Estudo comparativo e validação de três técnicas de PCR em tempo real (qPCR) para diagnóstico de Peste Suína Africana / Comparative study and validation of three quantitative PCR (qPCR) techniques for the diagnosis of African Swine Fever

Este estudo verificou o desempenho de três técnicas de PCR quantitativa (Real-Time) para o diagnóstico de Peste Suína Africana, uma doença exótica no Brasil, a partir de amostras de tecidos. As três técnicas escolhidas baseiam-se na amplificação de sequências do gene da proteína viral VP72 e são preconizadas, cada uma, por laboratórios oficiais da OIE (PSA-OIE), dos Estados Unidos (PSA-USDA) e da União Europeia (PSA-EU), respectivamente. Oligonucleotídeos iniciadores e sondas de hidrólise marcadas com fluoróforos foram sintetizados conforme a literatura de referência consultada. Sequências-alvo do DNA viral foram inseridos em plasmídeo sintético, os quais serviram de controle positivo para a padronização das técnicas e otimização de reagentes, determinação dos limites de detecção e testes de verificação de desempenho. Para aferição de repetibilidade e reprodutibilidade das técnicas, as técnicas padronizadas foram repetidas em dias diferentes, por um segundo analista, com alteração no mix comercial de reagentes utilizado e em um equipamento diferente, e também por outro laboratório. Realizaram-se, ainda, provas de sensibilidade analítica com amostras de DNA viral de referência e especificidade analítica e diagnóstica, com amostras negativas. As técnicas de PSA-EU e PSA-USDA apresentaram-se mais vantajosas quanto ao consumo de iniciadores. Não houve diferenças significativas nos resultados quantitativos variando-se os dias dos ensaios, os analistas, os equipamentos e o mix de reagentes. As três técnicas apresentaram alta especificidade analítica e diagnóstica e sensibilidade diagnóstica. As três técnicas de qPCR mostraram-se eficazes para serem adotadas por um mesmo laboratório para emissão de diagnósticos oficiais de Peste Suína Africana.(AU)

This study evaluated the performance of three real time PCR techniques (qPCR) for the diagnosis of African Swine Fever in tissue samples. The three chosen techniques are based on amplification of viral protein VP72 gene sequences and are recommended by OIE (PSA-OIE), the United States official laboratories (PSA-USDA) and the European Union (PSA-EU). Target sequences of the viral DNA were inserted into synthetic plasmid, which served as a positive control for the standardization of techniques and optimization of reagents, determination of limits of detection and performance verification testing. To gauge repeatability and reproducibility of techniques, standard procedures were repeated on different days by two analysts and by changing mix reagents and equipment, and also by another laboratory. Analytical sensitivity tests were done with reference samples provided by an OIE reference laboratory and analytical and diagnostic specificity were tested with negative samples. The PSA-EU and PSA-USDA techniques were more advantageous to use because of lower concentration of oligos used. There were no significant differences in quantitative results varying the days of tests, analysts, equipment and the mix of reagents. The three techniques had high analytical and diagnostic specificity and sensitivity. The three qPCR techniques were considered equivalent and effective and can be adopted by any laboratory for issuing official diagnosis of African Swine Fever.(AU)

Development and standardization of an indirect ELISA for the serological dianosis of classical swine fever

Um ensaio imunoenzimático do tipo ELISA indireto (ELISA-I) foi desenvolvido e padronizado para o diagnóstico sorológico de peste suína clássica. Na comparaçäo foram utilizadas novecentas e trinta e sete amostras de soros suínos, as quais foram testadas pelo teste de soroneutralizaçäo seguido de revelaçäo por imunoperoxidase (NPLA), tomado como padräo, resultando em 223 amostras positivas e 714 negativas. Em relaçäo ao NPLA, o ELISA-I apresentou sensibilidade de 98,21 por cento, especificidade de 92,86 por cento, valor preditivo positivo de 81,11 por cento, valor preditivo negativo de 99,4 por cento e precisäo de 94,1 por cento. A análise estatística dos resultados revelou uma correlaçäo muito forte (r=0,94) entre os dois testes. Quando comparado com um "kit" de ELISA disponível comercialmente, a performance de ambos em relaçäo ao NPLA foi similar. Concluiu-se que o ELISA-I é um teste apropriado para triagem em larga escala de soros para a detecçäo de anticorpos contra o Vírus da Peste Suína Clássica (VPSC), embora näo seja capaz de diferenciar entre anticorpos induzidos pelo VPSC ou outros pestivírus

Peste suína clássica. I. Retrospectiva de 1978 a 1987 no Estado do Rio Grande do Sul / Classical swine fever: I. Retrospective from 1978 to 1987 in Rio Grande do Sul, Brazil

No período de 1978 a 1987, encaminharam-se ao Instituo de Pesquisas Veterinárias "Desidério Finamor" (IPVDF),1427 materiais para diagnóstico de peste suína clássica (PSC). Destas amostras, 832 eram provenientes de animais suspeitos de terem contraído a doença e 595 colhidos em matadouros frigoríficos provenientes de animais sadios. Das amostras consideradas suspeitas, 313 resultaram positivas pela técnica de imunofluorescência direta (IFD). Todas as amostras provenientes de frigoríficos foram negativas. Quarenta amostras foram examinadas, comparativamente, pela técnica de IFD em impressöes de tecidos e isolamento de vírus em cultivo celular. Pela IFD em tecidos detectaram-se oito amostras positivas e pelo cultivo celular 10. Isso indica que o isolamento do vírus em cultivo celular pode aumentar o nível de eficiência no diagnóstico de PSC