ABSTRACT
O objetivo deste estudo foi otimizar protocolos e padronizar métodos de diagnóstico molecular para infecção pelo HCV em amostras de sangue coletado empapel de filtro (SPF) para facilitar o acesso ao diagnóstico em áreas remotas ou com recursos limitados. Para isto, 99 indivíduos forneceram amostras pareadas de soro e SPF, dentre os quais 59eram anti-HCV reagente e 40 eram não reagentes em suas amostras de soro. As amostras anti-HCVreagentes foram submetidas à técnica de quantificação comercial. Para o desenvolvimento da RTPCRquantitativa (RT-qPCR) in house, uma curva padrão interna foi construída utilizando umplasmídeo contendo o inserto do HCV e iniciadores e sonda foram desenhados para a região 5´NCdo HCV. Para otimização da técnica, a concentração de cDNA, transcriptase reversa e númerosde ciclos de reação foram avaliados. Para a extração de RNA de HCV em amostras de SPF, setemétodos foram avaliados. A sensibilidade, especificidade, correlação, reprodutibilidade epresença de inibidores da RT-PCR quantitativa também foram determinados. O conjunto deQIAamp DNA Mini Kit foi o método mais eficiente para extração do RNA do HCV em SPF. A RTqPCRin house desenvolvida foi capaz de quantificar o HCV no soro de 44 amostras onde a medianade carga viral foi inferior aquela observada na técnica comercial (log10 4,94 e log10 6 cópias deHCV/mL, respectivamente)...
The aim of this studywas to optimize protocols and standardize molecular diagnostic methods for HCV infection in driedblood samples (DBS) to facilitate access to diagnosis in remote areas or with limited resources. Forthis, 99 individuals provided paired serum and DBS samples, where 59 of them were anti-HCVreactive and 40 were non-reactive in their serum samples. Anti-HCV positive samples were subjectedto commercial quantification technique. For the development of quantitative RT-PCR (RT-qPCR) inhouse, an internal standard curve was constructed using a plasmid containing the insert and HCVprimers and probe designed for the 5' non coding (NC) region of HCV. For optimization of thesetechniques, the concentration of cDNA, reverse transcriptase and numbers of cycles of reaction wereevaluated. For the extraction of HCV RNA in DBS samples, seven methods were evaluated. Thesensitivity, specificity, correlation, reproducibility and presence of inhibitors in quantitative RT-PCRwere also determined. QIAamp DNA Mini Kit was the most efficient method for HCV RNA extractionamong DBS samples. The in house RT-qPCR was able to quantify HCV among 44 serum sampleswhere the median viral load was lower than that observed in commercial technique (4.94 log10 and 6log10 copies of HCV / mL, respectively). The range of HCV detection using in house RT-qPCR was 10-109 copies of HCV per reaction...
Subject(s)
Humans , Blood Specimen Collection , Hepacivirus/chemistry , Hepatitis C/history , Molecular Diagnostic Techniques , Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction , Serologic TestsABSTRACT
Se hace una revisión del descubrimiento de los virus GB (GB-A, GB-B y GB-C) y se menciona la relación que hay entre el virus GB-C y el virus G. Los virus GB-Ay GB-B al parecer no son patógenos para el hombre. El virus GB-C, G o GB-C/G se trasmite por vía parenteral, generalmente a través de transfusiones sanguíneas o agujas contaminadas; produce infección crónica; su prevalancia varía de menos del 1 por ciento en donadores voluntarios de sangre a más de 10 por ciento en sujetos que presentan infección frecuente por virus C y B, y patogenicidad no está bien definida