Identificação de epítopos de célula B na glicoproteína-E do envelope do vírus dengue sorotipo 3 / Identification of B-cell epitopes in the envelope glycoprotein of dengue virus type 3

As infecções pelo vírus dengue têm se tornado um problema crescente de Saúde Pública em regiões tropicais e subtropicais do mundo. O vírus pertence à família Flaviviridae com quatro sorotipos antigenicamente distintos (DENV-1 a DENV-4). Uma possível estratégia para evitar a patogenia associada com uma vacina para o dengue (que deve ser tetravalente), seria a construção de uma vacina quimérica composta de epítopos críticos selecionados dos quatro sorotipos. A maioria dos epítopos envolvidos na neutralização do vírus está presente na glicoproteína E do envelope, que é a maior proteína de superfície da partícula viral. O objetivo deste trabalho foi identificar epítopos de célula B na glicoproteína E do vírus dengue sorotipo 3. Para o mapeamento de epítopos imunodominantes, noventa e cinco peptídeos (15-mers cada, sobreposição de 10) foram sintetizados (Synpep, California-USA), a partir da sequência de 490 aminoácidos da glicoproteína E do envelope do DENV-3, de cepa circulante no Brasil. Estes peptídeos foram testados por ELISA contra um pool de soros de pacientes positivos e negativos para dengue, coletados durante a fase de convalescença da infecção por DENV-3. Os resultados mostraram que os soros de humanos reagiram com onze, dos noventa e cinco peptídeos testados, distribuídos em 5 regiões com aminoácidos na posições 51-65 (peptídeo 11), 71-90 (peptídeos 15 e 16), 131-170 (peptídeos 27, 28, 29, 30, 31 e 32), 196-210 (peptídeo 40) e 246-260 (peptídeo 50). A análise da curva ROC mostrou que, dentre os peptídeos identificados, nove seriam capazes de diferenciar entre pacientes com DENV-3 de pacientes não-dengue e três capazes de diferenciar a infecção por DENV-3 daquelas por outros sorotipos virais (DENV-1 e DENV-2). Os epítopos imunodominantes aqui descritos, junto com outros epítopos bem documentados, são potencialmente relevantes para o desenho de uma vacina para o vírus dengue e para o desenvolvimento de kits de diagnóstico específicos.

Antigenic analysis of dengue virus using monoclonal antibodies.

Dengue viruses are classified as a separate antigenic group within the Flaviviridae on the basis of cross-reactivity in neutralization assays employing polyclonal sera. Additional serological relationships defining group, complex and type specificity between members of the various antigenic groups have also been identified with polyclonal sera in analyses using hemagglutination inhibition (HI) and complement fixation (CF) tests. With the advent of monoclonal antibodies, however, this picture has become far more complex. While the basic framework of serological relationships has been confirmed, a large number of additional cross-reactivities have been identified that suggest a much greater degree of antigenic diversity and/or relatedness than previously imagined. Monoclonal antibodies have not only been used to dissect the antigenic relatedness between flaviviruses but also in studies aimed at defining epitopes on viral proteins involved in a range of biological activities from protection to antibody-dependent enhancement (ADE) of infection. Of the ten proteins encoded by the dengue virus genome, monoclonal antibodies have been raised to six, including each of the structural proteins (C, prM, E) and three of the non-structural proteins (NS1, NS3, NS5). These antibodies have been applied to the construction of functional maps and in particular to the definition of antigenic determinants involved in protection.