Helicobacter pylori and cagA gene detected by polymerase chain reaction in gastric biopsies: correlation with histological findings, proliferation and apoptosis

CONTEXTO E OBJETIVO: A virulência de Helicobacter pylori em doenças gastroduodenais está relacionada à presença de ilha de patogenicidade (cagPAI) que ocorre em algumas cepas. A infecção pelo cagPAI induz a secreção de IL-8, aumenta a proliferação epitelial, podendo ter um papel importante na carcinogênese. Nosso objetivo foi detectar HP e o gene cagA (marcador de cagPAI) pela técnica de PCR (polymerase chain reaction), correlacionando com os achados histológicos, de proliferação e apoptose. TIPO DE ESTUDO E LOCAL: Estudo retrospectivo, no Laboratório de Patologia Cirúrgica e Molecular do Hospital Sírio Libanês. MÉTODOS: DNA isolado de 164 biópsias gástricas foi submetido a PCR para detecção de HP. Os casos positivos foram submetidos a nova reação para identificação do gene cagA. Pela técnica de imunohistoquímica foi analisada a proliferação celular e, pela TUNEL, a apoptose. RESULTADOS: HP foi detectado em 67,7% dos pacientes. Houve correlação entre a presença do HP e o diagnóstico de gastrite moderada ou grave, úlcera e linfoma do tipo MALT. Houve correlação entre cagPAI+ e a doença gástrica grave, incluindo o câncer. O risco de úlcera, adenocarcinoma ou linfoma MALT para os portadores de cagA+ foi de 8,8. Infecção pelo cagPAI correlacionou-se com aumento na taxa de proliferação. O índice proliferação/apoptose foi significantemente maior para os pacientes cagPAI+. CONCLUSÕES: Uma desregulação do crescimento celular nos pacientes cagPAI+ foi demonstrada pela diferença do índice de proliferação, que acreditamos pode explicar o papel carcinogênico da bactéria.

Random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis of Lutzomyia longipalpis laboratory populations

O flebotomineo Lutzomyia longipalpis tem sido incriminado como vetor da leishmaniose visceral americana, causada pelo protozoario Leishmania chagasi. Entretanto, tem-se acumulado evidências que sugerem a existência de um complexo e näo apenas uma espécie de L. longipalpis na natureza. Nosso trabalho teve como objetivo comparar, ao nível molecular, quatro populaçöes de L. longipalpis de referência, utilizando especimens criados em laboratório, provenientes de regiöes geograficamente distintas, através de RAPD-PCR (reaçäo de polimerase em cadeia com amplificaçäo por iniciadores ao acaso). Para isso, o DNA genomico de grupos de flebotomineos foi amplificado com iniciadores decamericos unicos com sequencia de nucleotideos arbitraria, na tentativa de se detectar sitios polimorficos...

Identification of mycobacterial recombinant antigens recognized by human T cells

The identification of mycobacterial antigens recognized by human T cells is important for the development of new vaccines and diagnostic reagents, and in understanding the mechanisms involved in the pathogenesis of mycobacterial diseases. In this study, Escherichia coli cell lysates, containing mycobacterial recombinant antigens previously identified using antibodies, were tested with peripheral blood mononuclear cells [PBMC], T cell lines and T cell clones to identify the antigens recognized by human T cells. Although the PBMC responded to natural mycobacterial antigens by proliferation, they did not show any specific response to recombinant antigens containing lysates above the background level proliferation induced by control lysates of E coli. With T cell lines raised against whole mycobacteria, the problem of background proliferation was reduced but the specific responses to the lysated containing recombinant antigens were weak. The proliferative response to specific antigens improved by enriching the T cell lines with E. coli lysates containing homologous recombinant antigens. The best response to recombinant antigens was obtained with mycobacterial antigen-specific T cell clones. However, T cell clones did not respond to some of the antigens which induced proliferation of the enriched T cell lines from the same individuals. This could be because of the inherent bias in cloning procedures which may lead to the expansion of selected T cell populations. Our results suggest that enriched T cell lines are best to determine the T cell reactivity of recombinant antigens, but T cell clones are required to demonstrate the existence of species-specific epitopes

Expresión como proteínas de fusión de las subunidades PB1 y PB2 de la polimerasa del virus de la influenza / Expression how proteins of fusion of the subunits PB1 and PB2 of the influenza viral of polymerase

Los cADNs de los genes que codifican las proteínas PB1 y PB2 de la ARN polimerasa del virus de la influenza, se clonaron en fase en un sitio distal del ATG que codifica la proteína 10 del bacteriógafo T7, en el vector de expresión pAR3040, bajo el control de un promotor de la ARN polimerasa de T7. Los plásmidos recombinantes se introdujeron en la cepa bacteriana. E coli BL21 (DE3)plysS, que contiene en su genoma el gen de la ARN polimerasa del fago T7, bajo el control de un promotor (lac uv5) inducible por IPTG. La inducción de la ARN polimerasa del fago T7 en las células hospederas, resultó en la expresión de las proteínas PB1 y PB2 en forma de proteínas de fusión. Las proteínas expresadas se acumularon en grandes cantidades en el interior de las células bacterianas y fueron recuperadas de los lisados en forma de precipitados insolubles.

Control de calidad de productos obtenidos por la tecnología de ADN recombinado / Quality control of producto obtainable by recombinant DNA technology

El control de calidad de los productos biotecnológicos elaborados por la tecnología del ADN recombinante es sumamente importante, porque esta industria está basada en el uso de organismos hospederos tales como bacterias, levaduras y células de mamíferos, para la obtención de proteínas típicamente sintetizadas dentro de cultivos de células genéticamente transformadas. Donde un sistema de control estricto, estandarizado de los procesos de producción y materiales de origen son relevantes. Las normas internacionales y nacionales que regulan la producción y control de estos productos ADN recombinante, prestan considerable énfasis y especial atención a los controles en procesos, los cuales ofrecen un económico y eficiente camino para asegurar la calidad y seguridad del producto final y al mismo tiempo provee una estructura que permite la formulación de estrategias que ayuden a un país a aprovechar las ventajas de las invenciones e innovaciones del uso de la tecnología del ADN recombinante

Determinaçäo no primeiro trimestre do sexo fetal pela técnica do DNA recombinante / Fetal sex determination in the first trimester by recombinant DNA technique

O sexo de três fetos foi determinado no primeiro trimestre através da técnica do DNA recombinante. Foram utilizadas as sondas DYZ, e DYZ, ambas específicas para o cromossomo Y. O DNA fetal foi obtido por biopsia do vilo coriônico. O processo utilizado foi o de "southern blotting", que consiste, basicamente, em digestäo enzimática do DNA, e sua transferência para filtro de nitrocelulose onde é realizada a hibridizaçäo com a sonda específica. O método é seguro e rápido

Construction of a gene library from Azospirillum brasilense and characterization of a recombinant containing the nif structural genes

1.We have constructed a gene library, from Azospirillum brasilense using the vector EMBL4. 2. A recombinant containing the nif structural genes from A. brasilense was isolated and characterized. This recombinant contains a DNA insert of about 15 kilobases (KB) which gives rise to five fragments after cleavage with EcoRI. Only one of the DNA fragments (6.5 Kb) hybridized to the nifHDK genes of Klebsiella pneumoniae. 3 The organization of the nif genes in this DNA fragment was determined using different DNA segments containing the nifH, nifK or nifD genes of K. pneumoniae as probes