ABSTRACT
ABSTRACT Purpose: The goal of the present study was to establish a protocol for primary culture of lacrimal gland acinar cells (LGACs) and to assess the effect of adding insulin to the culture media. Methods: LGACs were isolated and cultured from lacrimal glands of Wistar male rats. The study outcomes included cell number, viability, and peroxidase release over time and in response to three concentrations of insulin (0.5, 5.0, and 50.0 μg/mL). Results: In LGAC primary culture, cells started to form clusters by day 3. There was a time-response pattern of peroxidase release, which rose by day 6, in response to carbachol. Culture viability lasted for 12 days. An insulin concentration of 5.0 μg/mL in the culture medium resulted in higher viability and secretory capacity. Conclusions: The present method simplifies the isolation and culture of LGACs. The data confirmed the relevance of adding insulin to maintain LGACs in culture.
RESUMO Objetivo: O objetivo do estudo foi estabelecer um protocolo de cultura primária para o isolamento de células acinares da glândula lacrimal (CAGL) e avaliar a relevância de insulina no meio de cultura. Métodos: CAGL foram isoladas e cultivadas a partir das glândulas lacrimais de ratos Wistar machos. Os parâmetros analisados foram: o número de células, viabilidade e secreção da peroxidase ao longo do tempo e em resposta a três concentrações de insulina (0,5; 5,0 e 50,0 μg/ml). Resultados: Na cultura primária de CAGL as células passaram a se agrupar por volta do dia 3. A secreção de peroxidase em resposta ao carbacol aumentou no dia 6. O período de cultura viável foi limitado à 12 dias. Insulina à 5,0 μg/ml no meio de cultura resultou em viabilidade e capacidade secretora maior. Conclusão: o estudo descreveu um método para simplificar o isolamento e cultivo de CAGL. Os dados apresentados confirmam a importância da insulina na manutenção da cultura de CAGL.
Subject(s)
Animals , Male , Acinar Cells/cytology , Primary Cell Culture/standards , Insulin/pharmacology , Lacrimal Apparatus/cytology , Carbachol/metabolism , Cell Count/methods , Cell Separation/methods , Rats, Wistar , Peroxidase/metabolism , Acinar Cells/drug effects , Acinar Cells/metabolism , Insulin/metabolism , Lacrimal Apparatus/metabolismABSTRACT
La melatonina es el principal indol secretado por la glándula pineal.Además de su efecto antigonadotrófico, se han descrito diversos efectos fisiológicos no hormonales. Entre estos se han reportado la inhibición de la contracción de tejidos con musculatura lisa, aunque este efecto se ha sido descrito ampliamente. El presente estudio se realizó con el propósito de caracterizar el efecto de la melatonina sobre la contracción uterina inducida por carbacol. Se realizó un estudio in vitro empleando úteros de ratas estrogenizadas de la cepa Wistar. La contracción fue producida por carbacol en un rango de concentración de 5 x 10 a 10 M/ml, en ausencia y presencia de melatonina. De ésta se emplearon las siguientes concentraciones: 10, 2.5 x 10 M/ml. Los resultados obtenidos muestran que la concentración efectiva media de carbacol para inducir contracción uterina se incrementa significativamente en precencia de melatonina a las concentraciones de 10 y 10 M/ml. Las curvas log de la concentración- porcentaje de contracción máxima para carbacol en presencia de melatonina se desplazan a la derecha de la curva de carbacol en ausencia de melatonia. Se concluye que la melatonina inhibe la contracción producida por carbacol de manera dependiente de la concentración, comportándose como una antagonista fisiológico.