Anopheles darlingi Root 1926 (Diptera: Culicidae): variaciones morfométricas en alas y patas de poblaciones de Colombia / Anopheles darlingi (Diptera: Culicidae) Rood 1926: Morphometric variations in wings and legs of populations from Colombia

Resumen Introducción. Las poblaciones naturales de Anopheles darlingi, principal transmisor de la malaria en Colombia, han mostrado plasticidad fenotípica en algunos de sus caracteres diagnósticos. Objetivo. Caracterizar las variaciones morfométricas de los patrones alares y de la pata posterior en poblaciones naturales de An. darlingi recolectados en localidades colombianas donde la malaria es endémica. Materiales y métodos. Se analizaron los patrones de manchas de la vena costal del ala de hembras silvestres recolectadas en los departamentos de Chocó, Guaviare, Meta y Vichada mediante morfometría lineal y geométrica. El segundo tarsómero posterior de las hembras se analizó mediante morfometría lineal. Resultados. Se encontraron 19 patrones de manchas de la vena costal. Los patrones I, con 49 % (n=118/240) y VI, con 28 % (n=66), fueron los más frecuentes. La proporción del área oscura basal (DS-III2 ) y del tarsómero posterior (Ta-III2 ) constituyó una característica sólida de diagnóstico, pues representó el 89 % (n=213/240) del total de especímenes analizados. Se encontraron diferencias significativas en la forma (F=1,65; gl=50; p<0,001) y el tamaño (F=3,37; gl=5; p=0,005) del ala entre las poblaciones de diferentes localidades. El centroide de menor tamaño (2,64 mm) se encontró en las poblaciones de Chocó. Conclusiones. Se registraron 11 patrones nuevos para las manchas de la vena costal y se confirmó la dominancia de los patrones alares I y VI en las poblaciones de An. darlingi de Colombia, así como la relación de DS-III2 y Ta-III2 como un rasgo sólido de diagnóstico para la taxonomía de la especie. Se encontraron diferencias en el tamaño corporal de las poblaciones evaluadas, lo cual reviste importancia para el análisis de aspectos bionómicos de la especie.

Abstract Introduction: Natural populations of Anopheles darlingi, the main malaria vector in Colombia, have shown phenotypic variations in some of their diagnostic characters. Objective: To characterize morphometric variations in wing spot patterns and diagnostic characters of the hind leg of adult females of An. darlingi collected in areas where malaria is endemic. Materials and methods: Patterns of the costal vein spots of wild females of An. darling populations collected in the departments of Chocó, Guaviare, Meta and Vichada were analyzed using linear and morphometric approaches. The second tarsomere of the hind leg of females was characterized by linear morphometric analysis. Results: We found 19 patterns of spots in the costal vein; patterns I (n=118/240, 49%) and VI (n=66, 28%) were the most frequent. The proportion of the basal dark area of hind tarsomere II and the length of hind tarsomere II (DSIII2 /Ta-III2) constituted a robust diagnostic character as it represented 89% (n=213/240) of the total specimens studied. Significant differences were found in the wing shape (F=1.65, df =50, p<0.001) and the wing size (F=3.37, df=5, p=0.005) among populations from different locations. The smallest centroid size (2.64 mm) was found in populations from Chocó. Conclusions. We registered 11 new wing spot patterns in the costal vein and the dominance of the patterns I and VI for populations of An. darlingi from Colombia. We confirmed DSIII2/TaIII2 ratio as a robust diagnostic character for the taxonomy of this species. We found differences between the size and shape of the wings of An. darlingi populations in accordance to their geographical distribution, which constitute important bionomic aspects for this malaria vector.

Anopheles species composition explains differences in Plasmodium transmission in La Guajira, northern Colombia

Malaria in La Guajira, the most northern state of Colombia, shows two different epidemiological patterns. Malaria is endemic in the municipality of Dibulla whereas in Riohacha it is characterised by sporadic outbreaks. This study aimed to establish whether differences in transmission patterns could be attributed to different vector species. The most abundant adult female species were Anopheles aquasalis, exclusive to Riohacha, and Anopheles darlingi, restricted to Dibulla. Anopheles mosquitoes were identified using morphology and the molecular markers internal transcribed spacer 2 and cytochrome c oxidase I. All specimens (n = 1,393) were tested by ELISA to determine natural infection rates with Plasmodium falciparum and Plasmodium vivax. An. darlingi was positive for P. vivax 210, with an infection rate of 0.355% and an entomological inoculation rate of 15.87 infective bites/person/year. Anopheles albimanus larvae were the most common species in Riohacha, found in temporary swamps; in contrast, in Dibulla An. darlingi were detected mainly in permanent streams. Distinctive species composition and larval habitats in each municipality may explain the differences in Plasmodium transmission and suggest different local strategies should be used for vector control.

Morphology of the larvae, male genitalia and DNA sequences of Anopheles (Kerteszia) pholidotus (Diptera: Culicidae) from Colombia

Since 1984, Anopheles (Kerteszia) lepidotus has been considered a mosquito species that is involved in the transmission of malaria in Colombia, after having been incriminated as such with epidemiological evidence from a malaria outbreak in Cunday-Villarrica, Tolima. Subsequent morphological analyses of females captured in the same place and at the time of the outbreak showed that the species responsible for the transmission was not An. lepidotus, but rather Anopheles pholidotus. However, the associated morphological stages and DNA sequences of An. pholidotus from the foci of Cunday-Villarrica had not been analysed. Using samples that were caught recently from the outbreak region, the purpose of this study was to provide updated and additional information by analysing the morphology of female mosquitoes, the genitalia of male mosquitoes and fourth instar larvae of An. pholidotus, which was confirmed with DNA sequences of cytochrome oxidase I and rDNA internal transcribed spacer. A total of 1,596 adult females were collected in addition to 37 larval collections in bromeliads. Furthermore, 141 adult females, which were captured from the same area in the years 1981-1982, were analysed morphologically. Ninety-five DNA sequences were analysed for this study. Morphological and molecular analyses showed that the species present in this region corresponds to An. pholidotus. Given the absence of An. lepidotus, even in recent years, we consider that the species of mosquitoes that was previously incriminated as the malaria vector during the outbreak was indeed An. pholidotus, thus ending the controversy.

Caracterização bioquímica de peptidases e análise proteômica de intestino e gônadas de Anopheles aquasalis / Caracterização bioquímica de peptidases e análise proteômica de intestino e gônadas de Anopheles aquasalis

O objetivo geral do presente trabalho foi caracterizar e identificar peptidases ativas presentes nos intestinos de machos e fêmeas de Anopheles aquasalis bem como identificar as proteínas expressas no intestino e gônadas de fêmeas dessa espécie. Para a caracterização proteolítica foram usadas distintas abordagens bioquímicas que permitiram reunir um grupo importante de informações sobre a expressão de enzimas proteolíticas nesta espécie de mosquito. Usando o substrato fluorogênico Z-Phe-Arg-AMC em solução e a técnica de enzimografia por SDS-PAGE co-polimerizado com gelatina foi possível observar um perfil proteolítico composto por serina peptidases do tipo tripsina no intestino de machos e fêmeas de An. aquasalis. Estas enzimas apresentam maior atividade proteolítica na faixa de pH alcalino e ampla estabilidade térmica, sendo ativas entre 25 °C – 80 °C, com maior atividade entre 37 °C – 50 °C. Diferenças qualitativas e quantitativas na expressão das peptidases também foram detectadas. Foi observado que o perfil proteolítico difere entre macho e fêmea, sugerindo com isso que a expressão de algumas dessas enzimas é sexo-específica. Para análise proteômica do intestino e gônadas de fêmeas alimentadas com açúcar usou-se uma abordagem “bottom-up” acoplada à análise bioinformática de dados para identificação das proteínas expressas. A análise do intestino foi feita através de um procedimento de digestão em solução sem pré-fracionamento das proteínas, ao passo que a análise das gônadas foi feita usando um protocolo de digestão em gel após fracionamento das proteínas por SDS-PAGE. Usando estas estratégias, um total de 137 e 995 proteínas foram identificadas no intestino e gônadas, respectivamente. As proteínas foram identificadas usando os programas ProLuCID e/ou PEAKS, e uma base de dados “customizada” incluindo todas as sequencias de Culicídeos depositadas na base de dados UniProt (81,000 sequencias, em outubro de 2013)...

As identificações foram posteriormente analisadas com relação ao enriquecimento de termos de ontologia gênica e foram classificadas de acordo com seu processo biológico e função molecular, usando o módulo GeneOntology da plataforma PatternLab. A caracterização proteômica revelou para o intestino (i) a presença de várias serina peptidases do tipo tripsina, corroborando a expressão e atividade das enzimas observadas na enzimografia; (ii) a expressão de vários genes codificantes para quimiotripsina, embora a sua atividade não tenha sido detectada pela enzimografia; e para as gônadas (iii) proteínas associadas à vitelogênese; e (iv) a expressão massiva de proteínas implicadas na preparação do tecido para reprodução. Finalmente, até o presente, esta é a primeira caracterização abrangente da atividade proteolítica de machos e fêmeas de An. aquasalis bem como a primeira caracterização proteômica do intestino e gônadas de fêmeas desta espécie alimentadas com açúcar. Os resultados obtidos neste trabalho além de fornecerem informações sobre a localização tecidual de proteínas no mosquito e abrirem diversas vias de estudo da biologia e fisiologia deste vetor, contribuem também para a anotação funcional do genoma desta espécie, visto tratar-se de uma espécie com genoma ainda não concluído...

Caracterização de populações de Anopheles darlingi (Diptera/Culicidae) do Brasil por estruturas de morfologia externa dos ovos, das asas e por sequências gênicas / Characterization of Anopheles darlingi (Diptera: Culicidae) populations from Brazil by external morphological structure of eggs, wings and gene sequences

Introdução - A malária é uma das principais doenças humanas do mundo e afeta principalmente as populações pobres em regiões tropicais e subtropicais onde as condições ambientais são favoráveis tanto para a proliferação dos agentes etiológicos como dos mosquitos vetores. No Brasil, An. darlingi é considerado vetor primário de plasmódios humanos. Devido à importância médica, esse inseto tem sido objeto de campanhas de controle populacional. No entanto, não foi considerada a ocorrência de microevolução em An. darlingi e consequentemente, a possibilidade de populações diferentes apresentarem características biológicas distintas. Objetivo Verificar a presença de variabilidade genética e morfológica em populações de An. darlingi no Brasil. Metodologia - Foram analisados e comparados 26 atributos da morfologia externa de ovos de nove populações, bem como a morfometria geométrica da forma alar de espécimes de 10 localidades diferentes de Anopheles darlingi. Além disso, foram empregadas sequências do gene mitocondrial citocromo oxidase subunidade I (COI) para analisar a estrutura populacional de An. darlingi. Resultados e Conclusão Apesar dos atributos dos ovos apresentarem variação, somente as amostras de Tocantins e Pará foram diferenciadas das demais populações. As variações nas estruturas externas dos ovos são provavelmente adaptativas, com influência de fatores ambientais, como temperatura, umidade e disponibilidade de alimento para as fêmeas. A comparação da morfometria geométrica da asa demonstrou que existe maior similaridade entre as populações da costa (estados do Espírito Santo , do cerrado (estados de Goiás e Tocantins), do norte do rio Amazonas (estados do Amazonas e Amapá), e do sul do rio Amazonas (estados de Mato Grosso e Pará).

Anopheles gambiae no Brasil: 1930 a 1940 / Anopheles gambiae in Brazil - 1930-1940

Fred L. Soper e D. Bruce Wilson lideraram uma campanha sanitária no Nordeste brasileiro que culminou com a erradicação, em tempo recorde – apenas 35 meses –, do mais eficiente dentre os vetores da malária, o mosquito Anopheles gambiae. Considerado leitura obrigatória para os interessados em saúde pública no Brasil, o relatório final dessa campanha – que descreve detalhadamente os procedimentos e métodos de trabalho sob o ponto de vista de seus diretores – foi originalmente publicado em inglês, em 1943. Pouco depois, em 1945, o relatório ganhou uma edição em português, mas não uma tradução fiel. Ela se voltava para as atividades do Serviço de Malária do Nordeste e a questão dos doentes de malária, enquanto o original era centrado nas ações da Fundação Rockefeller e na campanha de erradicação do mosquito. Decidiu-se, então, retraduzir o original – encontrado hoje em dia somente na seção de obras raras de bibliotecas especializadas –, incorporando alguns elementos de destaque da primeira versão em português

Anopheles gambiae no Brasil – 1930 a 1940

Fred L. Soper e D. Bruce Wilson lideraram uma campanha sanitária no Nordeste brasileiro que culminou com a erradicação, em tempo recorde – apenas 35 meses –, do mais eficiente dentre os vetores da malária, o mosquito Anopheles gambiae. Considerado leitura obrigatória para os interessados em saúde pública no Brasil, o relatório final dessa campanha – que descreve detalhadamente os procedimentos e métodos de trabalho sob o ponto de vista de seus diretores – foi originalmente publicado em inglês, em 1943. Pouco depois, em 1945, o relatório ganhou uma edição em português, mas não uma tradução fiel. Ela se voltava para as atividades do Serviço de Malária do Nordeste e a questão dos doentes de malária, enquanto o original era centrado nas ações da Fundação Rockefeller e na campanha de erradicação do mosquito. Decidiu-se, então, retraduzir o original – encontrado hoje em dia somente na seção de obras raras de bibliotecas especializadas –, incorporando alguns elementos de destaque da primeira versão em português

Redescription of Anopheles (Nyssorhynchus) antunesi Galvão & Amaral and description of a new species of the Myzorhynchella Section (Diptera: Culicidae) from Serra da Mantiqueira, Brazil

Anopheles (Nyssorhynchus) pristinus Nagaki & Sallum, n. sp. of the Myzorhynchella Section is described based on morphological characters of adult females, males, fourth-instar larvae, pupae and male genitalia. Anopheles (Nyssorhynchus) antunesi Galvão & Amaral is characterized to fix its identity and distinguish it from An. pristinus. The eggs of An. antunesi are described for the first time. Molecular characterization employing sequences of the COI mitochondrial gene and the ITS2 region of ribosomal DNA are provided for each species. An. antunesi and An. pristinus are compared with morphologically similar species of the Myzorhynchella Section. The results of the present study suggest that the new species has been misidentified as both An. antunesi and Anopheles lutzii Cruz. An. antunesi and An. pristinus are sympatric, occurring at high altitudes in Serra da Mantiqueira, Southeastern Brazil.

Anopheles (Nyssorhynchus) atacamensis (Diptera: Culicidae), a new species from Northern Chile

Anopheles (Nyssorhynchus) atacamensis, a new species in the subgenus Nyssorhynchus, is described and validated using morphological characters of the male and female adult, male genitalia and immature stages. Molecular characterization employing sequences of the ITS2 rDNA and COI mtDNA are provided. The new taxon is compared with Anopheles (Nyssorhynchus) pictipennis (Philippi) from central Chile based on morphological features of the adults, male genitalia and larva. Illustrations of the diagnostic characteristics of the male genitalia, fourth-instar larva and pupa are provided.

Estudo taxonômico sobre Anopheles (Nyssorllynchus) strodei Root (Diptera: Culicidae): uma abordagem morfológica e molecular / Taxonomic studies on Anopheles (Nyssorhynchus) strodei Root (Diptera: Culicidae) a morphological and molecular approach

Anopheles albertoi Unti e Anopheles arthuri Unti são retiradas da sinonímia com Anopheles strodei Root, e uma forma morfologicamente distinta, adiante designada Anopheles CP, do Complexo Strodei de Anopheles (Nyssorhynchus) é caracterizada. As genitálias masculinas de An. arthuri e An. albertoi são descritas e ilustradas pela primeira vez. Anopheles strodei, An. arthuri e An. albertoi foram, inicialmente, separadas com base em imagens dos ovos, obtidas em microscópio eletrônico de varredura e, em seguida, cada tipo de ovo foi associado com caracteres diagnósticos da genitália masculina. A identificação de Anopheles CP foi baseada em caracteres morfológicos da genitália masculina, caracterizados e ilustrados no presente trabalho. Os resultados das análises filogenéticas, utilizando dados de seqüências gênicas, foram mais claros sem a inclusão de grupos extemos. Neste caso, utilizando tanto os dados do gene nuclear White, como do gene White combinado com o gene mitocondrial COI, as quatro espécies incluídas no estudo foram, claramente, separadas. Quando Anopheles quadrimaculatus Say e Anopheles stephensi Liston foram incluídas como grupos externos, os dados combinados dos genes White e COI recuperaram o monofiletismo de An. strodei e An. albertoi, enquanto a posição taxonômica de An. ar/huri não foi bem resolvida. A única seqüência de Anopheles CP apareceu separada dos outros grupos, em todas as análises. A análise Bayesiana dos dados do ITS2 e aquelas realizadas utilizando informações das estruturas secundárias, empregando as estratégias de bootstrap. em distância e o "profile neighbor joining", ambas implementadas no programa ProfDistS, demostraram o monofiletismo de An. albertoi, An. ar/huri e Anopheles CP. Anopheles strodei apareceu como espécie polifilética, no entanto, o suporte de bootstrap para o posicionamento do exemplar fora do agrupamento formado por An. strodei foi baixo.

Invalidación de autapomorfías putativas mediante análisis de filogenia molecular en Anopheles subgénero Nyssorhynchus / Invalidation of putative autapomorphic characters using molecular phylogenetic analyses in Anopheles subgenus Nyssorhynchus

Colectas e identificaciones realizadas en un área de transmisión malárica en el estado Sucre, Venezuela, mostraron mediante el uso de las claves ad hoc, la posible presencia en simpatría de poblaciones de Anopheles aquasalis Curry y An. benarrochi Gabaldón, Cova-García & López. Adicionalmente, se detectaron poblaciones de individuos que mostraron mezcla de los caracteres diagnósticos señalados en las claves. Debido a la importancia epidemiológica que representan ambas especies en dicha zona malárica, este estudio se orientó hacia la determinación de las tres entidades señaladas, mediante filogenia molecular con las secuencias de ADN mitocondrial (region Citocromo Oxidasa 1). En este sentido, el concepto de especie filogenética fue evaluada utilizando análisis de parsimonia máxima que mostraron politomías (nodos no resueltos) fuertemente apoyadas entre las secuencias inclusive la del haplotipo proveniente de un macho identificado como aquasalis, mostrando hipótesis (árboles) totales sin resolución ni apoyo de grupos internos con los tres morfotipos como un grupo natural único. Las distancias genéticas (Kimura-2P) mostraron que la variablidad inter-morfotipos están dentro de la varianza intra sugiriendo que los haplotipos problema son una única entidad polimórfica y con plasticidad fenotípica. Se concluye que An. aquasalis es la entidad única de las poblaciones estudiadas y que los caracteres morfológicos como: 1) vena Medial con escamas negras y 2) palpos maxilares con superficie ventral cubierta de escamas blancas, que son propuestas en la mayoría de las claves no son caracteres válidos para la identificación de hembras de An. benarrochi y que tales caracteres forman parte de la variación intraespecífica en An. aquasalis. Esta conclusión apoya la revisión de Faran (1980), quién no propone caracteres diferenciales para hembras de ambas especies, siendo indistinguibles por medio de los caracteres morfológicos tradicionalmente utilizados.

Collected specimens from a malaric area in Sucre State, Venezuela, using the ad hoc Keys, were identified as Anopheles aquasalis Curry and An. benarrochi Gabaldón, Cova-García & López populations. Additionally, other individuals have shown a mixture of diagnostic characters of both species. As a consequence of the epidemiological importance that both species represent in this malaric area and its correct identification for vector control aims, we addressed the research to the determination of both entities by mean of phylogenetic methods using mitochondrial DNA (Cytochrome Oxidase 1) from these three entities. In order to evaluate the phylogenetic species concept, the Maximum Parsimony analyses showed strong supported politomies (unresolved nodes), yielded solutions with no supported groups correlated with two or three morphological entities including the male haplotype identified as An. aquasalis. The genetic distances (K-2P) showed that the variability inter-morphotype is in the variance intra, suggesting that the haplotypes belong to the three morphotypes and represent a unique polymorphic species with phenotypic plasticity. We conclude that An. aquasalis is a unique taxonomic entity in the populations studied and also that the morphological characters such as: 1) medial vein with black scales and 2) maxillary palpus with ventral surface covered with white scales, proposed in most of the keys used are not valid characters to distinguish females of An. benarrochi from An. aquasalis as these characters belong to the intra-specific variation of An. aquasalis. This conclusion supports the Faran (1980) key, which did not report any morphological characters, showing undistinguished females under classical characters used

The Anopheles albitarsis complex with the recognition of Anopheles oryzalimnetes Wilkerson and Motoki, n. sp. and Anopheles janconnae Wilkerson and Sallum, n. sp. (Diptera: Culicidae)

The Anopheles (Nyssorhynchus) albitarsis complex includes six species: An. albitarsis, Anopheles oryzalimnetes Wilkerson and Motoki, n. sp., Anopheles marajoara, Anopheles deaneorum, Anopheles janconnae Wilkerson and Sallum, n. sp. and An. albitarsis F. Except for An. deaneorum, species of the complex are indistinguishable when only using morphology. The problematic distinction among species of the complex has made study of malaria transmission and ecology of An. albitarsis s.l. difficult. Consequently, involvement of species of the An. albitarsis complex in human Plasmodium transmission is not clear throughout its distribution range. With the aim of clarifying the taxonomy of the above species, with the exception of An. albitarsis F, we present comparative morphological and morphometric analyses, morphological redescriptions of three species and description of two new species using individuals from populations in Brazil, Paraguay, Argentina and Venezuela. The study included characters from adult females, males, fourth-instar larvae, pupae and male genitalia of An. albitarsis, An. marajoara, An. deaneorum and An. oryzalimnetes n. sp. For An. janconnae n. sp. only characters of the female, male and male genitalia were analyzed. Fourth-instar larvae, pupae and male genitalia characteristics of all five species are illustrated. Bionomics and distribution data are given based on published literature records.

Intraespecific variation on the aedeagus of Anopheles oswaldoi (Peryassú) (Diptera: Culicidae) / Variação intraespecífica no edeago de Anopheles oswaldoi (Peryassú) (Diptera: Culicidae)

Anopheles (Nyssorhynchus) oswaldoi (Peryassú) comprises a species complex in South America. Specimens from two localities in east Mata Atlântica were characterized both at the morphological and molecular level as An. oswaldoi s.s. Intraspecific variation of the shape of the apex of the aedeagus of the male genitalia of specimens of Anopheles (Nyssorhynchus) oswaldoi s.s. from Vale do Ribeira, Mata Atlântica, São Paulo State, Brazil, was observed. Distinctive aedeagus of the specimens from Vale do Ribeira, Mata Atlântica, were evaluated, illustrated and compared to that of An. oswaldoi s.s.

Anopheles (Nyssorhynchus) oswaldoi (Peryassú) compreende complexo de espécies crípticas na América do Sul. Espécimes de duas localidades situadas no leste da Mata Atlântica foram empregados para caracterizar morfologica e molecularmente An. oswaldoi s.s. Foram observadas e avaliadas variações na forma do ápice do edeago da genitália masculina de espécimes de Anopheles (Nyssorhynchus) oswaldoi s.s. do Vale do Ribeira, Mata Atlântica, estado de São Paulo, e nas sequências do segundo espaçador interno transcrito (ITS2). Os espécimes com edeagos distintos apresentaram seqüências idênticas de ITS2. Os tipos distintos de edeago encontrados nos exemplares do Vale do Ribeira, Mata Atlântica, foram ilustrados.

Resurrection of Anopheles goeldii from synonymy with Anopheles nuneztovari (Diptera, Culicidae) and a new record for Anopheles dunhami in the Brazilian Amazon

Nucleotide sequences of the internal transcribed spacer 2 (ITS2) rDNA and partial sequences of the cytochrome coxidase subunit I (COI) mtDNA and white gene nDNA were obtained from specimens of Anopheles nuneztovari A collected in Macapá (state of Amapá), Óbidos, Prainha and Almeirim (state of Pará), Itacoatiara and Parintins (state of Amazonas), Brazil, and compared with previously published sequences of A. nuneztovari s.l. Results of the Bayesian phylogenetic analyses performed using either COI or combined ITS2, COI and white gene sequences suggest that An. nuneztovari B/C is distinct from specimens obtained in the Amazonas/Solimões River basin. Anopheles goeldii, currently in synonymy with An. nuneztovari, was described from individuals collected in Belterra (= Fordlândia) in the Tapajós River, state of Pará, Southern Amazonas River. Morphological comparisons of the characteristics of the male genitalia indicated that An. nuneztovari A and An. goeldii are similar but distinct from An. nuneztovariB/C by the apex of the aedeagus. In considering the results of the phylogenetic analyses and morphological comparisons, An. goeldii is resurrected from synonymy with An. nuneztovari. Additionally, Anopheles dunhamiis reported for the first time in Parintins. This species can be distinguished from An. goeldiiby characters of the male genitalia and molecular data.

Discriminación por morfometría geométrica de once especies de Anopheles (Nyssorhynchus) presentes en Colombia / Differentiation by geometric morphometrics among 11 Anopheles (Nyssorhynchus) in Colombia

Introducción. Es importante determinar las especies de Anopheles pertenecientes al subgénero Nyssorhynchus, dado que allí se encuentran los vectores principales de malaria en Colombia. Objetivo. Utilizar la morfometría geométrica para evaluar la variación morfométrica de once especies del subgénero Nyssorhynchus, presentes en Colombia y la capacidad de diferenciar las hembras. Materiales y métodos. Los especímenes fueron obtenidos de mosquitos silvestres, series e isofamilias de hembras recolectadas en cebos humanos protegidos y fueron identificados en todos sus estadios asociados usando las claves convencionales. A partir de fotografías digitales del ala derecha de 336 ejemplares de las 11 especies se seleccionaron 12 puntos anatómicos. Los puntos se convirtieron en coordenadas, las cuales se procesaron mediante el análisis generalizado de Procrustes. Se obtuvieron variables de tamaño y conformación, las cuales fueron analizadas mediante estadísticas univariadas y multivariadas. Resultados. Las técnicas de morfometría geométrica demuestran que la división en secciones del subgénero Nyssorrhynchus no se correlaciona con la conformación de las alas y demostraron que sólo con 12 puntos anatómicos se logra diferenciar en sus respectivas especies el 97 por ciento de los especímenes de la sección Argyritarsis y el 86 por ciento de la sección Albimanus del subgénero Nyssorhynchus, de forma cuantitativa y sin ambigüedades. Además, se separaron los individuos de tres especies que habitan en simpatría en el Putumayo, difíciles de discriminar en el estadio de adulto hembra. Conclusión. La mayoría de especies de Anopheles (Nyssorhynchus) presentes en Colombia se pueden diferenciar al utilizar la morfometría geométrica como herramienta de apoyo a las claves convencionales.

Morphological aspect of the midgut of anopheles aquasalis (Curry, 1932) Insecta: Diptera / Aspecto morfológico del intestino medio de anopheles aquasalis (Curry, 1932) Insecta: Diptera

The midgut of adult female Anopheles aquasalis presents a narrow anterior or thoracic region and a distensible posterior or abdominal region constituted by the epithelium formed by a cell layer whose apical portion presents microvilli and the basal portion, a basal labyrinth. The thoracic region revealed heterogeneous cellular staining affinity mainly by the presence of acidic components. The ultrastructural aspect showed columnar cells with the presence of the vesicle, mitochondria, endoplasmic reticulum and secreting cells. The abdominal region of the midgut revealed an irregular epithelium whose cells presented a basophilic cytoplasm and acidophil granules. It was also found secreting and/or basal cells with narrow cytoplasm. The ultrastructural observation of this region demonstrated cells with evident nucleus, endoplasmic reticulum and mitochondria. Larger vesicles and small granules were found distributed throughout the cytoplasm. The basal lamina that supports the epithelium presented a generally irregular aspect and the muscle fibers have longitudinal and circular organization and were found separating the epithelium from the haemocel. This study will contribute to analyses on the vector mosquito-parasite interaction mechanism in this specimen.

La seccion media del intestino de la hembra de Anopheles aquasalis presenta una estrecha region anterior o toráxica y una region posterior o abdominal constituida por el epitelio formado por una camada de células cuya porcion apical presenta microvilosidades y la porcion basal presenta un laberinto basal. La region toráxica reveló afinidad de tintura celular principalmente para componentes acídicos. El aspecto ultra estructural mostró células columnares con la presencia de la vesícula, mitocondrias, retículo endoplasmático y células secretoras. La region abdominal del intestino medio reveló un epitelio irregular con células con citoplasma basófilo y granulos acidófilos. También se encontraron células secretoras y/o básales con citoplasma estrecho. La observacion ultra estructural de la region mostró células con núcleos, retículo endoplasmático y mitocondrias evidentes. Vesículas largas y granulos pequeños fueron encontrados distribuidos por todo el citoplasma. La lámina basal que apoya el epitelio presentó un aspecto irregular y las fibras musculares tienen organizacion longitudinal y circular y separan el epitelio del hemocele. Este estudio contribuirá al análisis del mecanismo de interaccion entre el mosquito y el parásito en este espécimen.

Morphological analysis of three populations of Anopheles (Nyssorhynchus) nuneztovari Gabaldón (Diptera: Culicidae) from Colombia

Based on the results of comparative analyses of 1,039 specimens of several progenies of Anopheles nuneztovarifrom three localities in Colombia, eight costal wing spot patterns were observed. Patterns I and III were the most frequent: 77.96 percent and 11.36 percent, respectively. Using the diagnostic characters ratio of the length of the basal dark area of hind tarsomere II/length of hind tarsomere II, ratio of the length of the humeral pale spot/length of the pre-humeral dark spot, and the ratio of the length of the subcostal pale spot/length of the distal sector dark spot (DS-III2/Ta-III2, HP/PHD, SCP/DSD) approximately 5 percent of the adult females were misidentified as a species of Nyssorhynchus, different from An. nuneztovari. Approximately 5 percent of the specimens showed DS-III2/Ta-III2 ratio less than 0.25 (range 0.21 - 0.24), and among them 3.34 percent shared a HP/PHD ratio less than 1.50. Consequently, 1.52 percent of An. nuneztovari individuals can be misidentified as Anopheles oswaldoi. In those specimens with the DS-III2/Ta-III2 ratios higher than 0.25, 34.45 percent displayed SCP/DSD values greater than 0.50 and of these, 3.65 percent displayed HP/PHD values greater than 1.8. This combination of characters could lead one to misidentify samples of An. nuneztovari as Anopheles rangeli. Similarly, 2.43 percent of the females could be identified erroneously as either Anopheles aquasalis or Anopheles benarrochi. Individuals with a HP/PHD ratio greater than 2.0, could be misidentified as Anopheles trinkae, Anopheles strodei or Anopheles evansae. A distinct combination of diagnostic characters for An. nuneztovari from Colombia is proposed.

Systematics of Anopheles lanei Galvão and Amaral, a species of the subgenus Nyssorhynchus Blanchard (Diptera: Culicidae)

Anopheles (Nyssorhynchus) lanei Galvão and Amaral is here redescribed using morphological characteristics of adult, male and female, fourth instar larva and pupa. The larva, pupa, and male genitalia are illustrated. Diagnostic morphological characters of adults, male genitalia, fourth instar larva and pupa are provided to distinguish An. lanei from other species of the Argyritarsis section. Species distribution data are based on the published literature records and bionomics data are based on both literature records and field data.

First record of Anopheles (Anopheles) costai Fonseca & Ramos, 1939 in Espírito Santo State, Brazil

Field collections of immatures and adults of Culicidae were carried out in the Rio Doce Valley, Espírito Santo State, aiming to increase knowledge on the anopheline species of that region. Considering all Culicidae species collected, among other anopheline it is noteworthy the presence of Anopheles darlingi, An. oswaldoi and An. costai. Regarding to An. darlingi, responsible for malaria outbreak in the low lands in that state, it was expected to confirm its presence in the area. The register of specimens of An. costai in the field collections is relevant, increasing the geographical distribution of the species and representing better knowledge of the Series Arribalzagia of the subgenus Anopheles.

Empreenderam-se coletas de imaturos e adultos de Culicidae no Vale do Rio Doce, Estado do Espírito Santo, Brasil, com o objetivo de ampliar o conhecimento sobre os anofelíneos dessa região. Do material obtido, além de outros anofelíneos e demais mosquitos, destaca-se a presença de Anopheles darlingi, An. oswaldoi e An. costai. Quanto ao An. darlingi, responsável por surtos de malária nas regiões baixas daquele Estado, já se esperava a confirmação de sua presença. Assinala-se como relevante a captura de espécimes de An. costai, ampliando-se a distribuição geográfica da espécie, bem como, trazendo contribuição para o conhecimento da Serie Arribalzagia do subgênero Anopheles.

Cladistic analysis of the subgenus Anopheles (Anopheles) Meigen (Diptera: Culicidae) based on morphological characters

In the present study, we used morphological characters to estimate phylogenetic relationships among members of the subgenus Anopheles Meigen. Phylogenetic analyses were carried out for 36 species of Anopheles (Anopheles). An. (Stethomyia) kompi Edwards, An. (Lophopodomyia) gilesi (Peryassú), Bironella hollandi Taylor, An. (Nyssorhynchus) oswaldoi (Peryassú) and An. (Cellia) maculatus Theobald were employed as outgroups. One hundred one characters of the external morphology of the adult male, adult female, fourth-instar larva, and pupa were scored and analyzed under the parsimony criterion in PAUP. Phylogenetic relationships among the series and several species informal groups of Anopheles (Anopheles) were hypothesized. The results suggest that Anopheles (Anopheles) is monophyletic. Additionally, most species groups included in the analysis were demonstrated to be monophyletic.