Simultaneous detection and differentiation of staphylococcus species in blood cultures using fluorescence in situ hybridization

To develop a new protocol for the simultaneous detection and differentiation of Staphylococcus aureus and coagulase-negative staphylococci [CoNS] in blood cultures using fluorescence in situ hybridization [FISH], without cultivation and blotypmg. Oligonucleotide probes were used to target the variable regions of the 16S rRNA of 5. aureus and CoNS, the probes were labeled with fluorochrome Cy3 [red signal] and fluorescein isothio-cyanate [green signal], respectively. It is not possible to design one probe that will hybridize to all CoNS species. Therefore, in this study two differentially labeled probes [STA and SAU] were mixed and used to detect and differentiate 5. aureus from CoNS rapidly in a single smear. Samples of 189 positive blood cultures with Gram-positive cocci in clusters and 11 Gram-positive cocci in chains or pairs were included. The FISH assay showed 91.8% sensitivity and 100% specificity for 5. aureus and 100% sensitivity and 93.3% specificity for CoNS when hybridized with STA and SAU probes. Meanwhile, the assay showed 91.8% sensitivity and 100% specificity for 5. aureus and 100% sensitivity and 90% specificity for CoNS, when hybridized with the SAU probe only. Our data showed that the FISH technique was suitable for the simultaneous detection and differentiation of Staphylococcus sp. in blood cultures

Esquema simplificado de identificacion de las especies de staphylococcus coagulasa-negativa aislados de infecciones humanas / Identificacion simplified scheme for coagulase-negative staphylococcus strains isolated from human infections

Neste trabalho se identificaram 100 cepas de estafilococos coagulasa negativa de diferentes mostras clínicas. Buscando a correlaçäo entre homologia de DNA e características fenotípicas foi dividido em 2 grandes grupos pela sensibilidade à novobiocina e agregando a detecçäo de beta-galactosidasa e oxidasa em que se determinou 4 grupos (quadro 1): grupo de espécies de S. epidermidis, grupo de espécies de S.simulans: grupo de espécies de S. sapiophyticus e grupo de espécie de S. sciuri que säo factíveis de resolver em todo laboratório de microbiologia clínica. Por agregado de outras provas simples: detecçäo de ureasa, fosfatasa alcalina e beta-glucosidasa e detecçäo de aeróbica de acidez de maltosa, trehalosa e manitol se determinam as espécies de grupo S. epidermidis (quadro 2). Geralmente dada a maior frequência do S. epidermidis suficiente somente a detecäo de ureasa e fosfatasa. As espécies do grupo S. simulans se identificam com a determinaçäo de ureasa: fosfatasa alcalina e acidez de manitol (quadro 3): com a realizaçäo de ureasa e acidificaçäo de sacarosa e arabinosa se estabelece as espécies do grupo S. saprophyticus e unicamente por meio da rafinosa as espécies do grupo S. sciuri (quadro 5). A correlaçäo destas mínimas provas obtidas em nossas determinaçöes com as numerosissimas realizadas segundo apresenta o Manual de Bergey 9a. ediçäo, nos permite considerar a aplicabilidade deste esquema simples e rápido para diferenciar as espécies coagulasa negativa do gênero Staphyloccocus na maioria dos laboratórios de bacteriologia clínica