ABSTRACT
El objetivo del presente trabajo fue estandarizar y optimizar la técnica de PCR convencional para detección de Porphyromonas gingivalis ATCC 33277. Materiales y métodos: la cepa de P. gingivalis ATCC332227 se sembró en agar Bruella enriquecido con sangre de cordero, suplementado con hemina y vitamina K. El ADN se extrajo empleando el protocolo que usa bromuro de cetil trimetilamonio (CTAB). Se evaluó la cantidad y calidad del material genético obtenido con el fotómetro UV Ampli-Quat, AQ-07 Nucleic Acid. Se realizó la PCR convencional con diferentes concentraciones de MgCl2 1 mM, 1,5 mM y 2.0 mM y a dos temperaturas de alineamiento: 60ºC y 55ºC. Los productos PCR se separaron por electroforesis en un gel de agarosa 1 por ciento. Las bandas se visualizaron en un fotodocumentador. La sensibilidad se calculó teniendo en cuenta el número de bacterias en diferentes diluciones. Resultados: se obtuvo una concentración 1,55x10(6) ng/ul de ADN genómico a partir de una suspensión bacteriana de 10a células bacterianas/ml, con índice de pureza 1,648 (relación de OD260/OD280). Los mejores resultados se obtuvieron con una concentración de 2 mM de MgCl2 y una temperatura de alineación de 55ºC. En cuanto a la sensibilidad, se obtuvo un límite de detección de 5 x 10/5 uL células bacterianas en suspensión. Conclusión: en la prueba de PCR convencional para Prophyromonas gingivalis ATCC 33277, las condiciones óptimas de estandarización son la concentración de 2 mM de MgCl y 55ºC y es necesaria una carga bacteriana mínima de 5 x 10 células/5 ul como límite de detección.
Subject(s)
Humans , Periodontitis/diagnosis , Periodontitis/microbiology , Porphyromonas gingivalis/growth & development , Porphyromonas gingivalis/isolation & purification , Polymerase Chain Reaction , Genome Components/physiology , Electrophoresis, Agar Gel , DNA, Bacterial/isolation & purification , Culture MediaABSTRACT
Los avances tecnológicos y la culminación del Proyecto Genoma Humano y con él la secuencia de 3.200 millones de los nucleótidos o de las letras (A-T/G-C) que la componen, y los aproximadamente 1.400 genes que pueden ser las causas de enfermedades consideradas hasta este momento como genéticas, han cambiado la cara de las investigaciones biológicas y han colocado a la genómica en la vanguardia de la ciencia biomédica. En la periodontología, así como en la medicina, estamos muy interesados en la genética y en los diferentes acomodos o polimorfismos de los nucleótidos (SNIPs), tanto en los humanos como en los patógenos, así como la interacción genética entre ellos