Avaliação das técnicas de imunodifusão em gel de ágar, ensaio imunoenzimático indireto e reação em cadeia da polimerase no diagnóstico da brucelose ovina / Evaluation of technical, immunodiffusion agar gel, enzyme-linked immunosorbent assay and polymerase chain reaction in the diagnosis of ovine brucellosis

A brucelose na espécie ovina tem recebido destaque, uma vez que se trata de uma enfermidade que acomete o sistema reprodutivo dos animais, provocando sério comprometimento no setor produtivo. Dessa forma, objetivou-se a avaliação de três métodos para o diagnóstico da brucelose ovina: o ensaio imunoenzimático indireto (ELISAi), a técnica imunodifusão em gel de ágar (IDGA) e a reação em cadeia da polimerase (PCR). Para tanto, utilizaram-se 211 amostras de sangue de ovinos oriundos de propriedades de nove municípios da microrregião homogênea de Teresina, Piauí. As 211 amostras de sangue foram submetidas aos testes sorológicos e à PCR, visando detectar anticorpos anti-B. ovis e DNA de Brucella ovis, respectivamente. Foram obtidos resultados positivos nos testes sorológicos, sendo 36 (17,06%) positivos no teste IDGA e sete (3,31%) positivos no teste ELISAi, contudo não houve resultados positivos na técnica de PCR. Dos métodos de diagnóstico utilizados neste estudo, o teste IDGA foi o que apresentou melhor desempenho na detecção de animais reagentes, quando comparado ao teste ELISAi e à PCR em amostras de sangue, e o percentual de animais soropositivos sugere uma ampla distribuição de ovinos infectados por Brucella ovis na região em estudo, o que pode causar prejuízos aos produtores.(AU)

Brucellosis in sheep has received a major focus, since it is a disease that affects the reproductive system of animals, causing serious impairment in the productive sector. Thus, three methods for the diagnosis of ovine brucellosis were evaluated as goal, the indirect Linked Immunosorbent Assay (ELISAi) test, the Immunodiffusion Agar Gel (AGID) technique and the Polymerase Chain Reaction (PCR). Therefore, we used 211 sheep blood samples from properties of nine municipalities of the homogeneous micro-region of Teresina, Piaui. The 211 blood samples were subjected to serologic testing and PCR to detect anti-B. ovis antibodies, and Brucella ovis DNA, respectively. Positive results in serological tests were obtained, 36 (17%) positive in the AGID test and seven (3.3%) positive to the ELISAi test, however, there were no positive results in the PCR technique. Of the diagnostic methods used in this study, the AGID test was the one that presented the best performance in the detection of reactive animals, when compared to ELISAi and PCR in blood samples and, the percentage of seropositive animals suggests a wide distribution of Brucella ovis infected sheep in the study region and could cause loss to producers.(AU)

Evaluation of conventional & serological methods for rapid diagnosis of cryptococcosis.

BACKGROUND & OBJECTIVE: Cryptococcosis is a chronic infective condition affecting the central nervous system. Unless diagnosed early and specific treatment instituted it can be fatal. There is an urgent need for a rapid and specific diagnostic tool for better management of the patients. Conventional methods such as culture and India ink are specific but cumbersome and time consuming. Serological methods of detection are rapid but have problems of false positivity and cross-reactivity with other micro-organisms. We carried out this study to compare and evaluate the conventional methods with serological methods of detection of cryptococcal meningitis. METHODS: A comparative evaluation of conventional methods (India ink and culture) with LAT (latex agglutination test) and EIA (enzyme immunoassay) was done in 127 CSF samples using culture and EIA as reference separately. RESULTS: India ink was positive for Cryptococcus in 72.4 per cent of the samples; 56 per cent were culture positive; LAT positive were 85 per cent and 79.5 per cent were positive by EIA. When culture was positive, all other tests were in agreement to it. However, when culture was negative there was significant difference between the pair of discordance of various diagnostic tests. Culture was 83.46 per cent in agreement to India ink, 76.3 per cent to EIA and 70.8 per cent to LAT. EIA was 92.9 per cent in agreement to India ink and LAT; 6.3 per cent showed false positive by LAT. INTERPRETATION & CONCLUSION: EIA is valuable in establishing diagnosis when culture is negative for cryptococcosis. EIA is more specific and has potential advantages over LAT as it gives clear discrimination of positive from negative results. Thus, EIA may be used as a simple, rapid, and reliable serological test for early detection of cryptococcal antigen in clinical samples like CSF in routine laboratories.

El diagnóstico serológico de la hidatidosis humana con ELISA y hemaglutinación indirecta / Serologic diagnosis of human hydatidosis

El diagnóstico serológico de la hidatidosis humana es fundamental ya que su detección temprana posibilita el éxito de la quimioterapia. El objetivo de este trabajo fue demostrar la validez del ELISA y la importancia de su asociación con la determinación del antígeno circulante. Se estudiaron 870 muestras por los métodos: HAI y ELISA para dosaje de anticuerpos (EAc) y antígeno circulante mediante un ELISA de captura (EAg). De los 870 sujetos estudiados 144 tenían hidatidosis. De los 144 sujetos con hidatidosis, veintiséis correspondían a sujetos operados en el período 1990-1993 observándose una buena correspondencia entre los resultados obtenidos por la HAI y el EAc. El resto (118) corresponden a sujetos con diagnóstico prequirúrgico por imágenes y sus resultados muestran que el EAc permitió detectar mayor número de portadores de quistes pulmonares (veintitrés) que la HAI (catorce), significando una mayor sensibilidad diagnóstica (Chi cuadrado: 9,8). La sensibilidad de estos métodos fue de 83 por ciento para la HAI y 91 por ciento para el EAc. Fueron detectados cuatro falsos negativos por EAc mediante el EAg lográndose as161 una sensibilidad del 95 por ciento al asociar ambos métodos. También mediante el EAg se logró detectar recidivas y no se observó influencia del tamaño de los quistes en la reactividad

Evaluation of Leishmania antigens preparation and storage for use in enzyme immunoassays

The influence of time and temperature on the storage of an alkaline antigen of L. major-like and L.(V.) braziliensis promastigotes added or not of a proteases inhibitor (PMSF) was evaluated by means of an IgG-ELISA. Antibodies in assays using L. major-like antigen stored at -20 degrees C for 6 months had a statistically lower geometric mean titer (GMT) and different 95% confidence interval limits (CL) than antigens stored otherwise, as assessed by the [quot ]t[quot ] statistic. The PMSFL. major-like antigen after storage for 6 months at a temperature of 4 degrees C had the same GMT and 95% CL displayed at time zero as well as when storage for 4 and 6 months at -20 degrees C. Significant differences were not found when L.(V.) braziliensis antigens were stored at times and temperatures mentioned; the PMSF antigen stored for 2 months at -70 degrees C resulted in a lower serum GMT and 95% CL than any other, as assessed by the [quot ]t[quot ] statistic. Antigen performance did not show any statistical difference associated to the addition of PMSF within the same species; the largest difference between antigens was that between PMSF-L. (V.) braziliensis and L. major-like without PMSF.

A influência do tempo e temperatura de estocagem de antígenos alcalinos de promastigotas de L. major-like e L. (V.) braziliensis adicionados ou não de um inibidor de proteases foi avaliada por meio de reações de IgG-ELISA. A reação que empregava o antígeno de L. major-like estocado por 6 meses a -20oC mostrou que médias geométricas dos títulos (MGT)e intervalos de confiança 95% (IC 95%) eram estatisticamente inferiores àquelas obtidas com antígenos estocados em outros intervalos de tempo, medido pela estatística "t". O antígeno PMSF-L. major-like depois de 6 meses de estocagem à temperatura de 4oC tinha a mesma MGT e IC 95% do tempo zero assim como quando ele foi estocado a -20oC por 4 e 6 meses. Não foram observadas diferenças estatisticamente diferentes com os antígenos de L. (V.) braziliensis estocados nas mesmas condições de tempo e temperatura exceto o antígeno PMSF estocado por 2 meses a -70oC que apresentou MGT e IC 95% inferiores a quaisquer outras como aferido pela estatísitca "t". Quando comparados os desempenhos dos antígenos não houve direrenças estatisticamente significantes entre a adição ou não de PMSF para qualquer dos parasitas. A análise do cruzamento entre antígenos mostrou que a maior diferença netre eles foi a do contraste entre L. (V.) braziliensis adicionado de PMSF e L. major-like sem adição de PMSF.

Estandarización de una técnica de enzimoinmunoensayo para el diagnóstico de la hidatidosis humana / Standardization of enzimoimmunoassay for human hydatidosis

Una de las actividades que realizan los programas de control de hidatidosis causada por Echinococcus granulosus es la búsqueda de portadores asintomáticos de quistes hidatídicos en la población general, que habita en las zonas de riesgo. Se propone un método inmunoenzimático sensibilizando las placas con antígeno de líquido hidatídico total (EIE-ALHT), siguiendo la técnica descrita en el trabajo. El "valor de corte" del EIE-ALHT para posibles portadores de quistes hidatídicos fue una densidad óptica mayor que X + 4 DS, donde el número de desviaciones estándares fue denominado i (i = 4). Se comparó EIE-ALHT con HAI y DD5. La Sensibilidad fue 94 por ciento vs. 88 por ciento y 44 por ciento; la Especificidad, 100 por ciento vs. 95 por ciento y 100 por ciento; el Valor Predictivo de un Resultado Negativo, 99 por ciento vs. 98 por ciento y 31 por ciento; la Eficiencia 99 por ciento vs. 94 por ciento y 55 por ciento, respectivamente. No se obtuvieron resultados reactivos en pruebas cruzadas con cisticercosis, sífilis, tuberculosis, artritis, reumatoidea y lupus eritematoso. El método resultó de bajo costo, práctico y sencillo y adaptable para estudios de detección de la hidatidosis en población general

Use of milk progesterone radioimmuno assay and enzyme-immunoassay in the diagnosis of pregnancy in buffaloes

In view of comparing between milk progesterone radioimmunoassay and enzyme immunoassay for diagnosis of pregnancy in buffalos, 140 whole milk samples were collected from 20 cows on days 18th, 19th, 20th, 21st, 22nd, 23rd and 24th after mating. The milk samples were analyzed for progesterone with RIA and EIA. Applicability, reliability and the values of progesterone measured by both methods were compared. This study indicated that days 20th, 21st or 22nd is the most reliable for performing this analysis for pregnancy diagnosis in buffalos