Expression of cell adhesion molecules in the normal and T3 blocked development of the tadpole's kidney of Bufo arenarum (Amphibian, Anuran, Bufonidae) / Expressão das moléculas de adesão celular no desenvolvimento normal e com a inibição do hormônio tireoidea do rim nas larvas do Bufo arenarum (Amphibia, Anura, Bufonidae)

Cell adhesion molecules act as signal transducers from the extracellular environment to the cytoskeleton and the nucleus and consequently induce changes in the expression pattern of structural proteins. In this study, we showed the effect of thyroid hormone (TH) inhibition and arrest of metamorphosis on the expression of E-cadherin, β-and α-catenin in the developing kidney of Bufo arenarum. Cell adhesion molecules have selective temporal and spatial expression during development suggesting a specific role in nephrogenesis. In order to study mechanisms controlling the expression of adhesion molecules during renal development, we blocked the B. arenarum metamorphosis with a goitrogenic substance that blocks TH synthesis. E-cadherin expression in the proximal tubules is independent of thyroid control. However, the blockage of TH synthesis causes up-regulation of E-cadherin in the collecting ducts, the distal tubules and the glomeruli. The expression of β-and α-catenin in the collecting ducts, the distal tubules, the glomeruli and the mesonephric mesenchyme is independent of TH. TH blockage causes up-regulation of β-and α-catenin in the proximal tubules. In contrast to E-cadherin, the expression of the desmosomal cadherin desmoglein 1 (Dsg-1) is absent in the control of the larvae kidney during metamorphosis and is expressed in some interstitial cells in the KClO4 treated larvae. According to this work, the Dsg-1 expression is down-regulated by TH. We demonstrated that the expression of E-cadherin, Dsg-1, β-catenin and α-catenin are differentially affected by TH levels, suggesting a hormone-dependent role of these proteins in the B. arenarum renal metamorphosis.

Moléculas de adesão celular atuam como tradutores do ambiente extracelular para o citoesqueleto e o núcleo e, conseqüentemente, induzindo mudanças no padrão da expressão das proteínas estruturais. Neste estudo, observamos os efeitos da inibição do hormônio tireóidea (TH) e detenção da metamorfose na expressão da E-caderina, β- e α- catenina no desenvolvimento do rim do Bufo arenarum. As moléculas de adesão celular durante o desenvolvimento têm uma expressão temporal e espacial seletiva, sugerindo um papel específico na nefrogênese. Com o propósito de estudar os mecanismos de controle da expressão das moléculas de adesão durante o desenvolvimento renal, bloqueou-se a metamorfose do B. arenarum com uma substancia goitrogênica que bloqueia a síntese de TH. A expressão da E-caderina nos tubos proximais é independente do controle da tireóide. Entretanto, o bloqueio da síntese de TH provoca uma sobre elevação da E-caderina nos dutos coletores, nos tubos distais e nos glomérulos. A expressão da β- e α-catenina nos dutos coletores, nos tubos distais, nos glomérulos e no mesênquima mesonéfrico é independente da TH. O bloqueio da TH causa uma sobre-regulação da β- e α-catenina nos tubos proximais. Em contraste com a E-caderina, a expressão da caderina desmossomal demogloína 1 (Dsg-1) é ausente no controle durante a metamorfose da fase larval dos rins e se expressa em algumas células intersticiais nas larvas tratadas com KClO4. De acordo com este trabalho, a expressão Dsg-1 é subregulada pela TH. Demonstramos que a expressão da E-caderina, Dsg-1, β-catenina e α-catenina são afetadas de forma diferencial pelos níveis de TH, sugerindo um dependência hormonal destas proteínas na metamorfose renal do B. arenarum.

Antibacterial activity of lactose-binding lectins from Bufo arenarum skin

Amphibians respond to microbial infection through cellular and humoral defense mechanisms such as antimicrobial protein secretion. Most humoral defense proteins are synthetized in the skin. In this study we isolated two beta-galactoside-binding lectins with molecular weights of 50 and 56 KDa from the skin of Bufo arenarum. These lectins have significant hemagglutination activity against trypsinized rabbit erythrocytes, which was inhibited by galactose-containing saccharides. They are water-soluble and independent of the presence of calcium. The antimicrobial analysis for each lectin was performed. At mumolar concentration lectins show strong bacteriostatic activity against Gram negative bacteria (Escherichia coli K12 4100 and wild strains of Escherichia coli and Proteus morganii) and Gram positive bacteria (Enterococcus faecalis). The antibacterial activity of these lectins may provide an effective defense against invading microbes in the amphibian Bufo arenarum.

Arginase activity in Bufo arenarum embryos

The evolution of arginase activity during development of Bufo arenarum embryos was studied. The enzyme activity was detected after the neural groove stage, being low at the following early stages and increasing progressively until the end of the embryonic development. Arginase activity was first found in the neurula stage, when an outline of basic structures for renal and hepatic function is present. The activity increased two- or three-fold at the beginning of the larval stages

RNA metabolism in the follicle cells of Bufo arenarum oocytes: I. Biochemical studies

Se determinó la captación de 3H adenosina en células foliculares y ovocitos ováricos totalmente crecidos de Bufo arenarum, y la incorporación del trazador radioactivo en ARN total y en la fracción reistente a ribonucleasas. Se incubaron 3H adenosina en folículos y envolturas foliculares (I-FE). En el primer caso, luego de la incubación las envolturas foliculares fueron manualmente separadas (O-FE). En el primer caso, luego de la incubación las envolturas foliculares fueron manualmente separadas (O-FE) y procesadas independiente de los ovocitos . I-FE incorporó 2,9 veces más 3H adenosina que O-FE. Los medios de incubación de I-FE y O-FE fueron analizados; en el primer caso se encontró 10.2 veces más radioactividad en macromoléculas que en el segundo caso. Se realizó una caracterización parcial de la ARN recientemente sintetizada, mediante electroforesis, encontrándose diferentes patrones para ARN de I-FE y O-FE. Una posible explicación para los resultados obtenidos es que las células foliculares transfieren ARN recientemente sintetizado al ovocito y, en ausencia de esto, al medio de incubación

RNA metabolism in the follicle cells of Bufo arenarum oocytes: II. Autoradiographic studies

Se incubaron folículos ováricos, conteniendo ovocitos totalmente crecidos de Bufo arenarum en 3H adenosina por períodos de hasta 16 horas. Autorradiografías de cortes de los folículos mostraron que los núcleos de las células foliculares y los nucleolos de las vesículas germinales de los ovocitos se presentaron fuertemente marcados. El nucleoplasma y la region cortical del ovocito están más radioactivos que las zonas subcortical y la periferia de la vesícula germinal. La región cortical es la única que muestra incrementos significativos en la concentración de granos de plata luego de un período de "chase". Esto sugiere que los granos de plata de la región cortical provienen de las células foliculares y no de la vesícula germinal. El agregado de Actinomicina D a los medios de incubación reduce notablemente los depósitos de plata, indicando que las moléculas marcadas son ARN