Fluconazole levels in serum and cerebrospinal fluid according to daily dosage in patients with cryptococcosis and other fungal infections

ABSTRACT Fluconazole is extensively used for the treatment of candidiasis and cryptococcosis. Among other factors, successful treatment is related to appropriate fluconazole levels in blood and cerebrospinal fluid. In the present study, fluconazole levels were determined in 15 patients, 14 of whom had AIDS and 13 had neurocryptococcosis. The only selection criterion was treatment with fluconazole, which was performed with a generic or similar form of the drug. Fluconazole level was determined by high performance liquid chromatography and the susceptibility profile of Cryptococcus spp. isolated from the patients was assessed by broth microdilution. Blood and cerebrospinal fluid fluconazole levels were found to be related to the fluconazole daily dose, and exceeded the minimum inhibitory concentration of this antifungal for the Cryptococcus spp. isolates. A good correlation was observed between serum and cerebrospinal fluid drug concentration. In conclusion, treatment with non-original fluconazole under usual medical practice conditions results in appropriate blood and cerebrospinal fluid levels of the drug for inhibiting Cryptococcus spp. susceptible to this antifungal drug. The relatively common failures of neurocryptococcosis treatment appear not to be due to insufficient fluconazole levels in the cerebrospinal fluid, especially with the use of daily doses of 400-800 mg.

The use of nested Polymerase Chain Reaction (nested PCR) for the early diagnosis of Histoplasma capsulatum infection in serum and whole blood of HIV-positive patients* / Uso da Reação em Cadeia da Polimerase aninhada (PCR aninhada) para o diagnóstico precoce da infecção pelo Histoplasma capsulatum no soro e no sangue total de pacientes HIV positivos

The aim of the study was to detect the rDNA sequences and their regions in Histoplasma capsulatum, which could be considered species-specific and used as a molecular method for this diagnosis by the technique of nested polymerase chain reaction (nested PCR), employing specific sequences (primers) for H. capsulatum: 18S rDNA region (HC18), 100 kDa (HC100) and the sequence 5.8 S-ITS rDNA (HC5.8). The PCR sequences HC18, HC100 and HC5.8 resulted in a specificity of 100%. The molecular assays may increase the specificity, sensitivity and speed in the diagnosis of Histoplasmosis.

O objetivo do estudo consistiu em detectar seqüências no ADNr e as suas regiões no Histoplasma capsulatum, que pudessem ser consideradas espécie-específicas e usadas como método molecular para o diagnóstico pela técnica da reação em cadeia da polimerase aninhada ("nested PCR") com seqüências específicas ("primers") para H. capsulatum: regiões 18S ADNr (HC18), 100kDa (HC100) e a seqüência 5.8 S ADNr-ITS (HC5.8). A "nested PCR" com as seqüências HC18, HC100 e HC5.8 resultaram em 100% de especificidade. Os ensaios moleculares podem aumentar a especificidade, sensibilidade e rapidez na diagnose da Histoplasmose.

Diagnóstico presuntivo de histoplasmosis en un frotis sanguíneo / Presumptive diagnosis of histoplasmosis in a blood smear / Diagnóstico presuntivo de histoplasmose em um esfregaço de sangue

Se comunica el diagnóstico de un caso de histoplasmosis asociada al SIDA a partir de la microscopía de un extendido hemático realizado en oportunidad del procesamiento de una muestra enviada al laboratorio para un estudio hematológico. El extendido, fijado con metanol y teñido con solución de Giemsa al 10% reveló, con objetivo de 100X, estructuras levaduriformes de 2-4 µ de diámetro dentro de las células leucocitarias sanguíneas, con la típica tinción en casquete y la presencia de un halo claro periférico, que caracterizan microscópicamente a Histoplasma capsulatum. Luego, para confirmar el hallazgo micológico, se procedió a teñir el mismo preparado con la técnica de Grocott, la cual puso de manifiesto levaduras de color pardo, dentro de los leucocitos sanguíneos. El paciente, deteriorado clínica e inmunológicamente (<50 linfocitos T CD4+/µL), falleció al día siguiente de efectuado el diagnóstico, a pesar de las medidas terapéuticas tomadas. Este hallazgo pone de manifiesto la necesidad de contar, en un Centro de Referencia de Enfermedades Infecciosas, con operadores entrenados para reconocer estructuras microbianas de importancia diagnóstica en extendidos hemáticos, aún en el Laboratorio General. El diagnóstico inmediato de ésta y otras infecciones graves, como el paludismo, a partir de estas muestras permite instalar un tratamiento etiológico y mejorar las posibilidades de éxito terapéutico.

A case of AIDS-associated histoplasmosis diagnosed by microscopy from a blood smear performed during a hematologic study was reported. The smear, fixed with methanol and stained with 10% Giemsa solution, revealed with a 100X objective, 2-4 µ-diameter yeast - like structures within the leuMicrobiología contakocytes, showing a typical staining in cap and a peripheral clear halo, characteristic of Histoplasma capsulatum. To confirm the mycological finding, the same smear was stained with the Grocott technique, showing brownish yeasts in the leucocytes. The patient, clinically deteriorated and with advanced immunological disorder (<50 T CD4+ lymphocytes/µL), died the next day after the diagnosis was made, in spite of the established treatments. This finding highlights the need to have operators trained in the recognition of microbiological structures of diagnostic importance in hematological smears in a Reference Center of Infectious Diseases, and even in the General Laboratory. The immediate diagnosis of this and other serious infections, as Malaria, enables the etiologic treatment and increases the possibilities of therapeutic success.

Comunica-se o diagnóstico de um caso de histoplasmose associada à AIDS, de uma microscopia de extensão sanguínea realizada por ocasião do processamento de uma amostra enviada ao laboratório para um estudo hematológico. A extensão, fixada com metanol e corada com solução de Giemsa a 10%, revelou com objetivo de 100X, estruturas leveduriformes de 2-4 µ diâmetro dentro de células leucocitárias do sangue, com a típica coloração em tampão e a presença de um halo claro periférico, os quais caracterizam microscopicamente a Histoplasma capsulatum. Em seguida, para confirmar o achado micológico, foi corada a mesma preparação com a técnica de Grocott, que mostrou leveduras de cor parda, dentro dos leucócitos sanguíneos. O paciente clínica e imunologicamente deteriorado (<50 células T CD4+/ µL) morreu um dia após o diagnóstico, apesar das medidas terapêuticas adotadas. Este achado evidencia a necessidade de contar, em um Centro de Referência para Doenças Infecciosas, com operadores treinados para reconhecer estruturas microbianas de importância diagnóstica em extensões sanguíneas, mesmo no Laboratório Geral. O diagnóstico imediato desta e de outras infecções graves como a Malária, a partir de uma extensão sanguínea torna possível instalar um tratamento etiológico e melhorar as chances de êxito terapêutico.

Diagnóstico molecular de histoplasmosis humana en muestras de sangre entera / Molecular diagnosis of human histoplasmosis in whole blood samples

Se evaluó el uso de sangre entera para el diagnóstico molecular de histoplasmosis utilizando un método artesanal de extracción de ADN fúngico y una PCR anidada que amplifica una porción del gen HcP100 específica de Histoplasma capsulatum. La sangre entera se trató con liticasa, enzima lisante de Trichoderma harzianum y proteinasa K, seguido de una extracción fenólica. Este tratamiento permitió una lisis completa de las células, mostró buen rendimiento en la obtención de ADN y posibilitó la detección de la banda de 210 pb específica de H. capsulatum en la PCR anidada. El límite de detección fue de 0,25-1 levaduras/ml de sangre. El método se evaluó en 31 muestras de sangre de 19 pacientes con diagnóstico microbiológico de histoplasmosis, en 21 muestras de pacientes con otras micosis o infecciones por micobacterias y en 30 controles sanos. La PCR fue positiva en sangre para 17/19 pacientes con histoplasmosis (14/15 inmunocomprometidos y 3/4 sin inmunocompromiso aparente). Las muestras de sangre de los 30 controles sanos y de 20 pacientes con otras patologías fueron negativas, sólo hubo un falso positivo correspondiente a un paciente con infección por Mycobacterium avium-intracellulare. El método presentó 89% de sensibilidad y 96% de especificidad para el diagnóstico de histoplasmosis en sangre entera.

To assess the value of using whole blood samples for the molecular diagnosis of histoplasmosis, we applied an in-house DNA extraction method and a nested PCR targeting a 210 bp specific segment of the Histoplasma capsulatum HcP100 gene. A whole blood volume of 2.5-3 milliliters was centrifuged and the cellular pellet was treated with Trichoderma harzianum lyticase and proteinase K prior to applying a conventional phenol DNA extraction. This procedure allowed complete cell lysis, high DNA yield and specific amplification. The PCR detection limit was 0.25-1 yeast cells/ml of blood sample. The method was assessed on 31 blood samples from 19 patients with microbiological diagnosis of histoplasmosis, 30 healthy persons and 21 patients with other mycoses or mycobacterial diseases. Positive results were obtained in samples from 17/19 patients with histoplasmosis (14/15 immunocompromised and 3/4 without known immunological disorder). Blood samples from the 30 healthy controls and 20 patients with other conditions proved negative; the only false positive result was obtained from a patient with Mycobacterium avium-intracellulare infection. With 89% sensitivity and 98% specificity, this molecular method for detection of the agent in blood shows promising for the rapid diagnosis of human histoplasmosis.

Blood culture as a parameter of treatment effectiveness in experimental histoplasmosis of the hamster

The aim of this study was to determine the value of blood culture as a parameter of treatment efectiveness in experimental histoplasmosis. A total of thirty five hamsters, weighing approximately 120g, were inoculated intracardiacly with 0.1 ml of a suspension containing 4 x 10 a setima potencia cells/ml of the yeast phase of H. capsulatum. Treatments were started one week after the infection and lasted for 3 weeks...

Histoplasma capsulatum en sangre periférica de pacientes con SIDA: informe de cuarto casos con elevación de deshidrogenasa láctica / Histoplasmosis in peripheral blood smear of patients with AIDS: a report of four cases with serum lacte dehydrogenase elevated

Se describen los casos clínicos de cuatro pacientes con SIDA en quienes se hizo el diagnóstico de histoplasmosis al encontrar H. capsulatum en frote de sangre periférica. Todos los pacientes tuvieron evolución ffulminante de la infección y fallecieron durante los primeros cuatro días de hospitalización. En todos los casos de corroboró en cultivo la presencia de micelio y macroconidias "ornamentadas" característico de Histoplasma. Presentaron alteraciones hematológicas que son frecuentes en otras entidades asociadas a SIDA y, además, elevación importante de la enzima deshidrogenasa láctica sérica de más de diez veces el valor normal (menos de 221 Ul/mL): la cifra menor de DHL encontrada en estos pacientes fue de 2137 Ul/mL y la mayor de 4839 Ul/mL. Esta presentación que semeja septicemia y el hallazgo se sangre periférica de histoplasma, representan el 11.7 por ciento de los 34 pacientes con SIDA e histoplasmosis atendidos en el hospital de infectología del Centro Médico "La Raza".

Estudio comparativo de dos sistemas de hemocultivos en micosis sistémicas asociadas al SIDA / Two blood culture systems for the detection of fungemia in AIDS patients: a comparative study

Se realizó un estudio comparativo de dos métodos de hemocultivos para hongos en pacientes VIH positivos que presentaban fiebre prolongada o una micosis sistémica confirmada. La técnica convencional consistió en sembrar 5-10 ml de sangre venosa en frascos con caldo tripteina-soya y polianetol sulfonato de sodio como anticoagulante. A los 7 y 14 días de incubación a 37-C se realizaron repiques en medios de agar-miel de Sabouraud y agar-infusión de cerebro y corazón. El método de centrifugación-lisis se llevó a cabo con 5 a 10 ml de sangre venosa heparinizada, se separó el plasma por centrifugación: el sedimento fue tratado con una solución de saponina al 0.5%, después de obtenida la lisis, la muestra fue nuevamente centrifugada y el material restante se sembró en agar-miel de Sabouraud y agar-infusión de cerebro y corazón, la incubación se realizó a 28-C y 37-C. Fueron estudiadas 288 muestras, que se procesaron simultáneamente por los dos sistemas. La técnica convencional permitió el aislamiento de Cryptococcus neoformans en el 7.9%de los materiales, en tanto que el Histoplasma capsulatum, fue aislado en el 1%. El sistema de centrifugación-lisis recuperó el C. neoformans en el 7.3%de los hemocultivos y el H. capsulatum en el 3.8%. El lapso medio para el aislamiento e identificación de ambos hongos disminuyó 7 días, con el método de centrifugación-lisis. Esta última técnica resultó ser más simple, más rápida y más sensible que el procedimiento convencional. Se comprobaron fungemias en el 86.2%de los casos de criptococosis y en el 70.5%de las histoplasmosis asociadas al SIDA

Histoplasmosis: seguimiento serológico / Histoplasmosis: serologic follow-up

Se presentan los resultados positivos obtenidos en los sueros de 70 pacientes con histoplasmosis, las formas clínicas de la enfermedad y las posibilidades de un seguimiento adecuado de la evolución clínica de estos pacientes mediante la titulación de los sueros extraídos durante la persistencia de los signos y síntomas de la enfermedad y después de su desaparición. La forma clínica más frecuente fue el pulmonar aguda y la banda de precipitación m sola se encontró en mayor número de sueros que la asociación de las bandas h y m. Se informa de un caso diagnosticado como histoplasmosis pulmonar aguda, que 9 meses de estar negativizado clínica y serológicamente se detectan nuevamente las bandas de precipitación y se le aisla el Histoplasma capsulatum de las lesiones en la mucosa oral. Se enfatiza en la importancia del seguimiento serológico de los pacientes con histoplasmosis hasta su total negativización y la factibilidad de este seguimiento mediante la titulación de los sueros por la técnica de contrainmunoelectrofóresis

Histoplasmosis epidemica: 1. aspectos clinicos y serologicos / Epidemic histoplasmosis: 1. clinical and serological aspects.

Se describe una epidemia de histoplasmosis en un grupo de excursionistas que visitaron la cueva del Eden en Cunday (Tolima), cueva habitada por murcielagos. Los hallazgos clinicos, radiologicos confirmaron un alto porcentaje de infeccion (78.6%) con H. capsulatum. El porcentaje de enfermedad con sintomatologia moderada y recuperacion sin tratamiento, fue de 10%. Las dos pruebas serologicas para histoplasmosis, la doble inmunodifusion en gel de agar y la fijacion del Complemento permitieron establecer el diagnostico; ademas la prueba de F.C. permitio seguir la evolucion serologica de los pacientes. Se destaca la importancia de dar a conocer el problema que representa la infeccion con Histoplasma capsulatum