Development of a Recombinase-aided Amplification Combined With Lateral Flow Dipstick Assay for the Rapid Detection of the African Swine Fever Virus / 生物医学与环境科学（英文）

OBJECTIVE@#To establish a sensitive, simple and rapid detection method for African swine fever virus (ASFV) B646L gene.@*METHODS@#A recombinase-aided amplification-lateral flow dipstick (RAA-LFD) assay was developed in this study. Recombinase-aided amplification (RAA) is used to amplify template DNA, and lateral flow dipstick (LFD) is used to interpret the results after the amplification is completed. The lower limits of detection and specificity of the RAA assay were verified using recombinant plasmid and pathogenic nucleic acid. In addition, 30 clinical samples were tested to evaluate the performance of the RAA assay.@*RESULTS@#The RAA-LFD assay was completed within 15 min at 37 °C, including 10 min for nucleic acid amplification and 5 minutes for LFD reading results. The detection limit of this assay was found to be 200 copies per reaction. And there was no cross-reactivity with other swine viruses.@*CONCLUSION@#A highly sensitive, specific, and simple RAA-LFD method was developed for the rapid detection of the ASFV.

Molecular studies on African swine fever virus from Brazilian isolates / Estudos moleculares do vírus da peste suína africana de isolados brasileiros

African swine fever (ASF) is a devastating viral infirmity that affects domestic and wild swine caused by the ASF virus (ASFV) that belongs to the family Asfaviridae in the Asfavirus genus. Studies for genotypic and antigenic determination of ASFV including samples from Brazilian outbreaks were carried out outside Brazil. Here, we have reviewed studies on the molecular aspects of Brazilian isolates from 1978 and 1979. Results obtained from restriction fragment analysis, cloning and gene sequencing display the genotypic variation of viral samples. Viral genotyping based on sequences of the 3' region of the p72 gene included in genotype I Brazilian samples, reinforcing the suggestion of the European origin for the virus that infected Brazilian herds and having low virulence potential. Corroborating those findings, at the American station PIADC, the infection of healthy pigs with the Brazilian strain induced ASF sub acute disease with low mortality and a low-virulence. Those results were similar with epidemiological vigilance forms of Brazilian swineherd in good health conditions having at least one ASFV isolation, and the ASF pioneer's studies on the low mortality in the Brazilian herds affected by ASF. The ASFV spreading in Eastern Europe and Russia triggered a greater concern with intensifying the risk of viral dissemination from country to country. The low virulence ASF strains can increase the problem because of hidden viral reservoirs - which further reinforces the need for safety and preventive measures in virus-free countries. Finally, the problem is further compounded by the lack of vaccines and other immunological resources.(AU)

A peste suína africana é uma enfermidade viral devastadora que afeta suínos domésticos e selvagens causada pelo vírus pertencente à família Asfaviridae no gênero Asfavirus. Estudos para determinação genotípica e antigênica do vírus da peste suína africana, incluindo as amostras de surtos brasileiros, foram realizados em laboratórios fora do Brasil. Aqui, revisamos os estudos sobre o aspecto molecular de isolados brasileiros de 1978 e 1979. Os resultados obtidos pela análise de fragmentos de restrição, clonagem e sequenciamento mostram variação genotípica das amostras virais. A genotipagem viral baseada nas sequências da região 3' do gene p72 incluíram amostras brasileiras no genótipo I, reforçando a sugestão da origem europeia do vírus que infectou rebanhos brasileiros e potencialmente de baixa virulência. Corroborando, na estação americana Plum Island Animal Disease Center, a inoculação do vírus da peste suína africana do surtos brasileiros em suínos saudáveis evoluiu para peste suína africana subaguda com baixa mortalidade sugerindo a baixa virulência. Similarmente aos formulários de vigilância epidemiológica de rebanhos em boas condições sanitárias que tiveram pelo menos um isolamento de vírus da peste suína africana e com os estudos pioneiros sobre a baixa mortalidade nos rebanhos afetados pela peste suína africana. A dispersão do vírus da peste suína africana na Europa Oriental e Rússia desencadearam uma preocupação com o risco de disseminação do vírus entre países. O vírus da peste suína africana de baixa virulência pode aumentar o problema porque esconde reservatórios virais e reforça a necessidade de medidas preventivas e de segurança em países livres de vírus. Finalmente, o problema é ainda mais agravado pela falta de vacinas e outros recursos imunológicos.(AU)

Soroprevalência de pseudorraiva, peste suína clássica e brucelose em suínos do estado do Piauí / Seroprevalence of pseudorabies, classical swine fever and brucellosis in swine in the state of Piauí

Este trabalho teve como objetivo determinar a soroprevalência de pseudorraiva, peste suína clássica (PSC) e brucelose suína em suínos do estado do Piauí, Brasil. Foram coletadas amostras sanguíneas de 384 suínos de criações intensivas e extensivas do estado. Anticorpos anti-Brucella spp. foram detectados pelo teste do antígeno acidificado tamponado e confirmados pelo teste 2-mercaptoetanol, enquanto a detecção de anticorpos contra os vírus da PSC e pseudorraiva foi realizada por ensaio imunoenzimático (ELISA), utilizando-se kits comerciais específicos. Anticorpos anti-Brucella spp. foram detectados em 1,04% (2/192) dos suínos de criações intensivas. Dos rebanhos avaliados, 0,78% (3/384) dos animais exibiram anticorpos contra o vírus da PSC, sendo 1,04% (2/192) de criações intensivas e 0,52% (1/192) de criações extensivas. Anticorpos contra o vírus da pseudorraiva foram detectados apenas em suínos de criação extensiva, com prevalência de 5,2% (10/192). Esses são os primeiros dados sobre a soroprevalência da brucelose suína, pseudorraiva e PSC em rebanhos do Piauí. A detecção de 10 amostras positivas para pseudorraiva causa preocupação sobre a possibilidade da circulação viral na população suídea desse estado e revela uma necessidade premente de realização de estudos mais extensos para melhor compreender a importância dessas enfermidades de notificação obrigatória em estados da região Nordeste brasileira.

This study aimed to determine the prevalence of Pseudorabies, Classical Swine Fever (CSF) and Swine Brucellosis in swine in the state of Piauí, Brazil. Blood samples were collected from 384 pigs from intensive and small outdoor systems in the state. Anti-Brucella spp. antibodies were detected by Buffered Acidified Antigen Test and positive results confirmed by 2-Mercaptoethanol Test. Detection of antibodies against CSF and Pseudorabies virus were performed by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) using specific commercial kits. Only two samples (1.04% - 2/192) from the intensive system were seropositive to Brucella spp. In the evaluated herds, 0.78% (3/384) of animals had antibodies against CSF virus, two from outdoor pigs (1.04% - 2/192) and one from intensive systems (0.52% - 1/192). Antibodies against the Pseudorabies virus were detected only in outdoor pigs, with seroprevalence of 5.2% (10/192). This is the first report on seroprevalence of Pseudorabies, CSF and Brucellosis in hog farms in Piauí, Brazil. The detection of 10 positive cases raises a concern regarding Pseudorabies virus circulation in the swine population in the state and reveals a need for further studies to better understand the real situation and status of obligatory notified diseases in the swine herds in the Northestern states of Brazil.