes em 95,93% do óleo total de A. graveolens foram Di-hidrocarvona (39,1%), Carvona (22,24%), D-Limoneno (16,84%), Apiol (10,49%) e Trans-di-hidrocarvona (7,26%). As concentrações mínimas de óleo essencial de A. graveolens necessárias para inibir 50% (IC50) de eclosão dos ovos, desenvolvimento larval e migração larval foram de 0,006 mg/mL, 2,536 mg/mL e 3,963 mg/mL, respectivamente. A viabilidade celular nas células MDBK (rim bovino Madin-Darby), quando incubadas com o óleo essencial de A. graveolens, foi de 86% para a maior (9,4 mg/mL) e 99% para a menor concentração (0,29 mg/mL). O óleo essencial de A. graveolens mostrou ser uma alternativa promissora no controle de nematoides gastrintestinais de ovinos.
ABSTRACT
The expression of milk proteins in vitro is essential to exploit the mammary gland cells as a biological model. Enzymatic tissue disaggregation has been widely used to establish mammary cell culture, but its effect in long-term ovine mammary cell culture is not completely elucidated. This study aimed at comparing mechanical/enzymatic and mechanical dissociation methods to establish ovine mammary cell culture. We compared cellular differentiation induced by lactating ewe serum or fetal bovine serum based on the gene expression levels of milk proteins (beta-lactoglobulin, alpha s1-casein, and betacasein). Mechanically dissociated cells were positive immunostaining for cytokeratin 8.13, such as mammary epithelial cells. These cells are responsible for milk protein expression and they are low immunostaining for vimentin, mesenchymal marker. Mechanical/enzymatic dissociation cells were positive for vimentin. The fastest cell growth (cell/hour) was observed in the mechanical dissociation group cultured with 10% fetal bovine serum medium. Mechanically and mechanically/enzymatically derived cells were able to express beta-casein and beta-lactoglobulin, but not alpha s1-casein. The relative expression of beta-lactoglobulin was not affected by the tissue dissociation method or culture media, beta-casein relative expression was down regulated in mechanically dissociated cells cultured in the presence of lactating ewe serum, (P = 0.019). Beta-casein relative expression was also down regulated in mechanically/enzymatically dissociated cells cultured with fetal bovine serum (P = 0.021). In the present conditions, we conclude that mechanical dissociation followed by culture with 10% of fetal bovine serum was the most efficient method to induce milk proteins' mRNA expression by ovine mammary epithelial cells in vitro.(AU)
A expressão in vitro de proteínas do leite é essencial para explorar as células da glândula mamária como um modelo biológico. A desagregação tecidual via enzimática é amplamente utilizada para o estabelecimento cultivo de células mamárias. No entanto, seu efeito a longo prazo no cultivo de células da glândula mamária ovina ainda não é bem elucidado. Este estudo tem como objetivo comparar dois métodos de dissociação tecidual, mecânico/enzimático e mecânico, para estabelecer cultivo celular de glândula mamária ovina. A indução da diferenciação celular, por adição de soro de ovelha lactante ou soro fetal bovino, foi avaliada pelos níveis de expressão de proteínas do leite (beta-lactoglobulina, alpha s1-caseína e beta-caseína). Células mecanicamente dissociadas foram positivamente marcadas para a presença de citoqueratina 8.13, marcador para células epiteliais mamárias. Essas células são as responsáveis pela produção das proteínas do leite e são pouco marcadas para a presença de vimentina, marcador para células de origem mesenquimal. Já as células obtidas da dissociação mecânica/ enzimática foram positivamente marcadas para presença de vimentina. A maior velocidade de crescimento (células/hora) foi observado para o grupo com dissociação mecânica cultivado em meio com 10% de soro fetal bovino. As células obtidas tanto da dissociação mecânica quanto mecânica/enzimática foram capazes de expressar beta-lactoglobulina e beta-caseína, mas não alfa s1-caseína. A expressão relativa de beta-lactoglobulina não foi afetada pelo método de dissociação ou meio de cultivo. A expressão relativa da beta-caseína foi negativamente regulada para células mecanicamente dissociadas e cultivadas na presença de soro de ovelha lactante (P = 0,019). A expressão relativa da beta-caseína também foi negativamente regulada para células dissociadas de forma mecânica/enzimática e cultivadas com soro fetal bovino (P = 0,021). Nas condições do presente estudo, concluímos que o método de dissociação mecânica seguido pelo cultivo em meio com 10% de soro fetal bovino foi o método mais eficiente para induzir a expressão mRNA de proteínas do leite por células epiteliais mamárias ovinas in vitro.(AU)
Subject(s)
Animals , Female , Caseins/analysis , Lactoglobulins/analysis , Mammary Glands, Animal/cytology , Milk Proteins/analysis , Sheep , Cell Culture Techniques/veterinaryABSTRACT
O Pecorino é um dos queijos mais conhecidos e antigos do mundo e é produzido com leite de ovelha. No Brasil, o leite desta espécie é utilizado, principalmente, na fabricação de queijo. O objetivo do presente estudo foi determinar a aceitabilidade e a intenção de compra do queijo tipo Pecorino produzido em Santa Catarina, Brasil. Para tanto, dois produtos (QUEIJO1 produzido com leite ovino pasteurizado e sob Inspeção Federal; QUEIJO2 produzido com leite ovino não pasteurizado e sob inspeção estadual) foram oferecidos a 68 avaliadores não treinados. A maioria (58,8%) dos avaliadores gostou muito do Queijo 1 e, em menor proporção, gostou (37,9%) do Queijo 2. Da mesma forma, 50% e 41,2% dos avaliadores certamente comprariam os produtos 1 e 2, respectivamente. O Queijo1 obteve maior aceitabilidade e intenção de compra. Pode-se concluir que a decisão de compra de um produto está diretamente relacionada à aceitabilidade do mesmo.
Pecorino is one of the most known and ancient cheese of the world and it is produced with ewe milk. In Brazil, the milk of this specie is used in the manufacturing cheese, mainly. The aim of this study was to determine the acceptability and purchase intention of the Pecorino cheese produced in Santa Catarina, Brazil. For that purpose, two products (CHEESE1 - produced with pasteurized ewe milk and under Federal Inspection; CHEESE2 - produced with non-pasteurized ewe milk and under State Inspection) were offered to 68 non-trained evaluators. Most of the evaluators (58.8%) really liked Cheese 1 and, to a lesser extent, liked (37.9%) Cheese 2. Similarly, 50% and 41.2% of the evaluators surely would buy the products 1 and 2, respectively. Cheese 1 had higher acceptability and purchase intention. We could conclude that the decision to purchase a product is directly related to its acceptability.