Ocorrência de Borrelia spp. em cultura de células embrionárias do carrapato Boophilus microplus (Acari: Ixodidae) no Estado do Mato Grosso do Sul, Brasil / Occurrence of Borrelia spp. in culture of embryonic cells of the tick Boophilus microplus (Acari: Ixodidae) in the State of the Mato Grosso do Sul, Brazil

O presente trabalho teve como objetivo reportar a ocorrência de Borrelia spp. em culturas de células embrionárias de Boophilus microplus infectados naturalmente. Sete dias após o início de uma nova cultura primária de células embrionárias do carrapato B. microplus, incubadas a 31ºC, notou-se que as células começaram a degenerar. Ao exame em microscópio de contraste de fase detectou-se a presença de microrganismos alongado e com grande mobilidade. Lâminas de microscópio confeccionadas com amostras do sobrenadante da cultura, hemolinfa e massa de ovos, coradas pelo May Grünwald-Giemsa, permitiram a visualização de espiroquetas. O exame morfológico do microrganismo e sua visualização em B. microplus sugere ser Borrelia spp.

The aim of the present work was to report the occurrence of Borrelia spp. in embryonic cell cultures from naturally infected Boophilus microplus. Seven days after the beginning of a primary culture of embryonic cells of B. microplus at 31ºC was noted that the cells start suffering degeneration. Under examination at phase contrast microscope, the presence of prolongated microorganisms with great mobility was detected. Microscopic slides of the culture supernatant, hemolymph and egg mass, were stained by May Grünwald-Giemsa, allowing the visualization of the spirochetes. The morphologic examination of the microorganism and its visualization in. B. microplus, suggest to be Borrelia spp.

Detection of multiple mycoplasma infection in cell cultures by PCR

A total of 301 cell cultures from 15 laboratories were monitored for mycoplasma (Mollicutes) using PCR and culture methodology. The infection was detected in the cell culture collection of 12 laboratories. PCR for Mollicutes detected these bacteria in 93 (30.9 percent) samples. Although the infection was confirmed by culture for 69 (22.9 percent) samples, PCR with generic primers did not detect the infection in five (5.4 percent). Mycoplasma species were identified with specific primers in 91 (30.2 percent) of the 98 samples (32.6 percent) considered to be infected. Mycoplasma hyorhinis was detected in 63.3 percent of the infected samples, M. arginini in 59.2 percent, Acholeplasma laidlawii in 20.4 percent, M. fermentans in 14.3 percent, M. orale in 11.2 percent, and M. salivarium in 8.2 percent. Sixty (61.2 percent) samples were co-infected with more than one mycoplasma species. M. hyorhinis and M. arginini were the microorganisms most frequently found in combination, having been detected in 30 (30.6 percent) samples and other associations including up to four species were detected in 30 other samples. Failure of the treatments used to eliminate mycoplasmas from cell cultures might be explained by the occurrence of these multiple infections. The present results indicate that the sharing of non-certified cells among laboratories may disseminate mycoplasma in cell cultures.

Bacterias identicadas por el sistema clásico y el sistema API-20E / Bacterias identificated by classic system and API-20E system

Se efectuaron 146 aislamientos bacterianos mediante el uso de hemocultivos. Dichos aislamientos se identificaron usando el método clásico y el sistema API-20E. Con el método clásico identificaron 84 cepas: 34 cepas de Estafilococo coagulasa negativa; 16 cepas de Estafilococo aureus patógeno; 9 cepas de Estreptococo no hemolítico; 13 cepas de Bacteroides; 4 cepas de citrobactter y una cepa de Shiguella flexneri. Con el sistena API-20E se identificaron 62 cepas; 7 cepas de Echerichia coli; 13 cepas de Salmonella tiphy; 22 cepas de Serratia marcescens; 8 cepas de Klebsiella neumoneae; 5 cepas de Enterobacter cloacae; 4 cepas de Acinetobacter calcoacético y 3 cepas de Pseudomona fluorences.

Identificaçäo de micoplasmas pela inibiçäo de crescimento de amostras isoladas de culturas celulares / Identification of mycoplasthe growth inhibition of samples isolated from cell cultures

As culturas celulares devem ser continuamente monitoradas quanto à presença de micoplasmas, pois, embora às vezes eles passem despercebidos, podem causar alteraçöes cromossômicas, interferir na replicaçäo viral, na produçäo de anticorpos e interferon. A Organizaçäo Internacional em Micoplasmologia (IOM) recomenda o isolamento e a identificaçäo de micoplasmas, visando detectar as prováveis origens da infecçäo e melhorar a qualidade das culturas. Assim, foram analisadas pela inibiçäo de crescimento, 37 amostras pertencentes a 27 linhagens celulares contaminadas por micoplasmas. Em nenhuma amostra foi observada a ocorrência de duas espécies. Foram identificados 18 (48,65%) Mycoplasma arginini, 15 (40,55%) Acholeplasma laidlawii, dois (5,40%) Mycoplasma orale, sendo que duas amostras (5,40%) näo foram identificadas. Considerando as espécies caracterizadas na pesquisa, os autores sugerem: a) a adoçäo do teste de isolamento de micoplasmas em caráter de rotina; b) o aprimoramento das técnicas de assepsia e desinfecçao; c) a eliminaçäo da pipetagem bucal; d) a utilizaçäo de soros e de outros componentes de meios de cultura de qualidade certificada; e) o questionamento da presença de micoplasmas quando linhagens celulares säo permutadas pelas instituiçöes; f) a avaliaçäo cautelosa de resultados obtidos quando se utilizam culturas infectadas por esse microrganismo

Detección de infección congénita por citomegalovirus a través del aislamiento viral y del estudio serológico / Detection of congenital cytomegalovirus infectiona through viral isolation and serologic study

El citomegalovirus (CMV) tiene especial relevancia en los recién nacidos por constituir la primera causa de infección congénita de origen viral, determinando diversas consecuencia en ellos. Actualmente, se dispone de una gran variedad de métodos para establecer el diagnóstico de esta infección, los cuales presentan ventajas y desventajas que delimitan su uso. El objetivo de este trabajo, fue determinar la incidencia de infección congénita por citomegalovirus a través del aislamiento viral clásico en cultivos celulares mediante la detección de inmunoglobulina M (IgM) en sangre de cordón umbilical. Se estudiaron 86 recién nacidos del Hospital Félix Bulnes a través del aislamiento viral, desde muestras de orina obtenidas en los primeros días de vida, las que fueron inoculadas en cultivos celulares. Al mismo tiempo, se realizó en 173 casos, el análisis de la sangre de cordón umbilical por ELISA, para investigar la presencia de IgM anti CMV. Se detectaron 5 niños positivos (2,5 por ciento), del total de niños estudiados por una de ambas técnicas y en sólo uno de ellos el diagnóstico fue positivo por los dos métodos. De las 86 muestras de orina informadas, en 4 (4,65 por ciento) se aisló el virus y de los 173 sueros en 2 (1,15 por ciento) se detectó IgM. Se aprecia una mayor sensibilidad del islamiento viral clásico en cultivos celulares, en relación a la detección de IgM anti CMV en el diagnóstico de la infección congénita por CMV

Prevalencia de Mycoplasma orale como contaminante de los cultivos celulares en la Argentina / Prevalence of Mycoplasma orale as a contaminant of cell cultures in Argentina

Sobre un total de 200 cultivos celulares de distinto origen y provenientes de diferentes laboratorios de la Argentina se ha encontrado, utilizando la técnica de tinción fluorescente de DNA, que el 70% de los cultivos se encuentran contaminados con micoplasmas. Para determinar el serotipo contaminante se seleccionaron al azar 50 cultivos positivos y se estudiaron con sueros patrones por la técnica de inmunofluorescencia. Los resultados muestan que sobre 41 cultivos positivos el 40% están contaminados con Mycoplasma orale II, y en menor proporción con M. hyorhinis (12%), A. laidlawii-A (12%), M. arginini (5%), M. orale III (8%) y A laidlawii-B(2%). El 21% de los serotipos contaminantes de los cultivos analizados no pueden ser identificados. Nueve de los cultivos estudiados presentaron contaminación con dos y hasta tres micoplasmas diferentes. La prevalencia del M. orale, cuya fuente es el operador, en los cultivos infectados con uno o más micoplasmas señala la importancia de adoptar buenas técnicas de trabajo para evitar contaminaciones

Acridine orange metachromasia in the cytoplasm of simian rotavirus (SA-11)-infected MA-104 cell cultures

Acridine orange metachromasia was used to determine the distribution of simian rotavirus double-stranded RNA in cultured MA-104 cells 0 to 72 h post-infection. Correlations were made among time of detection and amount of viral antigens, virus yield and the ultrastructural aspects of infected cells. RNAase-resistant cytoplasmic metachromasia appeared 48 h post-infection, 36 h after the initial detection of viral antigens or infectious virions and 24 h after the appearance of the cytopathic effect. Acridine orange staining is thus useful for monitoring the progress of rotaviral infection in cell cultures due to its simplicity and low cost, in spite of its lower sensitivity compared to other techniques evaluated

Rapid detection by transmission electron microscopy of mycoplasma contamination in sera and cell cultures

Para detecçäo de micoplasmas em soros e culturas de células foi aplicada a microscopia eletrônica de transmissäo. Os soros foram centrifugados em alta rotaçäo, enquanto que aos detritos celulares aplicou-se uma centrifugaçäo mais lenta. Os sedimentos ressuspendidos foram preparados por meio de contrastaçäo negativa. Por esta técnica detectou-se contaminaçöes por micoplasmas com maior freqüência do que pela aplicaçäo do corante fluorescente direto (DAPI) em culturas celulares com micoplasmas, servindo de controle. A aparência das bordas celulares dos micoplasmas e de seu conteúdo fornece alguns dados sobre a viabilidade das partículas

Presencia de micoplasmas en cultivos celulares de Argentina / Presence of Mycoplasma in cell cultures of Argentina

Se investigó la presencia de micoplasmas como contaminantes en cultivos celulares utilizados para la propagación de virus. Se analizaron muestras provenientes de laboratorios ubicados en la ciudad de Buenos Aires y las provincias de Córdoba y Buenos Aires. Como método de detección se utilizó la tinción celular con el reactivo fluorescente de Hoechst 33258 (bisbenzimida), que se une específicamente al ADN. Treinta y tres de las 51 líneas celulares estudiadas (65%), estaban contaminadas. En todos los laboratórios donantes se detectó por lo menos una línea celular con algún grado de contaminación, a pesar de que cuentan con el equipamento indispensable para trabajar en condiciones de esterilidad. Ante esta situación concluímos que los perjuicios que acarrea la presencia de micoplasmas en los cultivos, no han sido apropiadamente evaluados

Diagnóstico presuntivo rápido de enteritis asociada a campylobacter / Speed presumptive diagnosis of Campylobacter enteritis

Between january 1983 and march 1984, stool specimens from 380 children under 2 years old with complicated acute diarrhea and 20 normal children were studied. Stool specimens were obtained with rectal swabs and transported in Cary and Blair medium. Flooded slides one to 2 minutes with a mixture of equal parts Hucker's crystal violet solution and 1 percent sodium bicarbonate (VB), were prepared from each specimen and looked for seagul rods. Culture of the stool specimens were made for Campylobacter sp. isolation. In the present work the flooded slides were thought as a presumptive diagnosis and we obtained a positive sensitivity of 80 percent and a positive predictibility of 5,7 percent