Isolamento, diferenciação e aspectos bioquímicos de células-tronco de líquido amniótico / Isolation, differentiation and biochemical aspects of amniotic fluid stem cell

As células-tronco mesenquimais (MSCs) são células com grande potencial de diferenciação e estão sendo recentemente introduzidas na clínica para tratamento de várias doenças. Possuem várias vantagens incluindo sua estabilidade fenotípica in vitro. OBJETIVO: isolamento das MSCs de líquido amniótico, sua expansão e a demonstração da sua capacidade de se diferenciar em células miogênicas e adipogênicas, sem alterar a estabilidade cromossomal em meio de cultura. MÉTODOS: a fim de avaliar a mudança funcional destas células, foram avaliados parâmetros bioquímicos nas células adipogênicas já diferenciadas e antes da diferenciação através da dosagem de triglicérides. A diferenciação em células musculares foi avaliada comparando os níveis de creatinofosfoquinase - CK, desidrogenase lática - LDH e aldolase produzidas por estas células antes e após diferenciação. RESULTADOS: os níveis de triglicérides foram significativamente maiores nas células diferenciadas, mostrando ainda a formação de grânulos intracitoplasmáticos. Todos os outros valores obtidos foram significativamente maiores nas células miogênicas diferenciadas quando comparadas às não diferenciadas. CONCLUSÃO: os resultados sugerem que estes protocolos podem ser usados para avaliar diferenciação de células-tronco em células adipogênicas e miogênicas, e que o líquido amniótico pode ser uma fonte para obtenção destas células.

The mesenchymals stem cells (MSCs) are cells with the great potential of differentiation are being introduced in the clinic for treatment of several diseases. Mesenchymal stem cells have several advantages including the stability of their phenotype in vitro. BACKGROUND: isolation of MSCs in amniotic fluid, its expansion and the demonstration of the capacity of these cells to differentiate in adipogenic and miogenic cells, without to change the chromosomal stability of the MSCs in culture. METHODS: in order to evaluate the functional change of these cells, were gotten values of the differentiated adipogenic cells and not differentiated through the dosage of triglycerides. The miogenic nature of the differentiated cells was analyzed comparing the creatine kinase - CK, lactic dehydrogenase - LDH and aldolase produced by the cells. RESULTS: the values of triglycerides were significantly higher in differentiated cells, showing intracitoplasmatic granule form after differentiation. All the biochemical characters were significantly higher in differentiated miogenic cells. CONCLUSIONS: this study suggests that the standardized protocol of differentiation can be used in the attainment of cells with characteristics of adipogenic and muscular cells, from amniotic fluid.

Determinación enzimática de fosfolípidos que contienen colina en líquido amniótico / Enzimatic determination of phospholipids that choline contains in amniotic fluid

Se describe un método para determinar en líquido amniótico los fosfolípidos que contienen colina, que se basa en la acción de la fosfolipasa D sobre los fosfolípidos, originando colina, que es oxidada por la colinaoxidasa a betaína con la producción simultánea de peróxido de hidrógeno, este último en presencia de peroxidasa oxida al fenol que se acopla a la 4-aminofenazona produciendo un cromógeno rojo. La intensidad del color a 500 nm es directamente proporcional a la concentración de fosfolípidos que contienen colina. El método es sencillo, rápido, relativamente econónico, preciso, exacto y requiere poco volumen de muestra. El análisis comparativo con la determinación de lecitina mediante un método enzimático mostró un coeficiente de correlación (r) de 0,945 y una ecuación de regresión lineal y=2,595+0,929x. El método presenta coeficientes de variación día a día de 2,6 y 4,5 por ciento para concentraciones de fosfolípidos de 12,4 y 4,3 mg/dL, respectivamente. El intervalo analítico es de 25,0 mg/dL. La sangre, la bilirrubina y el ácido ascórbico producen cierto grado de interferencia

Detection of superoxide dismutase isozymes in normal and X-irradiated chick amniotic fluid by using isoelectric focussing.

Isoelectric focussing of amniotic fluid of chick system over pH gradient of 4-6 revealed presence of 8 superoxide dismutases. The superoxide dismutase (SOD) isozymes were identified as one major isozyme and other seven were minor ones. Higher expression of SOD (major isozyme) with exposure of 1000 R was studied. The isoelectric point (pI) of major SOD isozyme in control (5) differs from radiation exposed samples (5.12). Hence in radiation exposed amniotic fluid showed more pronounced SOD major isozyme, than control amniotic fluid. It is clearly evident that the SOD isozyme with X-irradiation having different isoelectric points, may lead to modification of the amino acid composition and charges of amino acids in the protein structure of SOD. So, the higher SOD isozyme expression has a role in defence action against free radical damage by X-irradiation during embryonic development.

Ruptura prematura de membranas: mecanismos de la enfermedad / Premature rupture of the choriommiotic membranes: physiopathogenic mechanism

La ruptura de membranas corioamnióticas (RPM) está asociada a complicaciones perinatales y es la causa identificada más frecuente de parto pretérmino. A pesar de que la RPM se ha estudiado desde hace tiempo, en las actualidad hay controversia entre los mecanismos que la median y su etiopatogenia no ha sido bien comprendida. Actualmente se reconoce que el rompimiento de las membranas se asocia al aumento de presión intrauterina, siendo una diferencia que las membranas que se rompen en forma prematura son más débiles que las normales, sin embargo, la pura explicación mecánica parece incompleta, por lo que se han estudiado otros factores que podrían estar relacionados con la RPM entre los que se encuentran el infeccioso, el dietético y otros como pueden ser maniobras quirúrgicas, incompetencia ítsmico-cervical y polihidramnios. Por otro lado se han analizado aspectos moleculares relacionados con la RPM, estas comprenden studios sobre el metabolismo de la colégena que es principal constituyente de las membranas corioamnióticas, como resultado de ellos, se han propuesto diferentes niveles de daño que adectan tanto a la síntesis como a la degradación de la colágena

Phospolipase A2 and premature rupture of membranes

Antecedentes: La actividad de fosfolipasa A2 (FLA2) ha sido relacionada con el incremento en los niveles de prostaglandina E2 (PGE2) en el líquido amniótico (LA). Altas concentraciones de este compuesto se encuentran en el LA en las siguientes condiciones: trabajo de parto, infección y ruptura prematura de membrana (RPM). Sin embargo la asociación entre este incremento y la FLA2 nunca ha sido demostrada. Objetivo: Estudiar la asociación entre la actividad FLA2 y la patogénesis de la RPM. Material y métodos: Se analizó la actividad de esta enzima en 3 grupos de LA: 1-Seguno trimestre 16-22 semanas de gestación (SG), 2- término 36-40 SG y 3- Ruptura Prematura de Membranas 28-36 SG, con y sin presencia de infección. Resultados: La actividad de FLA2 en los LA de segundo trimestre fue de 1.782 ñ 1.31 nanomolos de Fosfatidil-Colina degradada/mg proteína, mientras de RPM no infectadas tuvieron valores de 12.357 ñ 5.96 nm/mg y las infectadas de 29.077 ñ 17.91 nm/mg. Se estableció diferencias significativas entre las muestras de segundo trimestre y todos los demás grupos (p< 0.0001), entre RPM infectada y todos los grupos (p< 0.0001); y no se encontró diferencia entre los LA de término y de RPM no infectados. Discusión: Sugerimos la participación de la Fosfolipasa A2 en el mecanismo fisiológico de trabajo de parto y en el mecanismo patogénico de la RPM

Participación de las metaloproteasas de matriz extracelular en la ruputora prematura de membranas fetales: un modelo fisiopatogénico novedoso / Participation of metaloproteases of extracellular matrix in premature rupture of fetal membranes: a pyisiopathogenic model

Se aportan pruebas experimentales que involucran la participación de la familia de las metaloproteinasas de matriz extracelular en la génesis de la ruptura prematura de membranas. La expresión de este grupo de enzimas, que se presenta en condiciones normales durante el trabajo de parto aparecen en la RPM sin relación con la edad gestacional. Este fenómeno no se presenta como un ejemplo aislado de la participación de las metaloproteinasas en eventos ligados al trabajo de parto, ya que es bien conocida su participación en la maduración del cuello uterino que precede a la expulsión del producto, y que consiste en mecanismos semejantes a los que ahora se postulan para la maduración de las membranas fetales. La hipótesis de trabajo en condiciones patológicas, implica entoces la activación de un sistema normal en un momento inadecuado que resulta en ruptura prematura de membranas.

Ammiotic fluid lysozyme activity in fetal distress

Lysozyme activity was m,easured in amniotic fluid samples from 90 pregnant women with gestacional age ranging from 30 to 41 weeks. Twenty-nine samples were from high-risk subjects with different pathologies and signs of fetal distress. The control group consisted of 20 normal and 41 pathological pregnant women, whose disorders included Rh isoimmunization, diabetes, systemic arterial hypertension and pre-eclampsia without signs of fetal distress. amniotic fluid lysozyme levels in normal controls were similar to those detected in abnormal pregnant women without signs of fetal distress (x = 156.0 vs 131.8 microng/ml for 43-37 weeks of gestation), with a tendency toward higher values as pregnancy progressed to term in high-risk pregnant women with signs of fetal distress, regardless of neonate birth weight, than in subjects showing no such sugns (x = 40.3 and x = 25.4 microng/ml at 34-41 weeks of gestation, respectively). These data support the possibility of using amniotic fluid lysosyme activity levels as an indicator of fetal distress

Kininase activity in the amniotic during normal and pathological pregnancy (Toxemia and hypermaturity)

Foi estudada a atividade cininásica no líquido amniótico de gravidezes normais e patológicas (toxemia e hipermaturidade). Níveis normais de atividade cininásica foram estudados durante o terceiro trimestre da gestaçäo e na hipermaturidade (gestaçäo além de 42 semanas). Os resultados da atividade de cininase específica (ug%min/mg protein 10-2) (12,01 ñ 3,76) para o terceiro trimestre da gravidez e pacientes com toxemia (12,48 ñ 3,83) näo mostrou diferenças significantes entre os grupos