Avaliação ultraestrutural da mobilização do CD63 em eosinófilos humanos estimulados com eotaxina ou TNF-alfa / Ultrastructural evaluation of the cd63 mobilization in human eosinophils stimulated with eotaxin or tnf-alpha

Os eosinófilos são leucócitos que estão envolvidos em respostasinflamatórias, alérgicas e imunoreguladoras, através da secreção de proteínascatiônicas e citocinas armazenadas em seus grânulos específicos. Os mecanismosde secreção podem ocorrer por: (i) desgranulação por piecemeal (PMD),caraterizada pelo transporte mediado por vesículas que brotam dos grânulos elevam os produtos até a superfície celular; (ii) exocitose clássica, caracterizada pelafusão dos grânulos com a membrana plasmática e (iii) citólise, quando os grânulossão liberados após lise celular. O CD63 é uma molécula da família das tetraspaninasque parece atuar como facilitador na secreção de mediadores da inflamação.Entretanto, não existem estudos ultraestruturais que demonstrem a associação deCD63 com processos de secreção de eosinófilos. Este trabalho teve por objetivoinvestigar a mobilização de CD63 e sua correlação com mecanismos de secreçãoem eosinófilos humanos estimulados com mediadores inflamatórios (eotaxina e fatorde necrose tumoral -TNF-alfa). A expressão de CD63 foi investigada na superfíciecelular através de imunofluorescência e em compartimentos subcelulares através deimunomarcação pre-embedding por microscopia eletrônica de transmissão quepermite melhor preservação antigênica e os anticorpos mostram ótimo acesso amicrodomínios celulares com partículas de ouro (1.4 nm) conjugadas a anticorpossecundários. A imunofluorescência mostrou elevada expressão de CD63 nasuperfície celular, mas com padrões diferentes dependendo do estímulo. Enquanto aeotaxina induziu imunomarcação pontual, a expressão de CD63, induzida por TNF-alfa, mostrou-se de maneira difusa, indicando a ocorrência de processos de secreçãodiferentes...

Eosinophils are leukocytes involved with inflammatory, allergic andimmmunoregulatory responses through the secretion of granule-stored cationicproteins and cytokines. Secretion can occur by: (i) piecemeal degranulation (PMD),characterized by vesicle-mediated transport of products from granules to cell surface;(ii) classical exocytosis, characterized by granule fusion with the plasma membrane e(iii) cytolysis, in which the granule content is released after cell lysis. CD63 is atetraspanin family molecule which seems to act as a facilitator during secretion ofinflammatory mediators. However, there are no ultrastructural studies demonstratingassociation of CD63 with secretory processes of eosinophils. The goal of this workwas to investigate the mobilization of CD63 and its association with mechanisms ofsecretion in human eosinophils stimulated with inflammatory mediators (eotaxin andtumoral necrosis factor-TNF-alpha). Expression of CD63 was investigated at the cellsurface using immunofluorescence technique and in subcellular compartments bypre-embedding ultrastructural immunolabeling which enables better antigenicpreservation. Optimal access of antibodies to cellular microdomains was achievedwith gold particles (1.4 nm) conjugated with secondary antibodies.Immunofluorescence showed high CD63 expression at cell surface, but with differentprofiles, depending on the stimulus. While eotaxin induced a punctualimmunolabeling, expression of CD63, induced by TNF-alpha, was more diffuse, indicatingoccurrence of different secretory processes. Ultrastructural analyses revealed thateotaxin induced PMD, while TNF-alpha led to classical exocytosis. CD63 was detectedmainly on secretory granules. Quantitative analyses showed a significant increase ofthe numbers of CD63-positive granules compared to the unstimulated, control group...

Aspectos morfológicos y citoquímicos de las células sanguíneas de salminus maxillosus: characiformes characidae / Morphological and cytochemistry observation in blood cells of salminus maxillosus: characiformes characidae

Las características morfológicas de sangre periférica del pez Salminus maxillosus fueron descritas usando microscopía de luz. Para demostrar el comportamiento citoquímico de las células sanguíneas del pez en estudio, fueron aplicados métodos específicos para la detección de cuatro tipos básicos de componentes macromoleculares, de naturaleza química diferente: carbohidratos, lípidos. proteínas enzimáticas y estructurales. Fueron observados 6 tipos de células: eritrocitos, trombocitos, monocitos, linfocitos, neutrófilos de los tipos I y II y eosinófilos. Los trombocitos y los neutrófilos de los tipos I y II presentaron glucógeno en el citoplasma. Los neutrófilos del tipo II presentan gránulos sudanófilos y mielloperoxidasa. Además presentan, reacción difusa intensa para proteínas en el citoplasma. Los eosinófilos muestran reacción intensa en sus gránulos

Características citoquímicas morfológicas y ultraestructurales de eonofilos de caiman crocodilus yacare: Daudin, 1802: reptilia, crocodilia / Morphological and eletronic cytochemistry observations in eosinophil in caiman crocodilus yacare: Daudin, 1802: reptilia, crocodilia

Muestras de sangre periférica de reptiles, jóvenes y sanos, fueron recolectadas del seno venoso cervical, en tubos que contenían EDTA 10 por ciento. Inmediatamente los frotis fueron sometidos a los siguientes procedimientos: a) Tinción con solución de Rosenfeld para el análisis morfológico. b) Detección de la fosfatasa alcalina con naftol AS-MX fosfato y mieloperoxidasa (pH 7,0 y pH10,0) con o-toluidina H202. Una parte de la sangre con EDTA fue centrifugada por 15ï a 2.000rpm y el coágulo conteniendo los leucocitos, fue dividido en dos fragmentos y tratados con: a) glutaraldehído a 2 por ciento (1h a 4ºC) para la reacción de la fosfatasa alcalina; b) glutaraldehído a 1,25 por ciento + paraformaldehído al 1 por ciento (1h 4ºC), para la reacción de la mieloperoxidasa. Los eosinófilos revelaron núcleo excéntrico redondeado, oval o lobulado con nucléolo prominente. El citoplasma de los eosinófilos es ocupado por gránulos eosinofilicos evidentes (grandes, aproximadamente esféricos, compactos, uniformes en tamaño). No fue observada actividad de la fosfatasa alcalina en eosinófilos. Una reacción positiva débil en pH 7,0 y fuerte en pH 10,0 para mieloperoxidasa fue visualizada como un precipitado marrón, en los eosinófilos. El microscopio electrónico reveló actividad de la mieloperoxidasa solamente en algunos gránulos en pH 7,0 y en la mayoríaa de los gránulos en pH 10,0. Proteínas básicas produjeron reacción visible, principalmente en la periferia de todos los gránulos citoplasmáticos de los eosinófilos

Aspectos ultraestructurales de trombocito, eosinofilos y heterofilos de Caiman crocodilus yacare (Daudin, 1802) (Reptilia, Crocodilia) / Ultrastructural observations of thrombocytes, heterophils and eosinophils in Caiman crocodilus yacare (Daudin, 1802) (Reptilia, Crocodilia)

Fueron utilizados 10 ejemplares de caiman crocodilus yacare provenientes del municipio de Cáceres (Estado de Mato Grosso do Sul, Brasil), a cada uno de los cuales les fueron extraídos 5 ml de sangre periférico. Las muestras obtenidas fueron utilizadas para análisis ultraestructurales, referentes a trombocitos, eosinófilos y heterófilos. Los trombocitos son de forma elíptica, poseen citoplasma abundante sólo en los polos y su núcleo presenta surcos profundos o hendiduras acentuadas, mostrando algunos poros en su envoltura. Su citoplasma contiene abundantes túbulos y vesículas electrolúcidas del sistema canalicular. Son observados vacuolas con cuerpos densos y microtúbulos. Los heterófilos poseen formato aproximadamente esférico y núcleo excéntrico o periférico. Su citoplasma está repleto de gránulos polimórficos de formas de huso, en baqueta, oval o esférica, con superficie, en general, irregular. Los eosinófilos son esféricos y de núcleo lenticular excéntrico o periférico. El citoplasma contiene gránulos esféricos u ovales. Cabe destacar la presencia de gránulos citoplasmáticos voluminosos con diferencias en la electrodensidad, de superficie uniforme, pudiendo contener una estructura interna heterogéneo. En heterófilos y eosinófilos, el núcleo presenta heterocromatina, eucromatina, nucléolo y la envoltura nuclear es porosa

Histochemical stain for major basic protein in eosinophil granulocytes ans spermatozoa with alkaline erithrosin B

La proteina básica mayor (PBM) es un polipéptido policatiónico rico en arginina, que se encuentra en numerosas células tales como los granulocitos eosinófilos y los espermatozoides. La función de la PBM no se conoce completamente aunque se sabe que es tóxica para los parásitos y que induce la liberación de histamina de las células cebadas. Existen numerosas técnicas que permiten identificarla en cortes de tejido en forma inmunocitoquímica, pero estos métodos son en general complejos. En nuestro trabajo describimos un método histoquímico simple mediante el uso de eritrocina B alcalina que tiñe los gránulos grandes de los eosinófilos y las cabezas de los espermatozoides que son ricos en PBM. Los cortes desparafinizados de tejido o los frotis fijados se tiñen con solución de eritrocina B al 0.015 por ciento hecha en amortiguador de glicina ajustada a pH 10 durante 30 min. y se contrasta con hematoxilina de Harris. Los granulocitos eosinófilos y espermatozoides se tiñen de un color rojo brillante y producen una fluorescencia amarilla en el microscopio de luz ultravioleta. Las otras estructuras que toman esta tinción son la trico y queratohialina. Se presume que esta tinción se une preferentemente a la proteína básica mayor de los gránulos eosinófilos y a aquella presente en las cabezas de los espermatozoides. El procedimiento es simple, específico y puede ser usado fácilmente en cortes de tejido, en frotis y en preparaciones celulares aisladas

Significado de la eosinofilia en el líquido cefalorraquideo / Significance of eosinophilia in cerebrospinal fluid

En el presente trabajo, se discuten algunos conceptos acerca de la biología del eosinófilo y la importancia de su presencia en el líquido céfalorraquideo (L.C.R.). Estas células tienen un papel fundamental en la defensa del organismo contra infestaciones por algunos parásitos. Actúan como "células medidoras" en el mecanismo citotóxico mediado por IgG y complemento. Otra de sus funciones es el papel regulador en las reacciones de hipersensibilidad inmediata. Evidencias recientes demuestran que en ocasiones, los eosinófilos pueden dañar algunos tejidos. Sin embargo, la importancia práctica de este fenómeno aún no está clara. La presencia de dichas células en el LCR es un hecho anormal y sus causas son variadas. Sus funciones en este sitio probablemente son similares a las comprobadas en otros tejidos. En términos prácticos, el hallazgo de eosinófilos en el LCR es un dato de gran valor para el médico por lo que debe ponerse atención en su búsqueda

The Electron Microscopic Study of Enzymes in Eosinophils

The author has made the electron microscopic study of enzymes in eosinophils in order to clearify the influence of hyposensitization in allergic rhinitis to the activity of enzymes in eosinophilic granules and the following results were obtained. 1. In all 3 control, hyposensitization and allergic groups, eosinophilic granules with matrix and crystalloid core in circulating blood and tissue was observed. 2. In all 3 groups, activity of acid phosphatase was not found in neutrophil, basophil, macrophage and glands as a form of coagulated activating colony of acid phosphatase. 3. In control and hyposensitizing groups, number of eosinophils were smaller than that was counted in allergic group. Activity of peroxidase in granule was weak and granular out flowing and rupture of cell membrane were not observed. 4. In allergic group, eosinophil count was high, activity of peroxidase in granule was strong and granular out flowing and rupture of cell membrane were severe. At the same time, many vacuoles, which were suspected to be the result of phagocyte the protein as foreign substance, wag observed. Judging from the fact that eosinophil has a specific relation to allergic diseases and the activity of peroxidase that exist as an enzyme in eosinophilic granule is strong, it is believed that the major function of eosinophil is phagocytosis of antigen, or antigen-antibody complex. On the other hand, the fact that activity of peroxidase was weak in hyposensitizing group lead us to believe that the activity of peroxidase may be used as an indicator for detecting hyposensitizing status in the treatment of allergic disease.