Cinética multiplicativa de clones de Crithidia fasciculata (Kinetoplastida: Trypanosomatidae) en un sistema de cultivo in vitro / Multiplicative kinetics of Crithidia fasciculata (Kinetoplastida: Trypanosomatidae) clones in an in vitro culture system

La cinética multiplicativa de la cepa parental y cinco clones de Crithidia fasciculata (Kinetoplastida: Trypanosomatidae) fue estudiada en agar sangre 40% difásico. Los clones fueron obtenidos de cultivos en agar sangre 40% y denominados Ia, IIIa, IVa, Va y CAA. En cada caso, tubos de agar sangre 40% difásico con infusión cerebro corazón 3,7 % como fase líquida fueron inoculados con 103 coanomastigotos de cada clon y la cepa parental. La concentración de parásitos fue estimada semanalmente durante 12 semanas expresando las concentraciones en coanomastigotos/mm3. La variabilidad fue evaluada por análisis de variancia (ANDEVA) para mediciones repetidas (a:0,05) realizadas durante cada día de observación. Electroforesis en geles de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE) fueron también efectuadas para evaluar los perfiles proteicos de los clones y la cepa parental. Los resultados mostraron una fase de crecimiento logarítmico muy corta que antecedió a una fase estacionaria prolongada. (p > 0,05). No hubieron diferencias estasdísticamente significativas entre la concentración de coanomastigotos/mm3 entre los sistemas estudiados durante cada día de observación. Los perfiles proteicos mostraron patrones altamente homogéneos en todos los sistemas estudiados. Los resultados sugieren que las menores presiones evolutivas que sufre naturalmente C. fasciculata en su ciclo propagativo podrían estar relacionadas con la homogeneidad observada, pero es requerida más información en tópicos como inmunología, biología y genética para demostrar dicha homogeneidad.

Efecto de orto-naftoquinonas lipofílicas sobre el crecimiento y la producción de peróxidos por Leptomonas seymouri y Crithidia fasciculata / Effect of lipophilic ortho-naphthoquinones on the growth and production of peroxides by Leptomonas seymouri and Crithidia fasciculata

Las §-naftoquinonas CG 8-935, CG 9-442, CG 10-248 y las mansonomas A, C, E y F inhiben el crecimiento de L. seymouri (LS) y C. fasciculata (CF). Las mansononas más activas fueron E y F (I50, 0.1 y 0.4 *M con LS y 0.3-1.2 *M con CF), con actividades citotóxicas iguales o superiores a las de las o-quinonas CG. La incubación de los protozoarios con las quinonas CG y las quinonas E y F indujo la producción de H2O2 y O2. Menor producción se obtuvo con la perezona y la priminina (p-benzoquinonas utilizadas como testigo). El efecto de las o-quinonas fue proprocional a su concentración y con las mansononas E y F la producción de O2 fue 4-5 veces mayor que la de H2O2. Diferencias menores se observaron con las quinonas CG. La producción de peróxidos resultó de un ciclo redox, iniciado por una fase anaeróbica (I) en la que se formaron los quinoles, seguida por una fase aeróbica (II) en la que se formó O2 y H2O2. Con las mansononas E y F, y las quinonas CG, la velocidad de la fase II fue superior o igual a la de la fase I pero, con las mansononas A y C, la velocidad de oxidación de los quinoles fue 8-10 veces menor que la de reducción de las quinonas. Esas diferencias concuerdan con a) la oxidación in vitro de los quinoles; b) su capacidad para producir O2 y c) su capacidad para inducir la quimiluminiscencia de la lucigenina. Los resultados descriptos demuestran la intervención de oxi-radicales en la citotoxicidad de las §-quinonas, no obstante la existencia de catalasa y otras enzimas protectoras en LS y CF, pero no se descartan otros mecanismos. La sensibilidad de ambos organismos a las quinonas estudiadas, similar o superior a la del T. cruzi, autoriza a utilizar a LS y CF como modelos para el ensayo de quimioterápicos antichagásicos