Terapia fotodinâmica em células de tumores pancreáticos humanos: eficiência e análise das vias mediadoras de citotoxicidade / Photodynamic therapy in human pancreatic tumors: efficiency and analysis of cytotoxicity mediator pathways

O adenocarcinoma de ducto pancreático (PDAC) é a quarta causa de morte em decorrência de neoplasias nos países ocidentais. Atualmente, a cirurgia ressectiva é a única possibilidade de cura para a doença, porém, a recidiva tumoral acontece em menos de um ano após a intervenção cirúrgica, mesmo com a quimioterapia adjuvante. A terapia fotodinâmica (PDT) é uma alternativa promissora no tratamento do câncer. No entanto, pouco se sabe sobre o uso da PDT em tumores pancreáticos. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência da PDT com o azul de metileno (MB) como fotossensibilizador (MB-PDT) em induzir a morte de linhagens de PDAC humanas (AsPC-1, Panc-1, MIAPaCa-2 e BxPC-3) e estudar a contribuição de vias de necrose regulada nos efeitos citotóxicos da terapia sobre estes modelos. Os resultados obtidos mostraram que a MB-PDT foi capaz de induzir a morte massiva das células de PDAC. Além disso, eles indicaram que há dois perfis de susceptibilidade entre as quatro linhagens estudadas quando submetidas a MBPDT com 4,5 J/cm2 de energia e 6min de irradiação. De acordo com os dados apresentados, a diferença nas sensibilidades das linhagens à terapia não está associada à diferenças na capacidade de incorporação do MB ou na localização sub-celular do fotossensibilizador nas diferentes células, uma vez que a localização é, predominantemente, lisossomal em todas elas. Adicionalmente, mostrou-se que as linhagens menos susceptíveis ao tratamento, MIAPaCa-2 e Panc-1, apresentam níveis significativamente menores de RIPK3 e MLKL, dois dos componentes do necrossomo, essenciais para a execução da necroptose. Além disso, foi visto que a MB-PDT induz um aumento de fosforilação de MLKL em AsPC-1, demonstrando a ativação da necroptose após a terapia nestas células, mas não em MIAPaCa-2 (menos responsiva à terapia com 4,5 J/cm2 deenergia e 6min de tempo de irradiação). Ainda, a inibição da via de sinalização necroptótica diminuiu significativamente as porcentagens de morte das células mais susceptíveis (BxPC-3 e AsPC-1), não alterando a resposta de Panc-1 e MIAPaCa-2, corroborando a ativação e importância da necroptose para a citotoxicidade da MB-PDT. Finalmente, neste trabalho foi mostrado que o aumento do tempo de irradiação, mantendo-se a quantidade total de energia aplicada no tratamento, melhora a eficiência da MB-PDT em induzir a morte das células que apresentam limitações para executar a necroptose, sugerindo que mais de uma via de morte esteja sendo ativada após a terapia e que o tempo de irradiação atuaria modulando esta ativação. Complementarmente, foi mostrado que os tempos maiores de irradiação aumentam o estresse oxidativo intracelular que é acompanhado por uma diminuição significativa do conteúdo intracelular de glutationa reduzida (GSH), indicando, preliminarmente, que a ferroptose pode estar sendo acionada após os protocolos mais longos de irradiação. Coletivamente, os resultados apresentados neste trabalho confirmam a eficiência da MB-PDT no tratamento de diferentes linhagens de PDAC, indicando que a necroptose está sendo ativada e contribuindo para a citotoxicidade da terapia sobre as células que não apresentam resistência à esta via de morte. Ainda, eles demonstram que o aumento do tempo de irradiação pode transpor a barreira de resistência de algumas linhagens à terapia, provavelmente por induzir a ativação de outras vias de necrose regulada, mostrando a importância da otimização do protocolo de tratamento no aumento da eficiência da MB-PDT sobre os tumores de pâncreas. Finalmente, os resultados confirmam a MB-PDT como alternativa eficaz no tratamento do PDAC, apresentando um amplo espectro de atuação sobre subtipos tumorais resistentes à vias clássicas de morte celular, uma característica importante no contexto de uma terapia anti-cancer

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is the fourth leading cause of death due to neoplasms in western countries. Currently, resective surgery is the only therapetical approach to cure this disease, but tumor´s recurrence occurs less than one year after the surgery, even with adjuvant chemotherapy. Photodynamic therapy (PDT) is a promising alternative for the cancer treatment. However, the efficacy of PDT to treat pancreatic tumors as well as the mechanisms involved in the induction of tumorigenic cell death remain unclear. For this purpose, in this study, we set out to evaluate the efficacy of PDT using methylene blue (MB) as a photosensitizer (MB-PDT), in inducing death of human PDAC derived cell lines (AsPC-1, Panc-1, MIAPaCa-2 and BxPC-3) and to deeper investigate the contribution of necroptosis to the cytotoxic effects of the therapy. We observed that MB-PDT was able to induce massive death of PDAC cells. Moreover, our results indicated that upon MB-PDT (4.5 J/cm2 energy and 6min of irradiation time), there were two susceptibility profiles among the four cell lines studied. Data also showed that this differential profile of cell response was neither associated with the differences in the MB incorporation capacity nor with the subcellular location of the photosensitizer, since the localization was predominantly lysosomal in all of tested cell lines. In addition, less susceptible cells, MIAPaCa-2 and Panc-1, showed significantly lower levels of RIPK3 and MLKL, two of the necrosome components, essential for triggering necroptosis. Furthermore, while MB-PDT (4.5 J/cm2 and 6min of irradiation) has been able to increase MLKL´s phosphorylation levels, an essential step in necroptosis induction, in AsPC-1cells, less responsive MIAPaCa-2 cells presented no variations on the phosphorylation state of this pseudokinase. Moreover, pharmacological inhibition of the necroptotic signaling pathway significantly decreased cell death percentages of the most susceptible cells (BxPC-3 andAsPC-1), without altering the response of Panc-1 and MIAPaCa-2, corroborating that activation of necroptosis was strongly involved in the cytotoxicity of MB-PDT. Finally, this work showed that increasing the irradiation time improved the efficacy of MB-PDT in killing cells which display limitations to perform necroptosis, suggesting that the irradiation time would be modulating the degree of oxidative stress generated and this stimuli would in turn, be responsible for triggering other regulated cell death pathways in a RIKP3 and MLKL independent way. Indeed, this increase in oxidative stress was accompanied by a significant decrease in GSH, a global indicatior of less antioxidant cell capacity, preliminarily pointing at the induction of ferroptosis by longer irradiation protocols. In summary, we demonstrated that MB-PDT is able to induce cell death in different PDAC cell lines and that different regulated cell death mechanisms are being activated upon MB-PDT induction. Furthermore, it was demonstrated that increased irradiation time may overcome the resistance barrier of some cell lines, probably inducing the activation of other regulated cell death pathways, showing the importance of optimizing the irradiation protocol in order to maximize the efficacy of the therapy. Finally, our observations point MB-PDT as an alternative and effective therapy for pancreatic cancer treatment, displaying a broad-spectrum action on tumors displaying different resistance mechanisms to classic cell death pathways, a desired property for improving an anticancer therapy

Prevalência de alterações citológicas anais em pacientes com citologia cervical anormal / Prevalence of cytological anal abnormalities in patients with abnormal cervical cytology

A incidência do carcinoma escamoso anal vem crescendo expressivamente. Principal fator associado a ele é o Papiloma Vírus Humano (HPV). Estudos epidemiológicos mostram fases pré-clínicas antes do início do câncer anal. Esse trabalho visou a estimar a prevalência de alterações citológicas anais em pacientes com citologia cervical anormal e sem lesão macroscópica HPV induzida na região anal. Foram selecionadas 70 mulheres com citologia cervical alterada, soronegativas para o Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV) e sem lesão perianal macroscópica pelo HPV. As pacientes foram submetidas a um questionário e foram realizadas coletas de captura híbrida anal e cervical, bem como de uma amostra de citologia oncológica cervical e duas amostras anais. A prevalência das alterações citológicas anais encontrada foi de 71,4%, sendo que 57,1% apresentaram captura híbrida anal positiva. A prevalência de captura híbrida anal positiva para HPV de alto risco oncogênico em paciente com citologia cervical de atipia escamosa de significado indeterminado, provavelmente não neoplásico (ASC-US) e de lesão intraepitelial escamosa de baixo grau (LSIL) foi de 27,1% e, em pacientes com citologia cervical de atipia escamosa de significado indeterminado, não podendo excluir lesão intraepitelial de alto grau (ASC-H), lesão intraepitelial escamosa de alto grau (HSIL), e carcinoma epidermóide do colo do útero foi de 30%. Pacientes com captura cervical positiva tiveram 4 vezes mais chance de apresentar captura anal positiva (OR=4; p=0,018). Concluímos haver alta prevalência citológica anal alterada na população estudada. O risco de contaminação anal é significativo nas pacientes com HPV de alto poder oncogênico em cérvice, portanto todas as pacientes com citologia cervical anormal merecem investigação anal, independente da gravidade do laudo citológico

The incidence of anal squamous cell carcinoma has been growing significantly. The main risk factor associated with this injurie is the Human Papilloma Virus (HPV). As studies have shown preclinical stages before the onset of anal cancer. This study aimed to estimate the prevalence of anal cytological abnormalities in patients with abnormal cervical cytology and without macroscopic HPV induced lesions in the anal region. The sample consisted of 70 women with abnormal cervical cytology, seronegative for human immunodeficiency virus (HIV) and without macroscopic anal lesions. Patients answered a questionnaire a were submited to collection of anal and cervical hybrid capture assay and collection of a sample of cervical cytology of two anal samples. Prevalence of anal cytological abnormalities found in patients with cervical cytological abormalities without macroscopic anal lesions was 71.4% and 57.1% of patients showed positive anal capture. Prevalence of positive hybrid capture to oncogenic anal HPV in patients with cervical cytology of atypical squamous cells of undetermined significance (ASC-US) and of low grade squamous intraepithelial lesion (LSIL) was 27.1%. Prevalence in patients with cervical cytology of atypical squamous cells – cannot exclude (ASC-H), high grade squamous intraepithelial lesion (HSIL) and squamous cell carcinoma of the uterine cervix in situ or were 30%. Patients with positive cervical capture were 4 times more likely to present positive anal capture (OR=4, p=0.018). In conclusion, we found a high prevalence of anal cytology abnormalities in this population. The risk of anal contamination is significant in patients with oncogenic HPV in cervix, so all patients with abnormal cervical cytology deserve anal investigation, regardless of the severity of cytological report

Classificação citológica dos linfomas caninos / Cytological classification of canine lymphomas

Os linfomas estão entre as neoplasias mais frequentes na espécie canina. Do ponto de vista etiológico, epidemiológico, clínico, morfológico e imunofenotípico os linfomas caninos apresentam muitas semelhanças com os linfomas não-Hodgkin humanos e os esquemas de classificação destes têm sido utilizados na espécie canina. O objetivo do presente trabalho foi aplicar aos linfomas caninos as classificações de Kiel, Working Formulation e Fournel-Fleury, et al., (1994) em material colhido pelo método da PAAF (Punção Aspirativa por Agulha Fina). De acordo com a Classificação de Kiel, 61,02% (36 casos) das neoplasias se enquadram como de grau alto 38,98% (23 casos) como de grau baixo. Segundo a Classificação da Working Formulation, 11,86% (sete casos) foram classificados linfomas de grau baixo, 61,02% (36 casos) de grau intermediário e 27,12% (16 casos) de grau alto. Utilizando a classificação proposta por Fournel-Fleury et al. (1994), 38,98% (23 casos) dos animais que apresentaram linfomas de grau baixo e 61,02% (36 casos) de grau intermediário ou alto. Concluindo, a PAAF é um método de diagnóstico que pode ser empregado na classificação dos linfomas caninos. A classificação que mostrou melhores resultados foi a de Kiel, que tem por característica principal a ênfase nos achados citológicos.

Lymphoma is among the most frequent canine neoplasia and share many similarities with human non-Hodgkin’s lymphoma in respect of etiology, epidemiology, clinical, morphological and immunophenotipical aspects. Human classification schemes have been used in canine lymphoma. The aim of this work was apply Kiel, Working Formulation and Fournel-Fleury’s et al. (1994) classification in Fine Needle Aspiration (FNA) cytology matherial. According to Kiel scheme 61.02% (36 cases) were high-grade lymphomas and 38.98% (23 cases) low grade. The Working Formulation, showed 11.86% (7 cases) of low grade, 61.02% (36 cases) intermediary grade and 27.12% (16 cases) high grade. In Fournel-Fleury’s protocol revealed a predominance of high-grade lymphoma, with 61.02% (36 cases) over 38.98% (23 cases) of low grade. In conclusion, FNA can be used as a diagnostic method and in canine lymphoma cytological classification. Kiel’s system showed the best results, once is based on cytologic basis.

Evolución clínica del condiloma con y sin tratamiento mujeres de 15-49 años, Hospital Bertha Calderón Roque enero-dicembre 1997-1999

El grupo etáreo mayormente afectado en este estudio fueron mujeres entre los 27-32 años con un 26 porciento continuándoles el grupo de 33 a 38 años con un 25 porciento. La ocupación más representativa fueron las amas de casa con un 70 porciento y un 78 porciento en los grupos tratados y no tratados respecativamente. La mayoría de las mujeres fueron de procedencia urbana con un 72 porciento y 69 porciento en los grupos de tratadas y no tratadas;, la escolaridad que predominó fue la primaria con un 46 porciento y un 32 porciento respectivamente; la mediana de los antecedentes ginecobstétricos en las mujeres con condiloma fueron gesta 4, paridad 3, cesárea 0 y aborto 0; las caracteríticas clínicas que predominaron fue la leucorrea con 67.9 porciento en las tratadas y de un 80.7 porciento de las no tratadas; el método de diagnóstico más frecuente utilizado fue le papanicolaou con un 49 porciento en las tratadas y 82 porciento en las no tratadas; dentro de las patologías asociadas al condiloma no se encontró ninguna patología relevante 33.8 porciento pero también hay que hacer notar que la vaginitis ocupa un segundo lugar de importancia como patología asociada a esta entidad con un 22 porciento; el esquema terapéutico más utilizado fue la crioterapia con un 54.6 porciento y ácido tricloroacetico en un 45.3 porciento; en un 77 porciento de las pacientes con tratamiento y un 44 porciento de las pacientes sin tratammiento no se presentaron complicaciones; las pacientes respectivamente al egresar de consulta externa

Citología endometrial con uterobrush / Endometrial cytology with cytobrush

Evaluar el Cytobrush en relación a la toma de la muestra de citología endometrial y a la calidad de la misma. Cepillado endometrial con uterobrush en pacientes infértiles y perimenopáusicas. Consulta privada de ginecología de la Unidad de Ginecología, Reproducción y Salud Integral, de Valencia, durante los años 1991-1993. Obtención de 76 muestras evaluads (95 por ciento) del total de 80 pacientes seleccionadas por infertilidad o perimenopausia. En todos los extendidos había una gran riqueza celular, donde se destaca la presencia de un 8,75 por ciento de células estromales y glandulares atípicas y 1,25 por ciento de adenocarcinoma. Estas observaciones nos indican que el cepillado endometrial tomado con el uterobrush es un buen método, debido a que la representatividad celular de la muestra estudiada permite hacer el diagnóstico citológico de lesiones precursoras y de neoplasias endometriales, aun en pacientes asintomáticas

Biopsia mamaria por aspiración con aguja fina / Biopsy of the breast with fine needle by aspiration

Se evaluaron 43 casos de pacientes que asistieron a la Unidad de Patología Mamaria de la Maternidad Concepción Palacios, a las cuales se les detectó una masa palpable y se les realizó biopsia por aspiración con aguja fina. La sensibilidad del método fue de 83,33 por ciento, obteniendo una especificidad de 78,4 por ciento valor predictivó positivo y negativo del 100 por ciento. Se calcularon límites de confianza del 95 por ciento de verosimilitud

Factores de riesgo que influyen en la aparición de PAP I o de PAP IV o V, de la citología vaginal en las mujeres que acudieron a la liga contra el cáncer, seccional Bogotá en 1990 / Risk factors for PAP IV and PAP V in vaginal citology in women at liga contra el cáncer

La citología es uno de los métodos para la detección temprana de cáncer cervical por lo tanto se convierte en uno de los medios para la prevención y tratamiento de una enfermedad que es potencialmente mortal para la mujer. Los factores de riesgo que se han asociado a esta patología entre otros son: -Edad de la mujer -Edad de la primera relación sexual -Número de hijos -Métodos anticonceptivos -Número de compañeros sexuales -Tabaquismo. La población a estudio fueron las mujeres que consultaron a la liga contra el cáncer, seccional Santafé de Bogotá (Colombia) en el período comprendido entre Enero y Diciembre de 1990. Para su desarrollo se usó un estudio retrospectivo (casos y controles) y se utilizó la razón de disparidad (ODDS). En nuestro estudio encontramos que existe una asociación clara entre los factores estudiados y la presencia de una citología sospechosa. Se obtuvo una razón de disparidad de 9.78 (31-48 años) para la edad de la mujer; 6.03 entre los 11-15 años para el inicio de la primera relación sexual, 19.6 para las pacientes con 3 o más y 0.39 para las mujeres que usaban algun tipo de anticoncepción

Citología por aspiración con aguja fina correlación cito-histologíca de enero a octubre de 1989 / Citología by aspiración with needle fine correlation cito-histologic at january to october-1989

Se realizó un estudio de tipo retrospectivo y descriptivo, en el Hospital Manolo Morales Peralta, a las citologías por aspiración con aguja fina, para lo que se tuvo que revisar el archivo de patología en el período de enero a octubre de 1988. Del total de las citologías por aspiración realizadas en este período se investigaron todas aquellas que tenían además estudio histológicos ya sea por biopsia u otro procedimiento quirúrgico, con el objetivo de confrontar los diagnósticos cito-histológicos, considerando coincidentes cuando el diagnóstico histológico confirmaba el diagnóstico citológico