Marcadores fenotípicos de atenuación en cepas de virus Junín recuperadas de individuos vacunados con la cepa Junín Candid#1 / Phenotypic markers of attenuation in Junin virus strains recently isolated from individuals vaccinated with Junin Candid#1 strain

La Fiebre Hemorrágica Argentina es una enfermedad producida por el virus Junín. Para la prevención de esta enfermedad se obtuvo una vacuna efectiva denominada Candid#1. Durante un ensayo clínico realizado en el INEVH, dos cepas de virus Junín fueron aisladas de sangre periférica de dos voluntarios mediante co-cultivo de células mononucleares. El objetivo de este trabajo fue comparar las características fenotípicas de atenuación de esas dos cepas recuperadas de humanos con las de la vacuna Candid#1 utilizando los indicadores de atenuación desarrollados por Contigiani y Sabattini en 1977. A tal fin se midieron los índices de letalidad, infección y protección en cobayos y ratones de diferentes edades. Las tres cepas investigadas resultaron letales para ratones recién nacidos pero no para ratones de 10 a 12 días, ratones adultos ni cobayos, aun a la más baja dilución inoculada. Los cobayos inoculados con las cepas recuperadas de humanos y con la cepa Candid#1 no presentaron síntomas de enfermedad y mostraron estar protegidos cuando fueron desafiados con una cepa patógena. Los índices de infección y de protección hallados indican que estas cepas poseen elevada capacidad infectante y protectora en las especies animales aquí estudiadas. Estos resultados demuestran que las cepas de virus Junín aisladas de voluntarios inmunizados con Candid#1 mantienen el mismo fenotipo atenuado de la vacuna Candid#1 después de un pasaje por humanos.

Argentine hemorrhagic fever is a severe acute disease caused by Junin virus. For prevention of this disease an effective vaccine called Candid#1 has been developed, composed of a live attenuated Junin virus strain. During a clinical trial conducted at Instituto Nacional de Enfermedades Virales Humanas (INEVH) in 2005, Junin virus was isolated from two vaccinated volunteers by co-culture of peripheral mononuclear blood cells. The aim of this study was to compare the strains isolated from these human volunteers with Candid#1 strain regarding phenotypic characteristics of attenuation according to the indicators developed by Contigiani and Sabattini in 1977. The three strains were lethal to suckling mice but not to 10-12 days old mice and guinea pigs. Surviving guinea pigs from primary infection were protected when challenged by intra-muscular inoculation with lethal doses of a virulent strain. Infection and protection rates indicate that these strains are highly infective and protective in the hosts studied herein. These results demonstrate that Junin virus strains isolated from volunteers immunized with Candid#1 maintain the same attenuated phenotype of Candid#1 vaccine after one passage in humans.

Vacuna contra la fiebre hemorrágica argentina Candid#1 producida en la Argentina: Inmunogenicidad y seguridad / Candid#1 vaccine against Argentine Hemorrhagic Fever produced in Argentina: Immunogenicity and safety

Se realizó un estudio clínico en 946 voluntarios humanos sanos, donde se comparó la vacuna Candid#1 producida en Argentina con la elaborada en EE.UU., que había sido utilizada en estudios previos. Como objetivo primario se evaluó la equivalencia en la eficacia utilizando como marcador subrogante a la inmunogenicidad medida por detección de anticuerpos neutralizantes. Como objetivo secundario se evaluó la equivalencia en inocuidad comparando las tasas de reacciones adversas. Ambas vacunas mostraron una tasa equivalente de inmunogenicidad ligeramente superior al 95.5%, que es la eficacia estimada para Candid #1 en estudios previos. No se observaron eventos adversos graves relacionados con la vacuna. Los eventos adversos generales considerados relacionados fueron de escasa significación clínica y de resolución espontánea o con tratamiento sintomático; se presentaron en los receptores de ambas vacunas en tasas equivalentes (29.9% para la vacuna fabricada en la Argentina y 35.0% para la fabricada en EE.UU.), e incluyeron: cefalea, decaimiento, mialgias, plaquetopenia leve (< 150 000 plaquetas/mm³), náuseas y/o vómitos, leucopenia leve (< 4 000 blancos/mm³), fiebre, dolor retroocular, mareos, microhematuria, lumbalgia y exantema. Estos resultados indican que la vacuna Candid #1 elaborada en la Argentina es equivalente a la elaborada en los EE.UU. Este estudio permitió el registro del biológico producido en la Argentina ante la autoridad regulatoria del país (ANMAT).

A clinical study in 946 human volunteers was done to compare Candid #1 vaccine manufactured in Argentina with the vaccine produced in USA that had been previously used. The efficacy was evaluated using immunogenicity measured by the detection of neutralizing antibodies as a subrogate marker. Safety was evaluated comparing the rate of adverse events. Both vaccines showed a comparable rate of seroconversion, slighty higher than the efficacy estimated from previous studies (95.5%). There were no severe adverse events related to the vaccines. The general events considered related to the vaccines were not clinically relevant and disappeared either spontaneously or with symptomatic treatment. Similar rates of adverse events (29.9% for the Argentine vaccine and 35.0% for the USA vaccine) were found for both vaccines. These included: headache, weakness, myalgias, mild low blood cell (< 4 000/mm³) and platelet (< 150 000/mm³) counts, nausea and/or vomiting, fever, retroocular pain, dizziness, microhematuria, low backache and exantema. These results indicate that the vaccine Candid#1 manufactured in Argentina is equivalent to the manufactured in USA. These results allowed the National Institute of Human Viral Diseases (INEVH) to register the vaccine produced locally under the National Regulatory Authority (ANMAT).

Standardization of an ELISA test using a recombinant nucleoprotein from the Junin virus as the antigen and serological screening for arenavirus among the population of Nova Xavantina, State of Mato Grosso / Padronização de um teste de ELISA utilizando a nucleoproteína recombinante de vírus Junin como antígeno e triagem sorológica para Arenavírus na população de Nova Xavantina, Estado do Mato Grosso

INTRODUCTION: Arenavirus hemorrhagic fever is a severe emerging disease. METHODS: Considering that the levels of antibodies against arenavirus in the Brazilian population are completely unknown, we have standardized an ELISA test for detecting IgG antibodies using a recombinant nucleoprotein from the Junin virus as the antigen. This protein was obtained by inserting the gene of the Junin virus nucleoprotein into the genome of Autographa californica nucleopolyhedrovirus, using the Bac-to-Bac baculovirus expression system. This recombinant baculovirus was used to infect S. frugiperda cells (SF9). RESULTS: The infection resulted in synthesis of high concentrations of recombinant protein. This protein was detected on 12.5 percent polyacrylamide gel and by means of Western blot. Using the standardized ELISA test, 343 samples from the population of Nova Xavantina were analyzed. We observed that 1.4 percent of the serum samples (five samples) presented antibody titers against arenavirus. CONCLUSIONS: These results show the population studied may present exposure to arenavirus infection.

INTRODUÇÃO: A febre hemorrágica por Arenavirus é uma severa doença emergente. MÉTODOS: Considerando que os níveis de anticorpos contra Arenavirus na população brasileira é totalmente desconhecido, nos padronizamos um teste de ELISA para detecção de anticorpos IgG usando uma nucleoproteína recombinante do vírus Junin como antígeno. Esta proteína foi obtida pela inserção do gene da nucleoproteína do vírus Junin no genoma do vírus Autographa californica nucleopolyhedrovirus, utilizando o sistema de expressão em Baculovírus, Bac-To-Bac. Este baculovirus recombinante foi utilizado para infecção de células de S. frugiperda (Sf9). RESULTADOS: A infecção resultou na produção de altas concentrações de proteína recombinante. Esta proteína foi detectada em gel de poliacrilamida 12,5 por cento, e em Western blot. Utilizando o teste de ELISA padronizado, foram analizadas 343 amostras provenientes da população de Nova Xavantina. Observamos que 1,4 por cento dos soros (5 amostras) apresentavam títulos de anticorpos contra arenavírus. CONCLUSÕES: Estes resultados sugerem que a população estudada pode estar sendo exposta a infecções por arenavírus.

Ensayo preclinico de la vacuna candid #1 producida en Argentina contra la fiebre hemorragica Argentina / Preclinical assay of candid #1 vaccine against argentine hemorrhagic fever made in Argentina

Se comparó en cobayos la seguridad, inmunogenicidad y eficácia protectora de um lote de vacuna Candid #1 (C#1) fabricada en Estados Unidos de América (EE.UU.) y distintos lotes de la misma vacuna fabricados en Argentina (Arg.). El lote TSI 5-1-92 (EE.UU) y los lotes Exp N3, 7A y 8A (Arg) fueron inoculados (0.5ml, IM) en cobayos de 250400g. Para cada ensayo diez animales recibieron solución fisiológica y sirvieron como control. Todos fueron desafiados con la cepa patógena P23790 de vírus Junin. Se registro: a) temperatura rectal, b) peso corporal , c) presencia de anticuerpos neutralizantes (AcNT) pré y post-vacunación, d) respuesta al desafio . Todos los animales vacunados desarrollaron AcNT anti vírus Junin (rango= 4081920 y sobrevivieron al desafio. En cada grupo control 810 animales murieron (dia 23.3+_ 5.4 post- desaportada y los diferentes lotes de C#1 producidos en Argentina.

Neural spread of Junin virus in intraperitoneally inoculated rats

Una vez establecida la ruta neural como la seguida por el virus Junín (VJ) a partir de su inoculación intradérmica en ratas lactantes, resultaba de interes determinar cuál era la vía adoptada luego de inoculado intraperitonealmente. Desde la 2da semana se evidenció una enfermedad neurológica que a los 30 días post-infección alcanzó un 84 por ciento de mortalidad. En curso de ese período, se efectuaron cosechas de tejidos extraneurales y neurales para la marcación por inmunoperoxidasa del antígenos viral y el examen histopatológico, asi como la titulación de infectividad que también se extendió a sangre. En todas las muestras de tejido en que se detectó virus infectivo, sea por cocultivo o por aislamiento convencional, se logró la marcación del antígeno viral. El VJ estuvo presente en valores mínimos en bazo e hígado desde el día 2 al 5, y en sangre del 5 al 15. En tejidos neurales, el antígeno viral fue inicialmente revelado al día 5, tanto en ganglios raquídeos torácicos como en los segmentos medulares relacionados. A partir del día 7, la positividad se extendió a la médula espinal en toda su extensión; a la vez, ya había evidencias de presencia viral en tronco cerebral, con disfusión al resto de estructuras encefálicas desde el día 10. Pese a la presencia masiva del antígeno viral en neuromas, dichas células no mostraban cambios morfológicos aparentes. Dado que la infección de ganglios raquídeos y de médula espinal invariablemente precedió al acesso viral a encéfalo, y ello ocurrió en forma concomitante a la desaparición del virus en órganos linfo-reticulares y en sangre, la vía neural parece ser la adoptada por el VJ desde cavidad peritoneal hasta sistema nervioso central