Imunização de camundongos LDLr-/- com peptídeo mimético da LDL eletronegativa: uma potencial estratégia terapêutica para a ateroscleros / Immunization of LDLr - / - mice with electronegative LDL mimetic peptides: a potential therapeutic strategy for atherosclerosis

Introdução: A aterosclerose é uma doença inflamatória crônica decorrente de alterações na parede das artérias de médio e grande calibre e associadas a diversos fatores de risco, dentre os quais destaca-se as hiperlipidemias, ou seja, o aumento plasmático das lipoproteínas, mas também outras comorbidades, como a Síndrome Metabólica. Entre as lipoproteínas, a lipoproteína de baixa densidade (LDL) é de grande relevância na aterosclerose. Diferentes espécies de LDL modificada (LDLm) são originadas através de lipólise, glicação e proteólise, além da oxidação, variando em densidade e eletronegatividade, sendo melhor denominada LDL eletronegativa [LDL (-)]. Considerando as diferenças conformacionais entre a estrutura da ApoB-100 da LDL nativa e da LDL (-), em um estudo inicial, nosso grupo desenvolveu um anticorpo monoclonal (2C7) a partir da imunização de camundongos Balb/c com a LDL (-) humana. Em uma etapa seguinte foi mapeado o epítopo reconhecido pelo anticorpo monoclonal anti-LDL (-) através de phage display. O peptídeo ligante do anticorpo monoclonal anti-LDL (-) foi nomeado p2C7. Esse peptídeo não representa regiões da sequência linear da ApoB-100 humana, mas microdomínios conformacionais de epítopos da ApoB-100 da LDL (-), tornando-os candidatos para a imunomodulação da aterogênese. Portanto, investigar a imunomodulação induzida pelos peptídeo p2C7 miméticos da LDL (-), por representar um epítopo imunodominante da LDL (-), poderá abrir novas perspectivas terapêuticas futuras para a imunomodulação da aterosclerose. Objetivo: Avaliar a imunomodulação promovida pelo p2C7 in vivo, utilizando camundongos C57BL/6 LDLr -/- e amostras de plasma humano. Adicionalmente, no estágio (BEPE) realizado no Instituto Karolinska (dezembro de 2019 a março de 2021), investigou-se o imunometabolismo como mediador nas doenças cardiovasculares. Na parte II-A, estão descritos os resultados do estudo inicialmente proposto. Na parte II-B, apresenta-se os resultados que foram desenvolvidos posteriormente, com ampliação do escopo do projeto, abordando-se a inflamação vascular envolvida no aneurisma de aorta abdominal através de ferramentas de bioinformática. Na parte II-C, são apresentados os resultados do estudo do envolvimento da enzima indolamina 2,3 dioxigenase (IDO) na esteatohepatite não-alcoólica (NASH) e aterosclerose em camundongos ApoE-/- and ApoE/IDO/double-knockout. Metodologia: Foi avaliada a presença de anticorpos anti-p2C7 em amostras de plasma humano de indivíduos com ou sem síndrome metabólica. Realizamos a determinação de TNF circulante nas mesmas amostras e prosseguimos com regressões lineares associando os parâmetros inflamatórios com os níveis de anticorpos anti-p2C7. Camundongos C57BL/6 LDLr -/- foram imunizados com p2C7 e os adjuvantes Alum ou Montanide ISA 720, analisando-se os títulos de anticorpos contra p2C7 e LDL (-), a produção de citocinas (IL-10, IL-4, IL-2, IL-6, IFNγ, IL-17, TNFα) e células secretoras de anticorpos. Camundongos C57BL/6 LDLr -/- foram tolerizados contra os peptídeos mimotopos, com injeções intravenosas (veia caudal) e desafiados com a imunização contendo LDL (-) + Alum. Avaliou-se os títulos de anticorpos contra p2C7 e LDL (-) e a produção de citocinas (TNF-α, IFNγ, IL-12, IL-6, IL-10 e MCP-1). Os camundongos foram mantidos em dieta hipercolesterolêmica por 3 meses para formação da placa aterosclerótica. Após este período, os camundongos foram eutanasiados, avaliando-se a formação de placa aterosclerótica na artéria abdominal e arco aórtico, assim como a produção de citocinas (TNF-α, IFNγ, IL-12, IL-6, IL-10 e MCP-1). Camundongos C57BL/6 LDLr -/- foram imunizados com OVA-p2C7 e, após dieta hipercolesterolêmica de 3 meses para formação de placa aterosclerótica, foram avaliados os parâmetros inflamatórios e avaliada a captação de 18F-FDG no arco aórtico através de PET/CT. Resultados: A imunização com o p2C7 (livre) não foi capaz de induzir resposta humoral, não se observando títulos detectáveis de anticorpos reativos à p2C7 ou LDL (-) em nenhum camundongo imunizado, assim como não foram detectadas células secretoras de anticorpos específicos para a LDL (-). O grupo imunizado com Alum ou Montanide + p2C7 teve aumento significativo na produção de TNF- quando comparado com os demais grupos. O protocolo de tolerização foi realizado com sucesso, visto que os camundongos tolerizados apresentaram títulos de anticorpos inferiores aos controles para o epítopo utilizado. Apenas os camundongos tolerizados com o p2C7 apresentaram aumento significativo na produção de IL-6, IL-12, IL-10, TNF-α, IFNγ e MCP 1 após dieta hipercolesterolêmica. A imunização ativa com OVA-p2C7 foi capaz de reduzir a produção de TNF induzida pela dieta hipercolesterolêmica, assim como reduzir a captação de 18F-FDG. Conclusão: o epítopo p2C7 é altamente expresso na LDL (-) de pacientes com maior risco cardiovascular. Além disso, a imunização ativa com p2C7 também se mostra uma ferramenta promissora para prevenir e regular a inflamação causada pela LDL (-) no curso da aterosclerose

Introduction: Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease resulting from changes in the wall of medium and large-caliber arteries and associated with several risk factors, among which hyperlipidemias stand out, ie, the increase in plasma lipoproteins, but also other comorbidities, such as Metabolic Syndrome. Among the lipoproteins, low-density lipoprotein (LDL) is of great relevance in atherosclerosis. Different isoforms of modified LDL (LDLm) are originated through lipolysis, glycation and proteolysis, in addition to oxidation, varying in density and electronegativity, being better called electronegative LDL [LDL (-)]. Considering the conformational differences between the ApoB-100 structure of native LDL and LDL (-), in an initial study, our group developed a monoclonal antibody (2C7) from the immunization of Balb/c mice with human LDL (-). In a next step, the epitope recognized by the anti-LDL monoclonal antibody (-) was mapped using phage display. The binding peptide of anti-LDL monoclonal antibodies (-) was named p2C7. This peptide does not represent linear sequence regions of human ApoB-100, but conformational microdomains of LDL (-) ApoB-100 epitopes, making them candidates for the immunomodulation of atherogenesis. Therefore, investigating the immunomodulation induced by p2C7 peptide mimetics of LDL (-) as it represents an immunodominant epitope of LDL (-) could open new future therapeutic perspectives for the immunomodulation of atherosclerosis. Objective: To evaluate the immunomodulation promoted by p2C7 in vivo, using C57BL/6 LDLr -/- mice, and human plasma samples. In addition, in the internship (BEPE), held at the Karolinska Institute (December 2019 to March 2021), immunometabolism as a mediator of Cardiovascular Diseases was studied. In part II-A, the results of the initially proposed study are described. In part II-B, the results that were developed later are presented, expanding the scope of the project, approaching the vascular inflammation involved in the abdominal aortic aneurysm through bioinformatics tools. In part II-C, the results of the study of the involvement of the enzyme indoleamine 2,3 dioxygenase (IDO) in non-alcoholic steatohepatitis (NASH) and atherosclerosis in ApoE-/- and ApoE/IDO/double mice are presented -knockout. Methodology: The presence of anti-p2C7 antibodies in human plasma samples with or without Metabolic Syndrome was evaluated. We measured circulating TNF in the same samples and proceeded with linear regressions associating inflammatory parameters with levels of anti-p2C7 antibodies. C57BL/6 LDLr -/- mice were immunized with p2C7 and the adjuvants Alum or Montanide ISA 720, analyzing the antibody titers against p2C7 and LDL (-), the production of cytokines (IL-10, IL-4, IL -2, IL-6, IFNγ, IL-17, TNFα) and antibody-secreting cells. C57BL/6 LDLr -/- mice were tolerized against mimotope peptides with intravenous injections (caudal vein) and challenged with immunization containing LDL (-) + Alum. Antibody titers against p2C7 and LDL (-) and cytokine production (TNF-α, IFNγ, IL-12, IL-6, IL-10 and MCP-1) were evaluated. The mice were kept on a hypercholesterolemic diet for 3 months for atherosclerotic plaque formation. After this period, the mice were euthanized, evaluating the formation of atherosclerotic plaque in the abdominal artery and aortic arch, as well as the production of cytokines (TNF-α, IFNγ, IL-12, IL-6, IL-10 and MCP -1). C57BL/6 LDLr -/- mice were immunized with OVA-p2C7 and, after a 3-month hypercholesterolemic diet for atherosclerotic plaque formation, inflammatory parameters were evaluated and 18F-FDG uptake was evaluated by PET/CT. Results: Immunization with p2C7 (free) was not able to induce a humoral response, with no detectable titers of antibodies reactive to p2C7 or LDL (-) being observed in any immunized mouse, as well as no detectable antibody-secreting cells for the LDL (-). The group immunized with Alum or Montanide + p2C7 had a significant increase in TNF-α production when compared to the other groups. The tolerance protocol was successfully performed, as the tolerized mice had lower antibody titers than controls for the epitope used. Only mice tolerated with p2C7 showed a significant increase in the production of IL-6, IL-12, IL-10, TNF-α, IFNγ and MCP 1 after a hypercholesterolemic diet. Active immunization with OVA-p2C7 was able to reduce TNF production induced by the hypercholesterolemic diet, as well as to reduce 18F-FDG uptake. Conclusion: the p2C7 epitope is highly expressed in LDL (-) of patients with higher cardiovascular risk. Furthermore, active immunization with p2C7 is also a promising tool to prevent and regulate inflammation caused by LDL (-) in the course of atherosclerosis

Avaliação da adequação da conservação de imunobiológicos na macrorregião de saúde Oeste de Minas Gerais: estudo descritivo, 2017 / Evaluación de la adecuación de la conservación de inmunobiológicos en la macrorregión de salud Oeste de Minas Gerais, Brasil: estudio descriptivo, 2017 / Adequacy assessment of immunobiological agent conservation in the Western Health macro-region of Minas Gerais State, Brazil: a descriptive study, 2017

Objetivo: Descrever a adequação da conservação de imunobiológicos nas salas de imunização dos municípios da macrorregião de saúde Oeste do estado de Minas Gerais, Brasil. Métodos: Estudo descritivo, pautado em uma escala validada, com escore máximo de 15 pontos. Realizou-se análise descritiva e teste de associação entre os escores obtidos pelos municípios e variáveis do contexto externo. Resultados: Foram avaliadas 275 do total de 295 salas de imunização existentes. A conservação de imunobiológicos na macrorregião Oeste obteve um escore médio de 4 pontos (escore-padrão de 0 a 15). Evidenciou-se ausência ou carência de insumos destinados à conservação de imunobiológicos, e processos de trabalho que requerem aprimoramento. Municípios de pequeno porte apresentaram melhor conservação de imunobiológicos (p=0,011). Conclusão: A conservação de imunobiológicos nas salas de imunização da macrorregião de saúde Oeste de Minas Gerais foi considerada inadequada.

Objetivo: Describir la adecuación de la conservación de inmunobiológicos en las salas de inmunización de la macrorregión Oeste de Minas Gerais, Brasil. Métodos: Estudio descriptivo a partir de una escala validada con una puntuación máxima de 15 puntos. Se realizaron análisis descriptivos y pruebas de asociación entre las puntuaciones obtenidas por los municipios y las variables del contexto externo. Resultados: Se evaluaron 275 de un total de 295 salas de vacunación. La conservación de los inmunobiológicos en la macrorregión Oeste obtuvo una puntuación promedio de 4 puntos (4/15). Se evidenció la ausencia o falta de insumos para la conservación de inmunobiológicos y procesos de trabajo que requieren ser mejorados. Los municipios pequeños presentaron una mejor conservación de los inmunobiológicos (p=0,011). Conclusión: La conservación inmunobiológica en las salas de vacunación de la macrorregión Oeste de Minas Gerais fue considerada inadecuada.

Objective: To describe the adequacy of immunobiological agent conservation in vaccination rooms in the municipalities of the Western health macro-region of the state of Minas Gerais, Brazil. Methods: This was a descriptive study, based on a validated scale, with a maximum score of 15 points. A descriptive analysis and an association test between the scores obtained by the municipalities and variables of the external context were performed. Results: 275 out of a total of 295 existing vaccination rooms were evaluated. Immunobiological agent conservation in the West macro-region obtained an average score of 4 points (standard score, 0 to 15). There was a poor availability of immunization supplies aimed at immunobiological agent conservation, and work processes, that require improvement. Small municipalities presented better immunobiological agent conservation (p=0.011). Conclusion: Immunobiological agent conservation in vaccination rooms in the Western health macro-region of Minas Gerais State was considered inadequate.

Estrategias de inmunización en niños VIH positivos / Immunizing HIV-infected children after immune reconstitution with antiretroviral therapy

Introducción: La inmunización de los niños VIH positivos es un campo de rápida evolución ya que la terapia antirretroviral(TAR) se encuentra más fácilmente disponible en los países en vías de desarrollo. Se ha descrito adecuadamente que los pacientes infectados por el VIH presentan respuestas inmunogénicas subóptimas frente a las vacunas pediátricas de rutina. Métodos: Este artículo es una revisión de la bibliografía publicada en los últimos 10 años acerca de la inmunización de los niños que reciben TAR, con énfasis específico en las reinmunizaciones. Resultados y discusión: La revacunación es claramente necesaria, pero no se han establecido con claridad los métodos óptimos. Existen también dos grupos diferentes de niños a considerar: los que iniciaron la TAR durante la primera infancia, cuando se administran las primeras series de vacunas, y aquellos que inician la TAR después del primer año de vida. Las investigaciones recientes sugieren que el inicio temprano de la TAR durante la infancia preserva la función de los linfocitos B y la memoria de la respuesta a las vacunas, lo que resulta en protección prolongada. No se definió la necesidad de las dosis de refuerzo después de la inmunización primaria en estos niños. Aquellos que iniciaron la TAR después del primer año de vida requieren repetir las series de vacunas iniciales o múltiples dosis de refuerzo debido a deficiencias inmunitarias funcionales. Conclusiones: La reinmunización dirigida sobre la base de la cuantificación de los títulos de anticuerpos, de los análisis de la proliferación de linfocitos, o ambos, no es posible en países con recursos limitados. En estos contextos, deberían proponerse normativas de reinmunización de rutina sin una pesquisa de laboratorio previa.

Knowledge of health workers at a Riyadh hospital of health care waste management

Healthcare activities such as immunizations, diagnostic tests, medical treatments, and laboratory examinations are inevitably followed by the generation of Health Care Waste [HCW]. The management of HCW poses a major and ongoing problem in most countries, including the Kingdom of Saudi Arabia. Adequate knowledge of health care workers of the steps of waste management is crucial for the success of any HCW management program. This study investigates the knowledge of health workers at a Riyadh hospital of the types of waste and steps of HCW management. This was implemented through a descriptive cross-sectional study among health care workers at the hospital. Data was collected by means of a pre-prepared questionnaire, inquiring on basic demographic data and the knowledge of health workers of the types of HCW, their segregation, storage, and transport inside and outside the hospital, and whether the participant had received previous training on HCW management The questionnaire included 44 knowledge questions, a correct answer was given a score of 1 and an incorrect answer 0. A composite score based on these 44 questions was developed and used for further analysis. In the absence of any standard criteria of scoring for such knowledge questions, the median of the composite score was used as a cut off point to split the workers into two categories: high knowledge group and low knowledge group. Data was collected during July 2004, then entered and analyzed using SPSS version 10 software. The study population was 321 health workers. Their mean age was 35.7 years [SD +/- 8.6], the highest age group between 30-40 years old [41.7%]. There were 216 [70.3%] females, and 91 [29.6%] males; 66 [22.8%] Saudis and 223 [77.2%] non-Saudis; 73 [23.4%] doctors and 239 [76.6%] nurses. The highest percentage were working in the Medicine department 118 [44.7%], followed by the Surgery department 64 [24.2%], Emergency Room 13 [4.9%], and other departments 69 [26.1%]. Knowledge of health workers about the classification of each type of waste material is shown in table 1. Regarding waste segregation, correct responses were: HCW is segregated at the source of generation 72.9%, medical staff are responsible for waste segregation at its generation site 75.9%, sharp waste should be segregated in special containers 98.1%, color coded bags are used for segregation 96.8%, and liquid medical waste should not be disposed-of with domestic waste 91.7%. Regarding the color of bag used for segregation of each type of waste, 91.3% knew that yellow bags should be used for infectious waste, red bags for pathological waste 80.4%, and black bags for non-risk waste 83.8%. Regarding collection of HCW, only 22.9% knew that bags should not be closed by stapling before transport, waste should be collected from the generation site at least once daily 83.2%, and black and yellow bags should not be collected at the same time 79.4%. Regarding transport of HCW inside the hospital, 74.5% knew that color-coded bags should be used for transport of HCW inside the hospital. Only 3.2% knew that certain allocated workers should be responsible for transport of HCW inside the hospital. However, 84.3% of the study participants did not know which personnel are responsible; 54.7% didn't know by what means HCW are transported inside the hospital; and only 37.2% knew that designated trolleys should be used for that purpose. However, most workers [91.5%] knew that yellow bags should not be carried with black bags in the same trolleys inside the hospital. Regarding correct knowledge of storage of HCW inside the hospital, only 67.9% knew that there should be designated central storage points; 81.6% knew that bags containing waste should not be compressed at the storage point, 91.7% knew that cytotoxic waste should be separated from other types of HCW, and 74.9% knew that yellow and black bags should not be kept together at the storage point. Regarding transport of HCW, only 68.6% knew that it should be transported away from the hospital by special trucks. The most important cited health consequences of improper HCW management or accident were Hepatitis B [97.8%], Hepatitis C [97.5%], and Acquired Immunodeficiency Syndrome [96%]. Of the total study population, only 23.5% had received previous training on HCW management. Based on the knowledge questions, the median score of knowledge based on the composite score was 31. This was used to divide health workers into two groups; low knowledge group [below 31], and high knowledge group [31 and above]. The low knowledge group included 139 [43.3%], and the high knowledge group included 182 [56.7%]. On examining the association between knowledge and other related variables, the proportion of high knowledge was greater among females, nurses, non-Saudis, and those with previous training

Inmunoprofilaxia de la amibiasis / Inmunoprophilaxis of the amoebiaisis

La amibiasis es la infección producida por el protozoario parásito Entamoeba histolytica. A pesar de que el término amibiasis incluye a todos los casos humanos de infección producidos por este microorganismo, sólo una parte de los individuos infectados presentan síntomas imputables a la penetración de las amibas en los tejidos. A esta entidad nosológica se le conoce como amibiasis invasora y al grupo de personas infectadas asintomáticamente se les denomina portadores de E. histolytica y presentan amibiasis luminal. Los estudios sobre inmunidad protectora antiamibiana se encuentran todavía en etapa experimental; sin embargo, en animales de laboratorio los resultados obtenidos han sido en general satisfactorios. Los primeros intentos de inducción de protección antiamibiana, llevados a cabo por diferentes grupos, tuvieron éxito en general. Sin embargo, hay una gran falta de homogeneridad en las condiciones utilizadas por cada grupo de investigadores, y principalmente han consistido en el uso de diferentes dosis de antígenos, en los métodos de caracterización de las cepas amibianas utilizadas, las cantidades de inóculo administradas, las vías de inmunización y los modelos animales en que se aplicaron

Inmunoprofilaxis y turismo / Immunoprophylaxis and tourism

La información o recomendaciones en torno a inmunizaciones para viajeros internacionales debe fundamentarse en el reglamento Sanitario Internacional y el conocimiento sobre la situación epidemiológica más reciente del país o países que serán visitados. Esta información deberá ser conocida por los médicos, autoridades sanitarias, agencias de turismo y otras personas encargadas de advertir a los turistas, quienes además de asegurar que el viajero cuente con las inmunizaciones básicas y que su esquema esté actualizado, deberán recomendarle la inmunización contra otras enfermedades según las condiciones locales en los países que va a visitar. Se señalan las enfermedades sujetas al Reglamento Sanitario Internacional (fiebre amarilla, cólera y peste); las enfermedades inmunoprevenibles objeto de vigilancia epidemiológica internacional y las vacunas fuera de Programa Nacional de Inmunizaciones

Inmunización contra la caries / Inmunization against caries

Hay dos grandes líneas de pensamiento sobre la etiología de la caries dental. Mientras que algunos afirman que se debe a un desequilibrio de la microflora bucal normal, como consecuencia de un alto consumo de carbohidratos, la mayoría de los investigadores dentales coincide en que la caries es una enfermedad infecciosa y transmisible. El Streptococus mutans (caries) coloniza la cavidad bucal del ser humano sólo después de la erupción dentaria, pues para crecer requieren de superficies duras. Su identificación por la tipificación de sus bacteriocinas y plásmidos señala que en el ser humano, la madre es el reservorio primario de la infección y el contagio ocurre si su saliva, o la de otro individuo con caries, llega a la boca del infante. Existen dos estrategias globales para el desarrollo de vacunas contra la caries. Dos grupos de investigadores británicos exploran la inmunización por vía subcutánea, mientras que las vacunas administrables por vía entérica están bajo estudio en cuatro laboratorios de los Estados Unidos, además grupos suecos, franceses y japoneses participan en la búsqueda de una vacuna eficaz; se anotan los avances en cuanto a la inmunización parenteral, inmunización gingival, inmunización pasiva local, vacunas entéricas y presentación de antígenos como partículas y uso de adyuvantes

Cadena de frio del Programa Ampliado de Inmunización: una experiencia de evaluación / The cold chain in the Expanded Immunization Program: an evaluation experience

En el Programa Ampliado de Inmunización, el proceso de conservacion, manejo y distribución de las vacunas en los niveles central, regional y local, se lleva a cabo mediante la denominada cadena de frio, con el proposito de que lleguen al usuario bien conservadas y con su poder inmunologico intacto. Sin embargo, a pesar de las altas coberturas obtenidas, se han registrado brotes epidemicos y hay marcados indicios de que tal situación podria relacionarse en forma estrecha con el funcionamiento de la cadena