Sinalização e metabolismo celulares durante a diferenciação de linfócitos B humanos em secretores de anticorpos na presença do vírus da Dengue in vitro e em pacientes com Dengue / B cell signaling and metabolism during antibody-secreting cell differentiation in the presence of Dengue virus in vitro and in Dengue patients

A Dengue é uma doença viral sistêmica, transmitida por mosquitos, que afeta anualmente cerca de 100 milhões de pessoas em todo o mundo. Causada por quatro sorotipos do vírus da Dengue (DENV), suas manifestações clínicas podem variar de assintomáticas à formas que podem levar a óbito. Curiosamente, os pacientes com Dengue apresentam uma resposta exacerbada das células secretoras de anticorpos (ASCs) no sangue cerca de sete dias após o início dos sintomas. A frequência dessas ASCs induzidas pelo DENV representa mais de 50% de todas as células B circulantes no sangue. Essa quantificação é maior que aquelas encontradas em outras infecções virais, contextos de imunização e até mesmo em pacientes com neoplasias de ASCs. Além disso, a magnitude dessa resposta transitória se correlaciona com a gravidade da doença. Então, como a infecção pelo DENV induz essa resposta enorme? Para responder à essa pergunta, combinamos abordagens in vitro e in silico. Células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) obtidas de indivíduos saudáveis foram cultivadas in vitro durante sete dias na presença do DENV ou mitógenos. Após a estimulação pelo DENV, as células B presentes nas PBMCs foram capazes de se diferenciarem em ASCs, tanto fenotipicamente quanto funcionalmente, em magnitude similar àquelas estimuladas com mitógenos. Essa diferenciação demonstrou ser dependente da presença de outras células contidas nas PBMCs, assim como do contato célula-célula. Embora ambos os estímulos tenham sido capazes de induzir a diferenciação de ASCs, eles diferiram metabolicamente e transcricionalmente. PBMCs estimuladas pelo DENV apresentaram um maior consumo de triptofano, associado à maior expressão de IDO1 e IDO2 e maior síntese de quinurenina, bem como maiores expressões de IL-10, BAFF e SYK. Ainda, as concentrações de quinurenina foram positivamente correlacionadas com a enumeração de ASCs nessas culturas. Dados de transcriptoma públicos de pacientes com Dengue também suportam esses achados. Outros flavivírus, como o vírus Zika e a cepa vacinal da Febre Amarela não foram capazes de induzir a mesma magnitude de diferenciação das células B em ASCs in vitro. Tão pouco apresentaram correlação entre a enumeração de ASCs e a síntese de quinurenina. Por fim, através da construção de uma hipotética via de diferenciação de células B em ASCs durante infecção pelo DENV, através da combinação de dados da literatura e transcriptomas públicos, demonstramos que moléculas relacionadas à via do STAT3 (IL-10, IL-6, IRF4 e BLIMP1) estão mais expressas nos pacientes infectados e moléculas que respondem aos sinais de cálcio (Calcineurina, NFATC1, DOK3 e GRB2) estão menos expressas nos pacientes infectados. Esses dados proporcionam um melhor entendimento da resposta de células B durante a infeção pelo DENV, particularmente sobre como o metabolismo e a sinalização das células B estão conectados nesse processo

Dengue is a mosquito-borne viral disease that affects annually about 100 million people worldwide. Caused by four Dengue virus (DENV) serotypes, it ranges from asymptomatic to life threatening forms. Curiously, Dengue patients present an exacerbated blood antibody-secreting cell (ASCs) response around seven days after the symptoms onset. The frequency of those DENV-induced ASCs represents more than 50% of all circulating blood B cells. This is greater than found in others viral infections, immunization contexts and even in ASCs related-leukemia patients. Moreover, the magnitude of that transitory response correlates with the disease severity. So, how does the DENV infection induce this enormous response? In order to answer this question we have combined in vitro and in silico approaches. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) obtained from healthy individuals were cultured in vitro during seven days in the presence of DENV or mitogens. Upon the DENV stimulation, PBMC-contained B cells were able to differentiate phenotypically and functionally into ASCs, both phenotypically and functionally, in a similar magnitude than mitogen-stimulated cells. This differentiation was demonstrated to be dependent of the presence of the remaining PBMCs, as well as of the cell-cell contact. Although both stimuli were able to induce the ASCs differentiation, they differed metabolically and transcriptionally. DENV-stimulated PBMCs showed higher tryptophan consumption, associated with higher IDO1 and IDO2 expression and higher kynurenine synthesis, as well as higher IL-10, BAFF and SYK expressions compared to mitogen-exposed counterparts. Additionally, the kynurenine concentrations were positively correlated with the ASCs-enumeration in those cultures. Public transcriptome data supports these findings as well. Other flaviviruses, such as Zika virus and the attenuated vaccine Yellow Fever were not able to induce the same magnitude of ASCs differentiation in vitro. Hence, they did not present a correlation between the number of generated ASCs and the supernatant kynurenine levels. Based on the combination of the literature and public transcriptome data, we have constructed a hypothetical B cell differentiation pathway that might be occurring during DENV infection. It displays that STAT3 pathway-related molecules (IL-10, IL-6, IRF4 and BLIMP1) are more expressed in Dengue patients and molecules that respond to calcium signals (Calcineurin, NFATC1, DOK3 and GRB2) are less expressed in Dengue patients than in control. These data provide a better understanding of the B cell response elicited by DENV infection, particularly about how the B cell metabolism and signaling can be connected into this process

Effect of selenium deficiency and its supplementation on DTH response, antibody forming cells and antibody titre.

Selenium levels and the activity of Selenoenzyme glutathione peroxidase were measure in whole blood in order to assess the selenium status. Delayed type of hypersensitivity (DTH) reaction was suppressed significantly in selenium deficient rats indicating the decrease in cellular immunity. The B cell function was impaired in selenium deficient rats as evident from decrease in the number of plaque forming cells and antibody titre. Selenium supplementation for 30 days recovered the DTH response and B cell function to a marked extent.

Anticuerpos contra productos extracelulares del estreptococo grupo A: importancia diagnóstica en la fibre reumática aguda / Antibodies against extracellular products of group a streptococcus. its diagnostic value in acute rheumatic fever

La infección estreptocóccica de la faringe es condición sine qua non el desarrollo de la fiebre reumática (FR), La demostración de esa infección suele requerir métodos inmunoserológicos que detectan anticuerpos contra productos extracelulares del estreptococo (PEE). Se evaluó la respuesta inmune humoral contra PEE en niños y adultos con y sin diagnóstico de FR. Se estableció que la distribución de valores para anti-estreptolisina O (AEL-O) no es gaussiana y que el valor de referencia debe manejarse como percentila. En adultos la percentila 97 es 227, en niños la percentila 90 es 451. En caso de FR, todos los enfermos excepto uno tuvo valores superiores. Una prueba de aglutinación que reconoce otros anticuerpos a PEE (Estreptozima mr), mostró en menores de 15 años que 15/28 los tenían a título bajo, en cambio en el grupo con FR sólo 1 mostró ausencia de esos anticuerpos. A mayor título de AEL-O mayor título en Estreptozima. Los métodos probados son eficientes para reconocer la respuesta inmune humoral contra PEE

Mecanismos inmunológicos en las enfermedades infecciosas / Immunologycal mecanisms of infectious diseases

Los mecanismos de inmunidad contra las infecciones bacterianas, parasitarias y virales son extremadamente complejos y tienen como principal función la eliminación de los microorganismos patógenos. Los sistemas de defensa no específicos contra las bacterias, son proporcionados por los granulocitos, que ingieren y matan a la mayoría de los patógenos. Sin embargo, se necesita de la inmunidad específica contra bacterias encapsuladas o intracelulares y contra parásitos y virus para eliminar a éstos, lo cual requiere del desarrollo de anticuerpos a través de la inmunidad humoral y de la inmunidad celular que puede desencadenar la actividad microbicida de los macrófagos. En muchas infecciones humanas, todos los mecanismos inmunológicos (anticuerpos, complemento, linfocitos, granulocitos y macrófagos) son esenciales para desarrollar una inmunidad protectora contra muchos microorganismos patógenos

Anticuerpos monoclonales y clones de linfocitos T contra antigenos HLA: producción y caracterización / Monoclonal antibodies and T-cell clones against HLA antigens: production and characterization

Inmunizando ratones Balb/c con líneas linfoblastoides humanas se produjeron y caracterizaron 21 anticuerpos monoclonales de los cuales 12 parecen estar reconociendo un determinante HLA polimórfo; 4 de ellos reconecen un epítope común a los antígenos Clase I y otro reconece moléculas HLA Clase II. Estos resultados se confirmaron en ensayos de ELISA, citotoxicidad, inmunofluorescencia e inmunopreciptación y la clase y subclase de las inmunoglobulinas se determinó por inmunodifusión de Ouchterlony. Se generaron además 22 clones de células T aloreactivas, por dilución limitante de linfocitos de un donante estimulados en cultivo mixto con linfocitos alogeneicos de sangre periférica; 5 de estos clones se caracterizaron detalladamente. Evaluando su capacidad para proliferar ante un panel de líneas linfoblastoides humanas, se encontró que reconecen las especificidades HLA-A9, A23, A29-31, Bw62 y DR7. Los resultados obtenidos parecen indicar que la generación de clones de células T humanas aloreactivas es mucho más eficiente que la producción de anticuerpos monoclonales múridos en cuanto a la definición de variantes polimórficas de los antígenos HLA

Oral vaccine against cholera prepared from Vibrio cholerae antigen(s).

Albino rats aged 7-8 weeks old purchased from the National Laboratory Animal Centre, Salaya, Nakhon Pathom, were found to be a good animal model for the study on immunogenicity of V. cholerae antigens. Seventy-two rats were fasted for 15 hours before feeding each one with 1 ml of 5% NaHCO3 to reduce gastric acidity prior to immunization. They were divided into 9 groups of 8 rats and immunized orally with 2 ml, each, of the V. cholerae antigens dissolved or suspended in Cassamino acid as follows: group 1 (control): Cassamino acid (Ca) alone; group 2 (control): 2.5% formalinized sheep red blood cells (F-SRBC); group 3: 1,000 micrograms of lipopolysaccharide (LPS); group 4: 100 micrograms of procholeragenoid (P); group 5: 80 haemagglutinating units of cell-bound haemagglutinin (CHA) adsorbed onto the surface of F-SRBC (CH-SRBC); group 6: 500 micrograms of LPS + 50 micrograms of P; group 7: CH-SRBC + 50 micrograms of P; group 8: combined vaccine formula 1 consisted of 500 micrograms of LPS, CH-SRBC and 50 micrograms of P and group 9: combined vaccine formula 2 consisted of 1,000 micrograms of LPS, CH-SRBC and 100 micrograms of P. The immunization was repeated once more 14 days later. Five days, thereafter, the rats were killed and their jejuni were removed for cryostat sectioning. Antibody producing cells against LPS (anti-LPS cells), P (anti-CT cells) and CHA (anti-CHA cells) in the intestinal lamina propria were enumerated by double antibody sandwich method of immunofluorescence using pure LPS, cholera toxin (CT) and pure CHA as the antigens in the assay, respectively.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)