Validación de un método para cuantificar ácido-11-nor-9-carboxi-delta 9-tetrahidrocannabinol en orina por cromatografía gaseosa-espectrometría de masas previa extracción en fase sólida / Validation of a method for quantify 11-nor-9-carboxy-delta 9-tetrahydrocannabinol in human urine using solid phase extraction and gas chromatography-mass spectrometry

El cannabis es una de las drogas ilegales más usadas a nivel mundial. Su consumo se relaciona con diferentes hechos en el ámbito forense, laboral, deportivo y clínico. Para su detección se utilizan métodos con diferentes fundamentos y alcances (inmunológicos, cromatográficos). En este trabajo se describe un método preciso, reproducible y validado, para la cuantificación del principal metabolito urinario del Δ9-tetrahidrocannabinol, el ácido-11-nor-9-carboxi- Δ 9-tetrahidrocannabinol (THC-COOH), por cromatografía gaseosa-espectrometría de masas (GC-MS). Se efectuó una extracción en fase sólida (SPE) a partir de la orina, previa hidrólisis alcalina. Se utilizó el análogo deuterado (THC-COOH D3) como estándar interno. El análisis por GC-MS se realizó en modo SIM. La curva de calibración fue lineal en el rango de trabajo (10-100 ng/ml, r > 0,999) y el límite de cuantificación fue de 10 ng/ml. La recuperación absoluta estuvo comprendida entre el 91,0 y 99,0 %. La precisión intra e inter ensayo fue de 1,06 a 1,26 y 3,59 a 9,80 %, respectivamente. El método fue aplicado a muestras reales, positivas por test inmunológico, resultando ser muy útil y fiable en el análisis de rutina de THC-COOH en orina humana con fines toxicológicos.

Cannabis is one of the most widely used illegal drug in the world. Its consumption is related to different forensic, work, sports and clinical events. In order to determinate the presence of cannabis, different methods with distinct fundamentals and scopes (immunoassay and chromatography) are applied. This report described an accurate, reproducible, and validated gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) method for the quantitation of 11-nor-9-carboxy- Δ9-tetrahydrocannabinol (THCCOOH), the major metabolite of Δ9-tetrahydrocannabinol in urine. A solid phase extraction (SPE), previous alkaline hydrolysis, was performed on the urine sample. Its deuterated analog (THC-COOH D3) was used as internal standard. The GC-MS analysis made by selected ion monitoring (SIM). Calibration curve was linear over the specified range (10 -100 ng/ml; r > 0.999) and limit of quantitation was 10 ng/ml. Absolute recoveries ranged from 91.0 to 99.0. Intra-assay and inter assay precision ranged from 1.06 to 1.26 and 3.59 to 9.80 %, respectively. The method has been applied to real samples, positive to immunological screening test, resulting to be very useful and reliable in routine analysis of THC-COOH in human urine for toxicological purposes.

Análisis cromatográfico de cepas de Mycobacterium tuberculosis aisladas de un brote en pacientes VIH en Cuba

Se realiza el estudio mediante técnicas cromatográficas, de un grupo de cepas de Mycobacterium tuberculosis aisladas de un brote en pacientes infectados con el virus VIH. Se utilizaron como referencia un grupo de cepas de M. tuberculosis de pacientes sintomáticos respiratorios (SR+14) y cepas patrones de la colección del laboratorio, con el objetivo de comparar cualitativamente los patrones cromatográficos descritos por las cepas aisladas de pacientes. Se obtuvieron y compararon los perfiles cromatográficos de las cepas aisladas de pacientes (ST+) y de VIH+ por la técnica de cromatografía en capa delgada. Se identificó cada uno de los ácidos grasos presentes por la técnica de cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas. Todas las cepas estudiadas fueron clasificadas como Mycobacterium tuberculosis. Por resultados obtenidos se demuestra la utilidad de las técnicas cromatográficas como técnicas alternativas para el diagnóstico micobacteriano.

A group of strains of Mycobacterium tuberculosis isolated from an outbreak in HIV-infected patients was studied by chromatographic techniques.A group of strains of M. Tuberculosis from symptomatic respiratory patients (SR + 14) and patterns strains from the laboratory collection were used as a reference aimed at making a qualitative comparison of the chromatographic patterns described by the strains isolated from patients. The chromatographic profiles of the strains isolated from patients (SR +) and fro HIV + were obtained and comparede by thin layer chromatography (TLC). Each of the present fatty acids was identified by using the gas chromatography technique (GC) coupled to mass spectrum analysis. All the studied strains were classified as Mycobacterium tuberculosis. According to the results attained, the usefulness of the chromatographic techniques as alternative techniques for the mycobacterial diagnosis is demonstrated.

Determinación de los alcaloides de la coca y de las sustancias relacionadas / Determination of coca alkaloids and related substances

Como en todos los productos naturales, los procedimientos de extracción de todos los componentes interesantes de la planta matriz son de primera importancia y determinan a menudo la habilidad de identificar y cuantificar las sustancias de interés. En el caso de los productos de la coca, en particular en el de las hojas, se ha utilizado varios procedimientos de extracción evaluando la totalidad de la extracción y la integridad de los componentes extraídos, basándose en partidas de cocaína recuperadas. Los métodos clásicos de extracción han utilizado un cierto número de mezclas de solventes, Obviamente, los métodos más simples de extracción, por ejemplo, los que emplean éter o un medio básico, como los que adoptan Plowman y al (1989), son eficientes y efectivos para identificar algunos alcaloides de plantas, pero, al mismo tiempo, pueden no ser cuantitativos. Farnsworth y al (1974) utilizaron una mezcla de 10 por ciento de cloroformo de amoníaco para la determination de cocaína en las hojas. Turner y Elsohy (1979 y 1981) emplearon etanol para la primera extracción total de cocaína de nuestras hojas, seguida por la repartición del residuo en tampones y cloroformo. Rivier (1981) describió los resultados del estudio de una serie de procedimientos diseñados para extraer toda la gama de sustancias presentes en las hojas de coca.En comparación con los métodos clásicos de extracción, la extracción de fluidos, sumamente importante, es un método en el cual una sustancia, generalmente un gas como dióxido de carbono o amoníaco, es licuada a presión y utilizada como un solvente de extracción de componentes de plantas. Comporta la ventaja de una menor manipulación de los estractos de plantas y de un fácil eliminación del solvente de extracción, despues de la realización de esta última.