Optimización en la recuperación de inmunoglobulinas, como molécula entera y fragmento F(ab´)2, en la producción de antivenenos / Optimization in the immunoglobulins recovery, as whole molecule and F(ab´)2 fragment, in the antivenim production

En la actualidad se utilizan, principalmente, dos métodos de purificación de anticuerpos a partir de plasmas equinos hiperinmunes para la producción de antivenenos a nivel industrial, obteniéndose preparaciones enriquecidas en moléculas de inmunoglobulinas G ó fragmentos F(ab´)2. Con ambos métodos, luego de la precipitación, se observa una importante pérdida de capacidad neutralizante en comparación con la capacidad neutralizante de los plasmas de partida. En este trabajo, se realizó el fraccionamiento de plasmas equinos hiperinmunes utilizando ácido caprílico con y sin digestión enzimática con pepsina. El objetivo del trabajo fue dar a conocer la proporción de recuperación de la capacidad neutralizante luego del fraccionamiento; resultando ésta menor cuando el plasma se trató enzimáticamente. Adicionalmente, se propuso establecer cuál sería la etapa responsable de la diferencia en la recuperación de anticuerpos entre una metodología y otra. Cuando se purificaron las inmunoglobulinas enteras, se recuperó aproximadamente un 53% de la capacidad neutralizante mientras que cuando la muestra se purificó luego de ser tratada enzimáticamente, se obtuvo alrededor del 30% de esa actividad. Una relación de similar magnitud se verifica en la recuperación de la masa de proteínas solubles luego de remover los contaminantes, entre una metodología y otra. La insolubilización del fragmento Fc generado durante la digestión sería el responsable de esa pérdida adicional de proteína y capacidad neutralizante.

Today two methods are mainly used for the purification of antibodies from hyperimmune equine plasma at industrial level obtaining enriched preparations of immunoglobulin G (IgG) molecules or F(ab´)2 fragments. In both methods, after the precipitation, an important loss in the neutralizing capability was observed compared to the one of the original plasma. In this work, we performed the fractionation of hyperimmune equine plasma using caprylic acid, with and without enzymatic digestion with pepsin. The aim was to explain the percentage of recovery of the neutralizing capability after the fractionation; which resulted minor when the plasma was enzymatically treated. Additionally, we intended to establish which stage, in the purification process, was the responsible for the difference in the antibody recovery between one methodology and the other. When entire immunoglobulins were purified, approximately 53% of the neutralizing capacity was recovered, but when the sample was purified after the enzymatic treatment, around the 30% of the activity was obtained. A ratio of similar magnitude is verified on the recovery of the soluble protein mass after the removal of contaminants, between the two methods. The insolubilization of the fragment Fc generated during digestion would be responsible for the additional loss of protein and neutralizing capacity.

Comparison of four different purification methods for isolation of anti Echis carinatus antivenom antibodies from immunized chicken egg yolk

Egg-laying hens were immunized with the Echis carinatus venom and the resulting antibodies were extracted from egg yolk by four different purification methods. The chicken egg yolk antibodies were purified by the water dilution method, polyethylene glycol [PEG] and ammonium sulphate precipitation method, chloroform extraction and the Lithium sulphate precipitation method. These methods were compared in terms of total protein content, immunospecific anti E. carinatus immunoglobulin Y [IgY] activity and in vitro and in vivo neutralizing capacity of IgY against the E. carinatus venom. Total IgY concentrations varied from 1.6 to 7.0 mg per ml of egg yolk. In neutralization studies, IgY purified by PEG and ammonium sulphate precipitation [PEG-AS] showed better results when compared to other purification methods. Approximately 1.25 mg of IgY [PEG-AS] was able to neutralize 2Lethal Dose50 of the E. carinatus venom. Purification of IgY by PEG and ammonium sulphate yielded very pure IgY at high quantities [93% +/- 5% of total egg yolk protein], which was also capable of neutralizing toxic and lethal components of the E. carinatus venom

Effect of beta-propiolactone treatment on the complement activation mediated by equine antisera

A reducao da ativacao do complemento atraves de uma alteracao do fragmento Fc das imunoglobulinas pela beta-propiolactona foi obtida em soros hiperimunes equinos antivirus rabico, venenos Bothrops e toxina difterica. Os resultados foram avaliados por teste de anafilaxia em cobaias, e comparados com aqueles obtidos com os mesmos soros purificados por precipitacao salina (sulfato de amonio), seguidos ou nao por digestao enzimatica com pepsina. Os niveis de pureza proteica foram para o soro antibotropico de 184,5 mg/g e 488,5 mg/g tratado pela beta-propiolactona e digeridos pela pepsina, respectivamente...(au)

Obtención de un antisuero específico contra la forma 22K de la hormona de crecimiento humana (hGH) / Obtention of a antiserum specific against the form 22K of the human growth hormone (hGH)

En el presente trabajo se describe la obtención del anticuerpo policlonal específico contra la fracción monomérica 22K de la hormona de crecimiento humana (hGH). La hormona fue obtenida a partir de hipófisis humanas congeladas, mediante un esquema de extracción basado en diferencias de solubilidad y la fracción 22K separada por cromatografía de filtración por gel. El antisuero específico fue obtenido por inoculación del antígeno en conejos raza Nueva Zelanda, cuya producción fue controlada valorando el título por RIA. La caracterización parcial del antisuero se realizó mediante la determinación del título óptimo, especificidad. afinidad, y su aplicabilidad para cuantificación en términos de curva estándar y control de calidad, en comparación con el antisuero de referencia. Los resultados indicaron que el antisuero puede emplearse en la cuantificación de hGH por RIA

Obtención de anticuerpos especifícos para la IgG de ratón / Production of specific antibodies to mouse IgG

Se llevó a cabo la purificación de IgG de ratón, con la que se preparó un antisuero en cabra. A partir de este antísuero se aislaron los anticuerpos específicos por cromatrografía de afinidad, con el empleo de la IgG de ratón purificada acoplada a la Sepharosa C1-4B. Se obtuvo una concentración de los ancuerpos aislados de 1,5 mg/mL, con una cantidad que representó aproximadamente el 3 por ciento del total de anticuerpos. Se evaluó la pureza, la reactividad y la especificidad de estos anticuerpos

Obtención y evaluación de antígenos de excresión-secreción en hembras adultas de Angiostrongylus cantonensis / Attainment and evaluation of excretion-secretion antigens in adult females of Angiostrongylus cantonensis

Hembras adultas de Angiostrongylus cantonensis se mantuvieron in vitro para la obtención de antígenos de excreción-secreción (Ag Exc-Sec Ac). Los antígenos se evaluaron frente a inmunosueros obtenidos en conejo y sueros de ratas infestadas experimentalmente, mediante las técnicas de contrainmunoelectrofóresis e inmunodifusión doble al no mostrar reaccciones cruzadas con otros helmintos. Se obtuvo un inmunosuero de alto título y especificidad. Se detectaron títulos de anticuerpos en suero de ratas infestadas en diferentes tiempos de posinfestación con antígenos de excreción-secreción de adultos