Aspectos clínicos, histopatológicos e moleculares da dermatosparaxia em ovinos White Dorper / Clinical, histopathological and molecular aspects of the dermatosparaxis in White Dorper sheep

Dermatosparaxia em animais é uma doença autossômica recessiva do tecido conjuntivo caracterizada por fragilidade e hiperextensibilidade cutânea. A doença em ovinos White Dorper é provocada pela mutação c.421G>T no gene ADAMmetalopeptidase com trombospondina tipo 1 motif, 2 (ADAMTS2). O objetivo deste estudo foi descrever os achados clínicos, moleculares e histopatológicos da dermatosparaxia em ovinos White Dorper de um rebanho localizado no Centro-Oeste Paulista. [...] Dos nove animais examinados, dois apresentavam sinais clínicos compatíveis com dermatosparaxia. O exame histopatológico de amostras cutâneas das lesões destes dois animais revelou também achados compatíveis com dermatosparaxia, sendo caracterizados por epiderme e anexos cutâneos preservados e sem características atípicas; colágeno displásico arranjado em feixes pequenos, fragmentados e com focos de degeneração, anexos cutâneos proeminentes e na região da derme foco hemorrágico intenso associado a moderado infiltrado neutrofílico na derme profunda. Com o objetivo de realizar o diagnóstico molecular da enfermidade, uma PCR foi padronizada utilizando primers específicos desenhados para amplificar a região do gene ADAMTS2 que continha a mutação c.421G>T e o DNA obtido de amostras de sangue de todos os animais do rebanho. O sequenciamento direto dos produtos da PCR, comprovou que os dois animais clinicamente afetados possuíam a mutação responsável pela dermatosparaxia. A metodologia descrita neste estudo possibilitou o diagnóstico definitivo da doença. Segundo a literatura consultada, esta é a primeira vez que a dermatosparaxia é descrita em ovinos White Dorper no Brasil. A metodologia aqui descrita poderá ser empregada em estudos futuros que avaliem a prevalência desta mutação no Brasil, possibilitando a adoção de medidas que previnam a disseminação dessa mutação no rebanho brasileiro de ovinos White Dorper.

Dermatosparaxis in animals is an autosomal recessive disorder of the connective-tissue clinically characterized by skin fragility and hiperextensibility. The disease in White Dorper sheep is caused by mutation (c.421G>T) in the ADAM metalloproteinase with thrombospondin type 1 motif, 2 (ADAMTS2) gene. This study describes the dermatological, histological and the molecular findings of the dermatosparaxis in White Dorper sheep from a herd located in the center-west of São Paulo State. [...] The herd consisted of one ram, four ewe and their lambs. In this herd two lambs had clinical signs consistent with dermatosparaxis. Histopathological evaluation of the affected skin of these two animals also revealed consistent findings with dermatosparaxis, characterized by dysplasia of the collagen, which were arranged in small and fragmented collagen bundles and with foci of degeneration of collagen. Prominent cutaneous appendages and severe hemorrhagic focus in dermis region associated with mild neutrophilic infiltrate in the deep dermis. PCR using DNA blood and specific primers to amplify the mutation region c.421G>T was optimized in order to perform molecular diagnosis of the disease. The direct sequencing of the PCR products proved that the two clinically affected animals had the mutation responsible for dermatosparaxis, previously described for this breed and allowed the definitive diagnosis of the disease. This is the first report of the dermatosparaxis in White Dorper sheep in Brazil and the methodology used to confirm the diagnosis could be used in future studies to assess the prevalence of this mutation in Brazil, allowing the adoption of measures to prevent the spread of this mutation in the Brazilian White Dorper herd.

Construção de equivalente dermo-epidérmico in vitro / Construction of an in vitro equivalent skin

Introdução: Dentre as diversas pesquisas realizadas na área de bioengenharia de tecidos, a criação in vitro de tecidos vivos tornase uma das mais promissoras formas de atuação científica. Neste caminho, cada vez mais têm sido descritos novos substitutos cutâneos para o tratamento de grandes lesões da pele. Bell et al. descreveram um modelo de matriz colágena tipo I contrátil após a adição de fibroblastos. Método: O presente estudo propõe a elaboração in vitro de um equivalente dermo-epidérmico composto por uma “derme” de colágeno povoada por fibroblastos, acompanhado de um epitélio de queratinócitos cultivados em sua superfície anterior no papel de “epiderme”. Além disso, estuda as alterações histológicas encontradas nos dias de cultura 4, 7, 14 e 21, avaliando a influência da interface ar-líquido na estratificação do epitélio. Resultados: Os resultados mostraram que houve a criação de um substituto dermo-epidérmico in vitro, com a formação de um epitélio com boa estratificação, sendo que o contato com o ar aumenta esta estratificação

Adhesion of the human pathogen Sporothrix schenckii to several extracellular matrix proteins

The pathogenic fungus Sporothrix schenckii is the causative agent of sporotrichosis. This subcutaneous mycosis may disseminate in immunocompromised individuals and also affect several internal organs and tissues, most commonly the bone, joints and lung. Since adhesion is the first step involved with the dissemination of pathogens in the host, we have studied the interaction between S. schenckii and several extracellular matrix (ECM) proteins. The binding of two morphological phases of S. schenckii, yeast cells and conidia, to immobilized type II collagen, laminin, fibronectin, fibrinogen and thrombospondin was investigated. Poly (2-hydroxyethyl methacrylate) (poly-HEMA) was used as the negative control. Cell adhesion was assessed by ELISA with a rabbit anti-S. schenckii antiserum. The results indicate that both morphological phases of this fungus can bind significantly to type II collagen, fibronectin and laminin in comparison to the binding observed with BSA (used as blocking agent). The adhesion rate observed with the ECM proteins (type II collagen, fibronectin and laminin) was statistically significant (P<0.05) when compared to the adhesion obtained with BSA. No significant binding of conidia was observed to either fibrinogen or thrombospondin, but yeast cells did bind to the fibrinogen. Our results indicate that S. schenckii can bind to fibronectin, laminin and type II collagen and also show differences in binding capacity according to the morphological form of the fungus

Purification and characterization of recombinant murine endostatin in E. coli

Endostatin, a carboxyl-terminal fragment of collagen XVIII is known as an anti-angiogenic agent, that specifically inhibits the proliferation of endothelial cell and the growth of several primary tumor. We report here the purification and characterization of the recombinant murine endostatin (rmEndostatin) which was expressed in a prokaryotic expression system. This rmEndostatin has similar physiochemical properties of yeast-produced recombinant endostatin, and it also specifically inhibits the proliferation and migration of bovine capillary endothelial cells stimulated by basic fibroblast growth factor. The biological activity of rmEndostatin was also shown by its anti-angiogenic ability on the chorioallantoic membrane of chick embryo in vivo. In this article, we demonstrate the refolding and purification of rmEndostatin, expressed using E. coli system, to a biologically active and soluble form. In addition, these results confirm the activity of endostatin as a potent anti-angiogenic agent. Copyright 2000 Academic Press.

A collagenolytic streptomycete.

A soil streptomycete (Streptomyces sp. A11) degraded collagen isolated from bovine Achilles tendon, calf skin, human placenta, carp swim bladder and rat tail tendon and released appreciable quantities of hydroxyproline. It also degraded hide powder and vegetable tanned leather. The organism was taxonomically characterized, compared with allied species, identified and designated as Streptomyces wartii.

La deficiencia de vitamina C durante la gestación como un factor de riesgo para la ruptura prematura de las membranas fetales / Vitamin C deficiency during pregnancy as a risk factor for premature fetal membrane rupture

Se analizan las características de las membranas amnióticas de partos con ruptura prematura de membranas (RPM) y con ruptura tardía de las membranas fetales (RTM), en cuanto a su composición aminoacídica y relación prolina/hidroxiprolina y la importancia de la situación dietética y nutricional de las gestantes, con respecto a la vitamina C en relación con este accidente obstétrico, así como demostrar, mediante el uso de un modelo experimental, que la membrna fetal es también un sitio sensible de la deficiencia de vitamina C. A las mujeres estudiadas se les determinó acido ascórbico en plasma en el segundo y tercer trimestre de gestación, cortisol en plasma en las mismas etapas, acido ascórbico en leucocitos al final de la gestación, en las membranas amnióticas colectadas durante el trabajo de parto. Se determinó prolina, hidroxiprolina y aminoacidos totales individuales y se aisló el colágeno en el cual se realizaron las mismas determinaciones que en la membrana. Se realizó una encuesta dietétic. El modelo experimental utilizado fue la curiela gestante, los animales se dividieron en 3 grupos, uno de los cuales ingirió una dieta escorbutigénica durante la última etapa de la gestación, al fianl de la misma los animales fueron sacrificados y en las membranas fetales se realizaron las mismas determinaciones descritas para humanos. Se encontró una mayor incidencia de RPM en mujeres con bajos niveles de vitamina C