ABSTRACT
O desenvolvimento completo de Trypanosoma cruzi no hospedeiro invertebrado depende de muitos fatores, dentre os quais as respostas imunes, como a produção de espécies reativas de nitrogênio, e o crescimento de bactérias no trato intestinal dos insetos, são os principais. Assim, investigamos os efeitos de espécies reativas de nitrogênio no inseto vetor, Rhodnius prolixus, sobre a infecção por T. cruzi, a microbiota bacteriana intestinal e sinalização de outras respostas imunes no inseto. Para isto, tratamos ninfas de quinto estádio de R. prolixus com L-arginina, o substrato para a produção de espécies reativas de nitrogênio, e L-NAME, o composto análogo que inibe a ação da óxido nítrico sintase. Ambos os compostos foram administrados oralmente por alimentação e por inoculação na hemocele dos insetos. Os efeitos dos tratamentos sobre as diferentes respostas imunológicas em diferentes tecidos de insetos infectados ou não com T. cruzi Dm28c e efeito sobre a quantidade de bactérias cultiváveis da microbiota intestinam foram analisados L-arginina aumentou a produção de óxido nítrico, reduziu a quantidade de parasitas, aumentou a quantidade de bactérias e diminuiu a atividade antibacteriana contra Serratia marcescens no trato digestivo dos insetos tratados por via oral. A inoculação da droga na hemocele, diminuiu a expressão do gene da óxido nítrico sintase induzível um dia após a aplicação e aumentou a expressão do peptídeo antimicrobiano, defensina C no intestino um dia após a inoculação. No entanto, o tratamento oral com a L-NAME, resultou em menor produção de óxido nítrico na hemolinfa, um aumento do número de parasitas e redução de atividade fenoloxidase no trato digestivo dos insetos. Após a inoculação de L-NAME, observou-se uma menor expressão de sintase de óxido nítrico e aumento da expressão de defensina C na gordura corporal...
The whole development of Trypanosoma cruzi in the invertebrate host depends on many factors, from which the immune responses such as the production of reactive nitrogen species and the growth of bacteria found in the intestinal tract of the insects are the principal. Thus, we investigated the effects of reactive nitrogen species in the insect vector, Rhodnius prolixus, on the infection of T. cruzi, the intestinal bacterial microbiota and signaling of other insect immune responses. Therefore, we treated fifth stage nymphs of R. prolixus with L-arginine, the substrate for production of reactive nitrogen species and L-NAME, the analogue compound that inhibits the action of nitric oxide synthase. Both compounds were given orally by feeding and by inoculation in the hemocele of the insects. The effects of treatments on different immune responses in different tissues of insects or not with T. cruzi Dm28c and effect on the amount of cultivable bacteria of the intestinal microbiota were analyzed L-arginine increased nitric oxide production, reduced the amount of parasites, increased the amount of bacteria and decreased the antibacterial activity against Serratia marcescens in the digestive tract of the insects orally treated. The inoculation of the drug in the hemocele, decreased the gene expression of inducible nitric oxide synthase one day after application and increased the expression of the antimicrobial peptide, defensing C in the intestine one day after inoculation. However, the oral treatment with L-NAME, resulted in lower production of nitric oxide in the hemolymph, and increase of the parasite number and reduction of phenoloxidase activity in the digestive tract of the insects. After the inoculation of L-NAME, we observed a lower expression of the nitric oxide synthase and increased expression of defensing C in the fat body...
Subject(s)
Humans , Rhodnius , Trypanosoma cruzi , Insecta/immunology , Chagas Disease , MicrobiotaABSTRACT
Os flebotomíneos são conhecidos pela transmissão da leishmaniose, porém transmitem também doenças ligadas a bactérias e vírus. Além disso, estes insetos entram em contato com diversos patógenos como fungos e helmintos. As defesas contra patógenos em flebotomíneos são quase totalmente desconhecidas. A principal via de infecção se dá pela alimentação sangüínea, sendo o intestino o primeiro órgão da resposta imune. Baseado nisso, o transcriptoma deste tecido foi analisado. Foram seqüenciados ESTs de 3 bibliotecas de cDNA, construídas a partir de tubos digestivos de fêmeas dissecadas 6 (6h) ou 72 horas (72h) após alimentação sangüínea e após 72 horas de infecção com Leishmania chagasi (Inf). Dentre os genes encontrados vários são ligados ao processo de digestão e de defesa. A comparação entre as bibliotecas mostra aumento na quantidade de transcritos ligados à defesa em Inf (ex. defensina, serpina, PGRP) e a digestão em 6h (ex. tripsinas, V-ATPases e Kazal). Foram identificadas anteriormente duas formas de tripsina: Lltryp1, expressa entre 2 e 48 horas após a alimentação sangüínea e Lltryp2, constitutiva, porém regulada negativamente durante a digestão. Lltryp1 é ausente no desenvolvimento e Lltryp2 é expressa principalmente a partir do estágio larval L3. V-ATPase também é modulada pela alimentação sangüínea. Após alimentação sua expressão aumenta até 48 horas decaindo após 72 horas e nas fases do desenvolvimento é crescente atingindo o máximo em pupa e machos. Dentre os transcritos envolvidos em defesa, um gene de defensina foi caracterizado. Aparentemente a defensina é modulada pela digestão sangüínea, com expressão aumentada nas primeiras horas e decaindo após 72 horas, não sendo detectada nas fases larvais iniciais. Na tentativa de silenciar genes relacionados à imunidade em células de L. longipalpis (LL5) utilizando o mecanismo de RNAi, foi identificado uma resposta antiviral inespecífica. A replicação de partículas virais do vírus do oeste do...