Evaluation of antimutagenic and cytotoxic activity of skin secretion extract of Rhinella marina and Rhaebo guttatus (Anura, Bufonidae) / Avaliação da atividade antimutagênica e citotóxica da secreção cutânea de Rhinella marina e Rhaebo guttatus (Anura, Bufonidae)

The skin secretion from toads of the Bufonidae family has great potential in the search for new active compounds to be used as drug candidates in treating some diseases, among them cancer. In this context, this study aimed to evaluate the cytotoxic and antimutagenic activity of the parotoid gland secretion extracts of Rhinella marina and Rhaebo guttatus, as well as biochemically analyze transaminases and serum creatinine for liver and renal damage, respectively. Cytotoxicity was performed by the colorimetric method based on MTT (3- [4, 5-dimethyl-2-thiazolyl]-2, 5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide) with different concentrations of the extracts in Walker or splenic tumor cell cultures from rats and mice. The micronucleus test was performed with male Swiss mice treated orally with the extracts for 15 days, and then intraperitoneally with N-ethyl-N-nitrosurea (50 mg kg-1). Micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCE) were evaluated in bone marrow. The extracts showed cytotoxic activity in the evaluated cells. There was a significant reduction in the frequency of MNPCE (R. marina = 56% and R. guttatus = 75%, p < 0.001), indicating antimutagenic potential of the extracts. The groups treated only with extract showed an increase in MNPCE frequency, evidencing mutagenic potential. Biochemical analyzes showed no significant difference between treatments. Thus, under our experimental conditions, the extracts of R. marina and R. guttatus skin secretions presented chemopreventive potential for cancer. (AU)

A secreção cutânea de anuros da família Bufonidae tem grande potencial na busca de novos compostos ativos para utilização como fármacos candidatos no tratamento de algumas doenças, entre elas o câncer. Neste contexto, este estudo teve como objetivo avaliar a atividade citotóxica e antimutagênica dos extratos da secreção da glândula parótida de Rhinella marina e Rhaebo guttatus, bem como a análise bioquímica de transaminases e creatinina séricas, para avaliar dano hepático e renal, respectivamente. A avaliação de citotoxicidade foi realizada pelo método colorimétrico baseado no MTT (3-[4, 5-dimethyl-2-thiazolyl]-2, 5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide), com diferentes concentrações dos extratos em culturas de células do Tumor de Walker ou células esplênicas de rato e camundongo. O teste do micronúcleo foi realizado com camundongos Swiss machos que receberam tratamento oral com os extratos durante 15 dias, seguido de tratamento intraperitoneal com N-etil-N-nitrosuréia (50 mg kg-1). A frequência de eritrócitos policromáticos micronucleados (PCEMN) foi determinada em medula óssea. Os extratos apresentaram ação citotóxica nas células avaliadas. Houve uma redução significativa na frequência de PCEMN (R. marina = 56% e R. guttatus = 75%, p < 0,001), observando-se um potencial antimutagênico dos extratos. Os grupos tratados somente com os extratos apresentaram um aumento na frequência de PCEMNs, evidenciando um potencial mutagênico. As análises bioquímicas não apresentaram diferença significativa entre os tratamentos. Assim, nas condições experimentais testadas, as secreções cutâneas de R. marina e R. guttatus apresentaram potencial quimiopreventivo para câncer.(AU)

Morphoanatomic characterization of the stem and the leaf of Tabernaemontana catharinensis A. DC (Apocynaceae) and antimutagenic activity of its leaves / Caracterização morfoanatômica do caule e da folha de Tabernaemontana catharinensis A. DC (Apocynaceae) e atividade antimutagênica de suas folhas

ABSTRACT Tabernaemontana catharinensis A. DC (Apocynaceae) is used as a medicinal plant by the population. In order to contribute to the safe use of the plant as herbal medicine, this study aimed to morphoanatomically characterize the aereal vegetative organs of T. catharinensis and to evaluate the leaves’ mutagenic and antimutagenic activities. Histological blades of leaves and stem of T. catharinensis were performed; the methionine system (methG1) and Aspergillusnidulans conidia germination analysis were employed for mutagenic and antimutagenic evaluation. The morphoanatomic analysis did not show trichomes in the stem, petiole and leaf. Besides, it was observed both the presence of bi-collateral bundles - except in the foliar apex where the bundles were from the collateral type - as well as anamphistomatic leaf with paracyte stomata and sub-epidermal layer in the region of the leaf edges. The mutagenicity/antimutagenicity trial indicated a significant decrease of mutation frequency in comparison with the control group and showed that the T. catharinensis had antimutagenic activity within the type, time and form of treatment. Since the germination test showed that the conidia germination was accelerated from the bud phase, activities at the cell cycle level and polarized growth proved to be possible. The morphoanatomic analysis of the leaf and stem associated with the mutagenic and antimutagenic analyses contributes to the safe use of the plant by humans and also for the quality control of a possible phytotherapeutic drug.

RESUMO Tabernaemontana catharinensis A. DC (Apocynaceae) é utilizada como planta medicinal pela população. A fim de contribuir para o uso seguro da planta como medicinal, este trabalho teve como objetivo caracterizar morfoanatomicamente os órgãos vegetativos aéreos de T. catharinensis e avaliar a atividade mutagênica e antimutagênica de suas folhas. Foram realizados cortes histológicos da folha e do caule de T. catharinensis e, para a avaliação mutagênica e antimutagênica, foi utilizado o sistema metionina (methG1) e análise da germinação de conídios em Aspergillus nidulans. A análise morfoanatômica evidenciou a ausência de tricomas no caule, pecíolo e folha; presença de feixes bicolaterais, com exceção no ápice foliar cujos feixes são do tipo colateral; folha anfiestomática com estômatos paracíticos e camada subepidérmica na região do bordo foliar. O ensaio de mutagenicidade/antimutagenicidade mostrou uma diminuição significativa da frequência de mutação em relação ao controle, indicando que nesse tipo, tempo e forma de tratamento, T. catharinensis apresentou atividade antimutagênica. O ensaio de germinação evidenciou que houve aceleração da germinação dos conídios, a partir da fase de botão, indicando uma possível atuação em nível de ativação de ciclo celular e crescimento polarizado. A análise morfoanatômica da folha e do caule associados à análise mutagênica e antimutagênica, contribuem para o uso seguro da planta pela população e para o controle de qualidade de um possível fitoterápico.

Avaliação fitoquímica e atividade antioxidante, antimutagênica e toxicológica do extrato aquoso das folhas de Ocimum gratissimum L / Phytochemical Assessment And Antioxidant, Antimutagenic And Toxicological Activity Of Ocimum gratissimum L. Leaf aqueous extract

A espécie Ocimum gratissimum L., popularmente conhecida como alfavaca, é uma planta muito usada na medicina tradicional brasileira, à qual são atribuídas diversas atividades terapêuticas quando usada na forma de infuso de suas folhas. Neste estudo foi realizada a caracterização fitoquímica, a avaliação da ação antioxidante e a investigação dos efeitos antimutagênico e antigenotóxico, além do efeito mutagênico e genotóxico potencial do extrato aquoso liofilizado a parir das folhas de O. gratissimum (EAOG). O conteúdo de polifenóis totais no extrato foi determinado pelo método Folin-Ciocalteu, sendo encontrado 11,3 µg EAG/mg de EAOG. A atividade antioxidante foi avaliada pelo teste do 1,1-difenil-2-picril hidrazil (DPPH•), apresentando IC50 de 83,0 µg/mL. A antimutagenicidade e mutagenicidade foram avaliadas em cepas de Salmonella typhimurium (TA98 e TA100) utilizando o teste Salmonella/microssoma (Salmonella typhimurium/microssomas) em diferentes concentrações. EAOG induziu a atividade antimutagênica para a cepa TA98. A mutagenicidade não foi observada para o extrato em ambas as linhagens. Adicionalmente, a ação antigenotoxica avaliada pelo teste de clivagem do DNA-plasmidial também foi observada para EAOG. Os resultados também demonstraram que o extrato não foi capaz de induzir a genotoxicidade pelo teste empregado. Este estudo relata, pela primeira vez, as propriedades antimutagênica e antigenotóxica do extrato aquoso de O. gratissimum.

The species Ocimum gratissimum L., popularly known as Clove Basil, is a plant widely used in traditional Brazilian medicine, and several therapeutic activities are attributed to it when used as infusion of its leaves. In this study, we carried out a phytochemical characterization and the assessment evaluation and investigation of the antioxidant action of the antimutagenic and antigenotoxic effects and the potential mutagenic and genotoxic effects of the freeze-dried aqueous extract of the O. gratissimum (EAOG) leaves. The total polyphenol content in the extract was determined by the Folin-Ciocalteu method, and we found 11.3 µg EAG/mg of EAOG. The antioxidant activity was assessed by the 1,1-diphenyl-2-picryl hidrazil (DPPH·), with IC50 of 83.0 µg/mL. Antimutagenicity and mutagenicity were assessed in Salmonella typhimurium (TA98 and TA100) strains using the Salmonella/microsome (Salmonella typhimurium/microsome) test in different concentrations. EAOG induced antimutagenic activity for strain TA98. Mutagenicity was not observed for the extract in both strains. Additionally, antigenotoxic action, assessed by cleavage of the DNA-damage, was also observed for EAOG. The results also show that the extract was not able to induce genotoxicity by the test used. This study reports for the first time the antimutagenic and antigenotoxic properties of the O. gratissimum aqueous extract.

Ausência de mutagenicidade e antimutagenicidade do extrato obtido das flores do ipê roxo [Tabebuia impetiginosa (Mart. ex DC.) Standl.] / Absence of mutagenicity and antimutagenicity of the extract obtained from the flowers of "ipê roxo" Tabebuia impetiginosa (Mart. ex DC.) Standl

A Tabebuia impetiginosa, conhecida popularmente como ipê-roxo, é uma planta nativa das florestas tropicais chuvosas da América do Sul e Central. Componentes químicos obtidos da casca têm mostrado efeito terapêutico, como antiinflamatório, antifúngico e antibacteriano. Porém, pela falta de dados na literatura, pouco se sabe sobre os efeitos do extrato das flores. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial mutagênico e antimutagênico do extrato obtido das flores da T. impetiginosa, em três diferentes concentrações (100, 300 e 500 mg kg-1 p.c.) pelo teste do micronúcleo. Para o teste de mutagenicidade, a doxorrubicina (DXR, 90 mg kg-1 p.c.) foi utilizada como indutor de danos no DNA e para o teste de antimutagenicidade, os tratamentos com o extrato foram realizados simultaneamente com este agente químico. O sangue periférico dos animais foi coletado 24 horas após os tratamentos. A comparação da frequência de eritrócitos policromáticos (PCEs) em 400 eritrócitos/animal entre os diferentes grupos não demonstrou qualquer citotoxicidade do extrato. Em relação às frequências de micronúcleos em PCEs (PCEMNs), não foram observadas diferenças significativas entre os grupos tratados com as diferentes concentrações de extrato e o controle negativo. Da mesma forma, todos os grupos de animais que receberam os tratamentos simultâneo do extrato (100, 300 ou 500 mg kg-1 p.c.) com a DXR, apresentaram valores de PCEMNs muito próximos quando comparados com os dados observados no grupo de animais que recebeu somente a DXR. Esses resultados apresentados indicam ausência de efeito mutagênico e antimutagênico do extrato obtido das flores da T. impetiginosa em sistema teste in vivo.

T. impetiginosa, known as "ipê-roxo", is a plant native to tropical rain forests of Central and South Americas. Chemical compounds obtained from its bark have shown anti-inflammatory, antifungal and antibacterial therapeutic effect. However, due to the lack of data in the literature, little is known about the effects of its flower extract. Thus, the aim of this study was to evaluate the mutagenic and antimutagenic potential of the extract obtained from T. impetiginosa flowers at three different concentrations (100, 300 and 500 mg kg-1 p.c.) by the micronucleus test. For the mutagenicity test, doxorubicin (DXR, 90 mg kg-1 p.c.) was used as DNA-damage inducer, while for the antimutagenicity test, treatments with the extract were performed simultaneously with this chemical agent. The peripheral blood of animals was collected 24 hours after the treatments. The frequency of polychromatic erythrocytes (PCEs) in 400 erythrocytes/animal was compared among the different groups and showed no extract cytotoxicity. As regards the frequency of micronuclei in PCEs (PCEMNs), there were no significant differences between the groups treated with different concentrations of extract and the negative control. Similarly, all groups of animals that received the simultaneous extract treatments (100, 300 or 500 mg kg-1 p.c.) with DXR showed very similar values of PCEMNs when compared with the data observed for the group of animals that received DXR alone. These results indicate no mutagenic and antimutagenic effect of the extract obtained from T. impetiginosa flowers in the testing system in vivo.

Assessment of mutagenic and antimutagenic effects of Punica granatum in mice / Avaliação dos efeitos mutagênicos e antimutagênica de Punica granatum em camundongos

In the present study, the ability of Punica granatum ethanolic leaf extract (PGL) and Punica granatum ethanolic fruit extract (PGF) to induce mutagenicity or to modulate the genotoxic effects induced by the alkylating agent cyclophosphamide (CP) was evaluated. Swiss male mice were treated by gavage for 10 days with PGL or PGF (12.5, 25, 50, and 75 mg/kg/day) prior to exposure to CP (i.p. 200 mg/kg), 24 h after the end of the treatment. Initial observations revealed that normal mice treated with both extracts (12.5, 25, 50, and 75 mg/kg/day) showed a similar micronucleated polychromatic erythrocyte (MNPCE) frequency to that of the control group. Investigation of the protective effect of PGL and PGF based on data analysis revealed that, irrespective of dose or extract, oral administration of PGL or PGF for 10 days prior to exposure had reduced, in a dose-dependent manner, the frequency of MNPCE induced by CP in all groups studied. Higher reductions were observed at PGF doses of 50 and 75 mg/kg. Taken together, these results demonstrate that mice treated with P. granatum showed an absence of mutagenic effects and dose-dependent protective effects against CP-induced oxidative DNA damage.

No presente estudo investigamos o potencial do extrato etanólico das folhas da Punica granatum (PGFO) e do extrato etanólico dos frutos da Punica granatum (PGFR) de induzir mutagenicidade ou de proteger contra efeitos genotóxicos induzidos pela ciclofosfamida (CF). Camundongos machos Swiss foram tratados por 10 dias, via oral, com PGFO ou PGFR (12,5, 25, 50 e 75 mg/kg/dia), previamente a exposição à CF (i.p. 200 mg/kg) 24 horas após término do tratamento. Observamos que os animais tratados por 10 dias com ambos os extratos (12,5, 25, 50 e 75 mg/kg/dia) demonstraram a frequência de micronúcleo policromático eritrocitário (MNPCE) similar ao grupo controle. Quando aos efeitos protetores dos extratos foram investigados, a análise dos dados revelou que, independentemente da dose ou do extrato usado, a administração oral por 10 dias, previamente à exposição, reduziu, de forma dose-dependente, a frequência de MNPCE induzidos pela CF, em todos os grupos estudados. As maiores reduções foram observadas com PGFR nas doses de 50 e 75 mg/kg. Em conjunto, sob as condições testadas, camundongos tratados com P. granatum demonstraram ausência de efeitos mutagênicos e, de forma dose-dependente, efeitos protetores contra os danos oxidativos do DNA induzidos pela CF.