Acción de las hormonas tiroideas sobre la modulación de la expresión genética de la enzima málica citosólica hepática, en ratas intoxicadas con hexaclorobenceno / Action of the thyroid hormone on modulation of the gene expression of the liver cytosolic malic enzyme, in intoxicated rats with hexachlorobenzene

El hexaclorobenceno (HCB) es un tóxico ampliamente distribuído en la biosfera. La exposición crónica de animales de laboratorio al HCB provoca disfunciones tiroideas. Previamente hemos demostrado que el HCB incrementa la actividad de enzimas hepáticas reguladas por hormonas tiroideas (HT) tales como: enzima málica (EM) y glucosa-6fosfato de dehidrogenasa (G6PD) sin alterar la actividad de la alpha-glicerol fosfato deshidrogenasa mitocondrial (alpha-GPD). En éste estudio hemos investigado si el HCB afectaba: a) la concentración del receptor de hormonas tiroideas (RT3) y su afinidad por el ligando, b) la expresión del gen de EM y de otras enzimas HT-dependientes, c) los complejos proteína/DNA formados sobre el elemento de respuesta a hormonas tiroideas (TRE). Se utilizaron hígados de ratas hembras Wistar intoxicadas con HCB (100 mg/100 g P.C.), por 9 y 15 días. El análisis de Scatchard mostró que ni la afinidad ni el número de sitios RT3 estaban alterados luego de 9 y 15 días de tratamiento con HCB (Control, Ka: 1,9 nM, Bmáx:3.9 fmol/100mug DNA; HCB9díasKa2.1nM, Bmáx4.5 fmol/100mug DNA; HCB15 días Ka 1.9nM, Bmáx5.1 fmol/100mug DNA). Tampoco los niveles de RNAm de TRbeta1 medidos por ensayos de protección a RNasa fueron afectados por HCB. Ensayos de Northern Blot han demostrado que los niveles de RNAm de EM se incrementaban 4 veces y 2 veces con respecto al control después de 9 y 15 días de intoxicación respectivamente, sin observarse alteraciones en los niveles de RNAm de otras enzimas cuya expresión es regulada por HT como gliceraldehído - 3 - fosfato deshidrogenasa (GAPDH) y fosfoenolpiruvatocarboxiquinasa (PEPCK) ni tampoco en la alpha-GPD mitocondrial. Ensayos de retardo en gel mostraron que el HCB no modificó la afinidad de las proteínas presentes en extractos nucleares por el TRE presente en el promotor de EM. Nuestros resultados sugieren que el RT3 no está involucrado en forma directa en la inducción de la expresión del gen de EM por HCB, sin embargo podría interaccionar con otros factores de transcripción en la sobreexpresión del gen de EM.

Efecto de la tioctamina frente a la acción del hexaclorobenceno / Effect of the thioctamide in relation the hexachlorobenzene action

Se estudió el efecto de la intoxicación crónica con hexaclorobenceno en ratas, con y sin administración simultánea de tioctamida. En el grupo que recibió hexaclorobenceno solo, se produjo el esperado desarrollo de porfiria incrementándose la excreción urinaria y el contenido hepático de porfirinas y disminuyendo la actividad Uroporfirinógeno decarboxilasa. El contenido hepático de dienos conjugados no varió, en tanto que el de malondialdehido se incrementó en un grado estadísticamente no significativo. Estos resultados indicarían la existencia de un ligero proceso de peroxidación lipídica. La tioctamida (25 mg/Kg de peso) produjo efectos nocivos antes que protectores, detectados por un aumento de la actividad transaminasa glutámico pirúvica y una inhibición a nivel de la primera etapa de la Uroporfirinógeno decarboxilasa. Los resultados indicarían que: 1) altas dosis de tioctamida producen un decremento en la actividad Uroporfirinógeno decarboxilasa, enmascarando quizás su posible efecto protector frente a la acción del hexaclorobenceno por radicales libres; 2) la Uroporfirinógeno decarboxilasa es un parámetro más sensible que la medición de dienos conjugados o de melondialdehido para ensayar la producción de radicales libres por acción del hexaclorobenceno in vivo. De ser así, la tioctamida, ensayada a dosis menores y no tóxicas, a través de su habilidad como atrapante de radicales libres, quizás pueda proteger contra la acción del hexaclorobenceno.

Modelo experimental de Porfiria Cutánea Tarda inducido por hexaclorobenceno en ratones Hairless / Experimental model of Porphyria Cutaneous Tarda by hexaclorobenceno in Hairless mice

En este trabajo se describe el efecto del HcB en ratones de la cepa hairless a fin de obtener un modelo experimental de PCT, lo que facilitaría el estudio de la fotosensibilización cutánea característica de la enfermedad y el ensayo de cremas dermatológicas. El HCB es un hidrocarburo polihalogenado que ha sido utilizado con éxito en ratones de las cepas Balb/C y C57BL. Los animales recibieron una única dosis de 200 mg HCB/Kg (vía i.p.). Dentro de los controles, un grupo no recibió ningún tratamiento y otro solo el pretratamiento con hierro. A distintos tiempos luego de comenzada la intoxicación, los animales fueron sacrificados y se determinó la relación porcentual peso hígado/peso corporal, se extrajeron y cuantificarón las porfirinas de piel, hígado, orina yheces; y se midió la actividad de la enzima Uro-D hepáica. Además se midieron los niveles de Cit-450 y LPO hepáticos y la concentración de glutation en hígado y piel, como indicadores del grado de intoxicación. Se observó en ambos sexos, un aumento del 40 por ciento en la relación porcentual peso hígado/ peso corporal tanto en los grupos intoxicados como en los control hierro. En hembras, los niveles de porfirinas aumentaron tanto en hígado como en piel, dicho aumento ocurrió luego de un descenso en los niveles de glutation. En cambio en machos , los niveles de prfirinas solo aumentarom en piel, registrándose una aumento en los niveles de glutation en ambos tejidos.

Precancerous pathology evoked by hexachlorobenzene treatment

The porphyrinogenic and carcinogenic ability of hexachlorobenzene (HCB) was assayed in male and female gold hamsters, and histological examinations of tissue alteraions were performed. So it was studied, in liver: a) prophyrin content which was significantly increased at five months of HCB treatment, specially in males, and the pattern of accumalated porphyrins which was altered independent of the sex, b) haem pathway enzymes: delta aminolaevulinicacid synthase, ferrochelatase and porphyrinogen carboxylyase (PCL); among which only PCL appeared to be altered just at ten months of HCB feeding. While thyroid gland and kidney remained unaltered along the treatment time, liver and spleen exhibited a noticeable size variation and morphological alterations. In fact the spleen in treated animals was hypotrophic showing a red pulp less developed with respect to the Malpighian corpuscles and many macrophages with iron deposits. Respect to the liver, enlargement in size of hepatocytes, high content of iron deposits, no PAS positive structures in the cytoplasm, several small lipid droplets, microsteatosis although no cytonecrosis, polymorphic nuclei, and proliferations of nucleoli were observed. Therefore HCB is able to cause precancerous pathology and to induce porphyria in hamster, but not hyperthyroidism, upon this experimental conditions. By the way, males were found to be a good experimental model, better than females, to study the earliest relations between porphyria and cancer.