Serological survey of leptospirosis, brucellosis, and lentivirus in herds of small ruminants in Recôncavo Baiano, Bahia, Brazil / Inquérito sorológico de leptospirose, brucelose e lentiviroses em rebanhos de pequenos ruminantes no Recôncavo Baiano, Bahia, Brasil

A serological survey was carried out to assess the frequency of leptospirosis, small ruminants lentivirus (SRLV), and brucellosis in small ruminant herds in the Recôncavo Baiano, State of Bahia, Brazil, from February to December 2017. In four goat herds, 125 animals were tested for SRLV and leptospirosis, while in five sheep herds, 378 animals were tested for leptospirosis, brucellosis, and SRLV. Regarding leptospirosis, MAT detected 80% of goats and 15.34% of sheep seroreactive. Reactivity was most frequent to serogroups Autumnalis and Grippotyphosa in goats and sheep, respectively. Regarding SRLV, 8.8% of goats and 0.79% of sheep were reactive. Search for anti-B. ovis antibodies revealed 0.52% reactivity. In sheep, three animals showed simultaneous seroreactivity for SRLV and leptospirosis, while one animal had a serological response for brucellosis and leptospirosis. In goats, simultaneous seroreactivity for SRLV and leptospirosis was observed in only one animal. Leptospirosis was the most frequent of the three infectious diseases in investigated herds.(AU)

Foi realizado um inquérito sorológico para avaliar a frequência de ocorrência de leptospirose, lentiviroses de pequenos ruminantes (LVPR) e brucelose em rebanhos de pequenos ruminantes no Recôncavo Baiano, estado da Bahia, Brasil, no período de fevereiro a dezembro de 2017. Em quatro rebanhos de caprinos, foram testados 125 animais para LVPR e leptospirose, enquanto em cinco rebanhos de ovinos, foram testados 378 animais para leptospirose, brucelose e LVPR. Em relação à leptospirose, 80% das cabras e 15,34% das ovelhas foram sororreativas. Os sorogrupos de Leptospira spp. predominantes foram Autumnalis e Grippotyphosa para caprinos e ovinos, respectivamente. Em relação as LVPR, 8,8% dos caprinos e 0,79% dos ovinos foram reativos. Adicionalmente, a pesquisa de anticorpos Anti-B. ovis revelou 0,52% de ovinos reativos. Em ovinos, três animais apresentaram sororreatividade simultânea para LVPR e leptospirose, enquanto um animal teve resposta sorológica para brucelose e leptospirose. Em caprinos, sororreatividade simultânea para LVPR e leptospirose foi observada em apenas um animal. A leptospirose foi a doença infecciosa mais frequente nos rebanhos investigados.(AU)

Bases para um programa de controle da artrite encefalite caprina em rebanho leiteiro / [Bases for a program of control of caprine arthritis encephalite in dairy flock]

Objetivou-se avaliar um programa de controle da artrite encefalite caprina (AEC), por meio de testes diagnósticos sensíveis, separação de mãe e cria após o parto e medidas de manejo, com o intuito de formar rebanho livre do vírus. Utilizou-se um total de 47 cabritos da raça Saanen, mantidos isoladamente até o resultado dos primeiros testes de reação em cadeia de polimerase nested (PCR nested) e Western Blotting (WB), com base na coleta de sangue no momento do nascimento (M0). No PCR nested, quatro animais foram positivos, no M0, e foram eutanasiados. Posteriormente, os demais 43 cabritos foram submetidos à coleta de sangue aos 60 (M60) e 270 (M270) dias de vida para realização de novos testes de WB e PCR nested, que não detectaram animais positivos. Pode-se afirmar que a metodologia adotada neste estudo foi efetiva no controle da doença, nas fases de aleitamento e pós-aleitamento, e que a combinação do sistema de manejo, a fim de propiciar diminuição de risco de transmissão horizontal, com técnicas de diagnóstico mais apuradas, como o WB e a PCR nested, é relevante para elaboração de plano estratégico de controle da enfermidade.(AU)

We aimed to evaluate a program to control Caprine Arthritis Encephalitis (CAE), using diagnostic tests, separation of the mother and postpartum and other management measures, in order to form a free flock of the virus. We used a total of 47 Saanengoats in isolation until the results of the first nested Polymerase Chain Reaction (nested PCR) and Western Blotting (WB) tests, based on blood collection at the time of birth (M0). In the nested PCR, 4 animals were positive, at M0, and were eliminated. Later, the other 43goats were submitted to blood collection at 60 (M60) and 270 (M270) days of life to perform new tests of WB and nested PCR, which did not detect positive animals. We can affirm that the methodology adopted in this study was effective in the control of the disease, in the phase of breastfeeding and post-breastfeeding, and that the combination of the management system, which allows a reduction of risk of horizontal transmission, with more accurate diagnostic techniques, such as WB and nested PCR, is relevant for the elaboration of a strategic plan for the disease control.(AU)

Avaliação de dois testes sorológicos comerciais para diagnóstico das infecções pelo FIV e pelo FeLV / Evaluation of two point-of-care tests to diagnosis of FIV and FeLV infections

FIV e FeLV são retrovírus associados principalmente com neoplasias. Dois testes rápidos são disponibilizados no Brasil para o diagnóstico dessas infecções: um kit de imunocromatografia de fluxo bidirecional (SNAP® Combo IDEXX) e um kit de imunocromatografia de fluxo lateral unidirecional (ALERE/BIONOTE Anigen Rapid). O objetivo deste estudo foi comparar o teste SNAP® com o teste ALERE. Amostras de sangue de 178 gatos foram testadas utilizando-se ambos os kits. A reação em cadeia de polimerase em tempo real (qPCR) foi empregada como método confirmatório para todos os resultados. O teste SNAP® apresentou sensibilidade e especificidade de 100% para FIV; a sensibilidade e a especificidade do teste ALERE foram de 96,15% e 98,68%, respectivamente. A sensibilidade e a especificidade para o FeLV foram de 93,02% e 96,30% para o teste SNAP® e de 90,70% e 97,78% para o teste ALERE. Ainda em relação ao FeLV, três amostras com resultado positivo na qPCR obtiveram resultado falso-negativo em ambos os testes. Não houve diferença estatisticamente significante entre os métodos. Considerando a qPCR como padrão-ouro, o teste SNAP® apresentou maior sensibilidade e especificidade para o FIV, e o teste ALERE apresentou maior especificidade para o FeLV. Os resultados mostraram uma boa correlação entre os testes.(AU)

FIV and FeLV are Retrovirus associated mainly with feline neoplasms. Two point-of-care tests are commercially available in Brazil for diagnosis of these infections: a bidirectional flow immunochromatography kit (IDEXX SNAP ® Combo) and a lateral unidirectional flow immunochromatography kit (ALERE/BIONOTE Anigen Rapid). The aim of this study was to compare SNAP ® and ALERE tests. Blood samples obtained from 178 cats were evaluated using both tests. Quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) was used as confirmatory test for all samples. The sensitivity and specificity of SNAP ® test was 100% for FIV, and for ALERE test was 96.15% and 98.68%, respectively. The sensitivity and specificity for FeLV was 93.02% and 96.30% for SNAP ® test and 90.70% and 97.78% for ALERE test. Three samples with a qPCR positive result for FeLV obtained a false negative result in both SNAP ® and ALERE tests. There was no statistically significant difference between the two methods. Considering qPCR as gold standard method, the SNAP® test showed higher sensitivity and specificity for FIV, and the ALERE test presented higher specificity for FeLV. The results showed good agreement among the tests.(AU)

Molecular detection of bovine immunodeficiency virus (BIV) in bovines from the state of Minas Gerais, Brazil / Detecção molecular do vírus da imunodeficiência bovina (BIV) em bovinos do estado de Minas Gerais, Brasil

O vírus da imunodeficiência bovina é o agente causador da imunodeficiência viral bovina que é conhecido por infectar bovinos em todo o mundo. Como em outras infecções por retrovírus, os hospedeiros desenvolvem uma infecção de longo prazo e a maioria dos animais infectados permanece assintomática. O objetivo deste estudo foi detectar DNA proviral BIV em amostras de sangue de bovinos e estimar a ocorrência de infecção no estado de Minas Gerais, Brasil. Amostras de sangue de 391 bovinos foram coletadas de duas regiões do estado, Zona da Mata e Central. O DNA proviral foi detectado por reação em cadeia da polimerase semi-nested (SN-PCR). Os resultados de SN-PCR indicaram uma ocorrência de BIV de 12,5% no estado. Os produtos amplificados foram confirmados como BIV por sequenciamento e a similaridade da sequência de nucleotídeos com a estirpe de referência (R-29) foi de 99%. Este é o primeiro estudo que relata a presença do BIV em Minas Gerais, Brasil. Os resultados indicam a necessidade de realizar um estudo detalhado sobre a prevalência da infecção por BIV no Brasil.(AU)

Sodium dodecyl sulfate as a viral inactivator and future perspectives in the control of small ruminant lentiviruses / Emprego do dodecil sulfato de sódio como inativador viral e suas perspectivas no controle de lentivírus de pequenos ruminantes

Infections by small ruminant lentiviruses (SRLVs) affect goats and sheep causing chronic multisystemic diseases that generate great economic losses. The caprine lentivirus (CLV) and the ovine lentivirus (OLV) present tropism for cells of the monocyte/macrophage lineage, which are directly associated with the main route of transmission through the ingestion of milk and colostrum from infected animals. In this manner, controlling this route is of paramount importance. Currently, researches have investigated the use of chemical additives in milk that can preserve colostrum or milk and inactivate microbiological agents. Among the compounds, sodium dodecyl sulfate (SDS) has been shown to be satisfactory in the chemical inactivation of HIV and CLV in milk, and also as a biocide in goat colostrum.(AU)

As lentiviroses de pequenos ruminantes (LVPRs) são infecções que afetam caprinos e ovinos, causando doenças multissistêmicas crônicas, ocasionando grandes perdas econômicas. Os agentes causadores, lentivírus caprino (LVC) e o lentivírus ovino (LVO), apresentam tropismo por células da linhagem monocítico--fagocitária, as quais estão diretamente associadas à principal via de transmissão, por meio da ingestão de leite e colostro provindos de animais infectados. Desse modo, o controle por esta via é de suma importância. Atualmente, pesquisas vêm sendo desenvolvidas para o uso de aditivos químicos no leite, que possam conservar o colostro ou leite, e inativar agentes microbiológicos presentes. Dentre estes, o dodecil sulfato de sódio (SDS) vem apresentando resultados satisfatórios na inativação química do HIV e LVC em leite, e ainda como biocida em colostro caprino.(AU)

Ocorrência e fatores de risco associados à infecção por lentivírus de pequenos ruminantes no Estado de Sergipe / Occorrence and risk factors associated with small ruminant lentivirus infection in the State of Sergipe, Brazil

Os lentiviros de pequenos ruminantes (LVPR) são responsáveis por enfermidades infecciosas e multissistêmicas causadas pelo Vírus da Artrite Encefalite Caprina (CAEV) e o Vírus da Maedi-Visna (MVV), e se apresentam sob as formas clínicas: articular, mamária, respiratória e nervosa. Desta forma esse trabalho objetivou determinar a ocorrência e avaliar os fatores de risco associados à infecção por LVPR no Estado de Sergipe, Brasil. Foram coletadas amostras sanguíneas de 1200 ovinos e 675 caprinos oriundos respectivamente de 60 e 41 propriedades localizadas em 25 municípios sergipanos no período de 2011 a 2014. Os diagnósticos dos LVPR foram determinados pela técnica sorológica de Imunodifusão em Gel Ágar (IDGA) usando o kit comercial da marca Biovetech®. Os dados das variáveis associadas aos fatores de risco foram obtidos a partir de questionários aplicados aos proprietários dos rebanhos e analisados estatisticamente. As frequências absolutas e relativas foram determinadas por análise estatística descritiva e os fatores de risco por análise univariada das variáveis de interesse pelo Teste de Qui-quadrado de Pearson e Exato de Fisher, quando necessário, e em seguida submetidos à análise de regressão logística. Foi evidenciada uma soropositividade de 5,03% (34/675) em caprinos e 1,50% em ovinos com 26,82% (11/41) e 28,33% (17/60) das propriedades apresentando ao menos um animal positivo respectivamente. Na análise dos fatores de risco, não foram observadas diferenças significantes para os ovinos, enquanto que, para os caprinos, rebanhos acima de 100 animais, que pastejam em áreas comuns com outros rebanhos, em uma distância ≤500 metros entre as propriedades, que adotam medidas biotecnológicas da reprodução e não utilizam agulhas estéreis, são mais susceptíveis à infecção por LVPR. Sendo assim, conclui-se que, há a presença dos LVPR em rebanhos sergipanos, e mesmo que em baixas frequências faz-se necessário a implementação de medidas profiláticas devido a possibilidade de expansão e desenvolvimento da caprinocultura do estado, e o alto padrão genético da raça Santa Inês.(AU)

The lentiviruses of small ruminants are infectious and multisystemic diseases caused by the Caprine Arthritis Encephalitis Virus (CAEV) and the Maedi-Visna Virus (MVV), and present the clinical forms: articular, mammary, respiratory and nervous. This work aimed to determine the occurrence and to evaluate the risk factors associated with lentivirus infection of small ruminants in the State of Sergipe, Brazil. Blood samples were collected from 1200 sheep and 675 goats from 60 and 41 farms respectively, located in 25 Sergipe municipalities from 2011 to 2014. The diagnosis of small ruminant lentiviruses (LVPR) was determined by the serological technique of Immunodiffusion in Gel Agar (IDGA) using the commercial kit of the brand Biovetech®. Data from the variables associated with risk factors were obtained from questionnaires applied to the owners of the herds and analyzed statistically. Absolute and relative frequencies were determined by descriptive statistical analysis and risk factors by univariate analysis of the variables of interest by Pearson's Chi-square test and Fisher's exact test, when necessary. A logistic regression analysis was used, considering as a dependent variable for LVPR infection the reactive or non-reactive result observed in the IDGA. A seropositivity of 5.03% (34/675) was observed in goats and 1.50% in sheep with 26.82% (11/41) and 28.33% (17/60) of the properties had at least one animal positive respectively. The analysis of the risk factors, no significant differences were observed for sheep, while for goats, herds above 100 animals grazing in common areas with other herds, at a distance ≤ 500 meters between the properties, that adopt Biotechnological measures of reproduction and do not use sterile needles, are more susceptible to LVPR infection. Therefore, it´s concluded there is presence of lentiviruses of small ruminants in sergipan herds, and even if at low frequencies it is necessary to implement prophylactic measures due to the possibility of expansion and development of goat breeding of the state and the high genetic standard of the Santa Inês breed.(AU)

Duplex nested-PCR for detection of small ruminant lentiviruses

Abstract Small ruminant lentiviruses (SRLV) have high genetic variability which results in different viral strains around the world. This create a challenge to design sensible primers for molecular diagnosis in different regions. This work proposes a protocol of duplex nested-PCR for the precise diagnosis of SRLV. The technique was designed and tested with the control strains CAEV Co and MVV 1514. Then, field strains were submitted to the same protocol of duplex nested-PCR. Blood samples of sheep and goats were tested with AGID and nested PCR with specific primers for pol, gag and LTR. The AGID results showed low detection capacity of positive animals, while the nested PCR demonstrated a greater capacity of virus detection. Results demonstrated that LTR-PCR was more efficient in detecting positive sheep samples, whereas gag-PCR allowed a good detection of samples of positive goats and positive sheep. In addition, pol-PCR was more efficient with goat samples than for sheep. Duplex nested PCR performed with standard virus samples and field strains demonstrated that the technique is more efficient for the detection of multiple pro-viral DNA sequences. This study demonstrated a successful duplex nested PCR assay allowing a more accurate diagnosis of SRLV.

Hematological findings and factors associated with feline leukemia virus (FeLV) and feline immunodeficiency virus (FIV) positivity in cats from southern Brazil / Achados hematológicos e fatores associados a positividade pelo vírus da leucemia felina (felv) e vírus da imunodeficiência felina em gatos do sul do Brasil

Using a retrospective study, 493 cats tested for FeLV and FIV were selected for analysis of the association between hematologic findings and positivity at immunoassay test. Individual and hematologic variables were assessed considering the influence of results using univariate and multivariate logistic regression analysis. Out 153 of the 493 cats were positive for FeLV (31%), 50 were positive for FIV (10.1%) and 22 were positive for both FIV and FeLV (4.4%). Multivariate analysis detected significant associations between FeLV infection and age below 1 year (p=0.01), age from 1 to 10 years (p=0.03), and crossbreed (p=0.04). Male cats were more likely to be FIV-positive (p=0.002). Regarding hematological changes, FeLV-positive cats have higher odds to anemia, leukopenia and lymphopenia than FeLV-negative cats. FIV-positive cats are more likely to have anemia than negative. Identification of associated factors related to animal status and correlation of hematological disorders with infection by retroviruses in cats could be useful for detecting these retroviral diseases in cats.(AU)

Através de um estudo retrospectivo, 493 gatos testados para FeLV e FIV foram selecionados para análise da associação entre as alterações hematológicas e a positividade no teste imunoenzimático. Variáveis individuais e hematológicas foram consideradas para verificar a influência dos resultados utilizando análise de regressão logística univariada e multivariada. Um total de 153 de 493 gatos avaliados foram positivos para o FeLV (31%), 50 foram positivos para o FIV (10,1%) e 22 foram positivos para FIV e FeLV (4,4%). Análise multivariada detectou uma associação significativa entre a infecção pelo FeLV e a idade abaixo de 1 ano (P=0,01), idade entre 1 a 10 anos (P=0,03) e raça mista (P=0,04). Gatos machos foram mais predispostos a serem positivos para FIV (P=0,002). Com base nas alterações hematológicas, gatos positivos para o FeLV tem maior odds para apresentar anemia, leucopenia e linfopenia que os negativos. Gatos positivos para FIV possuem maiores chances de apresentarem anemia que os gatos negativos. A identificação dos fatores associados à infecção relacionados ao perfil do animal e a correlação com os distúrbios hematológicos com a infecção, pode ser útil para detecção das doenças retrovirais em gatos.(AU)

Transmissibilidade de Lentivírus de Pequenos Ruminantes para cabritos e cabras adultas por meio de sêmen infectado experimentalmente / Transmissibility of Small Ruminants Lentivirus in kids by experimentally infected semen

A Artrite Encefalite Caprina se caracteriza por ser multissistêmica e infecciosa, causada por um lentivírus. O estudo teve como objetivo avaliar a transmissibilidade do Lentivírus Caprino, para fêmeas e sua prole, por meio de sêmen infectado experimentalmente. Para tanto, onze fêmeas livres de CAEV foram inseminadas artificialmente com sêmen de bode livre de CAEV ao qual foi adicionado CAEV-Cork para obter título infectante com carga viral em 105 TCID50/ml. (grupo experimental 1). Destas, seis obtiverem prenhez confirmada, e a sua prole (n=6) constituiu o grupo experimental 2. Duas cabras livres de CAEV foram inseminadas artificialmente com sêmen do mesmo bode, sem o inócuo viral, constituindo-se o grupo controle. O diagnóstico da infecção pelo Lentivírus Caprino, foi realizado por IDGA, cELISA e nested-PCR. As fêmeas foram monitoradas durante 210 dias pós inseminação artificial. Já as proles foram imediatamente separadas das mães após o nascimento, e monitoradas nos momentos hora zero, aos quinze dias de idade e mensalmente, até doze meses de idade. Em relação às cabras, 56,96%(9/158) apresentaram positividade para cELISA, 24,05% (38/158) foram positivas a IDGA e nenhuma para nested-PCR. Em relação aos cabritos, 11,28% (15/133) amostras positivas para nested-PCR, 5,26% (7/133) amostras positivas para IDGA e nenhum para cELISA. As proles do grupo controle apresentaram resultados negativos para as três técnicas. A positividade encontrada em nested-PCR pode indicar grande importância para identificação de animais infectados, porém soronegativos, em situações de soroconversão tardia. De acordo com os resultados, concluiu-se que há a transmissão do Lentivírus caprino para a prole e para as mães pelo sêmen infectado.(AU)

Caprine Arthritis Encephalitis is a multisystemic infectious disease, caused by a lentivirus. The objective of this study was to evaluate the transmissibility of caprine lentivirus to goats and their offspring, through experimentally infected semen. Therefore, eleven free-CAEV goats were artificially inseminated using semen from a free-CAEV buck experimentally infected with CAEV-Cork strain (experimental group one). Pregnancy was confirmed in only six goats and their offspring (n=6) constituted the experimental group two. Two free-CAEV females were artificially inseminated with semen from the same seronegative buck, without viral inoculum to constitute the control group. The diagnosis of caprine lentivirus infection was performed using AGID, cELISA and nested-PCR. All females were monitored for 210 days after artificial insemination. Kids were immediately separated from their mothers after birth, and monitored at zero time, 15 days old and monthly until 12 months old. Regarding goat samples, 56.96% (9/159) were positive in cELISA, 24.05% (38/158) were positive in IDGA and none was positive in nested-PCR. Regarding to the offspring samples, 11.28% (15/133) and 5.26% (7/133) were positive in nested-PCR and IDGA, respectively, while no sample was positive in cELISA. The control group showed no positives in the three techniques. The positivity observed to nested-PCR may show its importance to identify infected, but seronegative animals, in late seroconversion situations. According to results, the transmission of caprine lentivirus to offspring and their mothers through infected semen is possible.(AU)

Caracterização epidemiológica e fatores de risco associados à infecção por lentivírus de pequenos ruminantes na região do semiárido paraibano, Nordeste do Brasil / Epidemiological characterization and risk factors associated with lentivirus infection in small ruminants in the semiarid of Paraíba State, Northeastern Brazil

O objetivo deste estudo foi determinar a soroprevalência de lentivírus de pequenos ruminantes (LVPR) e identificar os fatores de risco para a ocorrência de caprinos e ovinos soropositivos no semiárido do Estado da Paraíba. Foram utilizados 1.733 animais, sendo 1.274 caprinos procedentes de 62 Unidades de Produção (UPs) e 459 ovinos provenientes de 32 UPs. Para o diagnóstico sorológico da infecção por lentivírus foi utilizado o teste de imunodifusão em gel de ágar (IDGA). Dos 1.274 caprinos analisados 15 (1,18%) foram soropositivos, enquanto que todos os 459 ovinos foram soronegativos. Das 62 propriedades caprinas analisadas oito (12,9%) apresentaram pelo menos um animal soropositivo. Os fatores de risco para a ocorrência de caprinos soropositivos foram área da propriedade (odds ratio = 3,28; p = 0,044), ausência de capacitação dos produtores (odds ratio = 8,29; p = 0,042) e uso de monta natural não controlada (odds ratio = 6,78; p = 0,012). Conclui-se que a infecção por lentivírus de pequenos ruminantes, demonstrada pela detecção de anticorpos, está disseminada em rebanhos caprinos do semiá­rido paraibano, e sugere-se o incentivo à capacitação contínua dos produtores, manutenção de reprodutores negativos ao LVPR e utilização de inseminação artificial com o intuito de evitar o contato físico entre macho e fêmeas.(AU)

The aim of this survey was to determine the seroprevalence of small ruminant lentivirus (SRLV) and to identify risk factors for the occurrence of seropositive goats and sheep in the semiarid region of Paraiba State. It were used 1,733 animals, being 1,274 goats from 62 Production Units (PU) and 459 sheep from 38 PU. For the serological diagnosis of lentivirus infection the agar gel immunodiffusion test (AGID) was used. Of the 1,274 goats 15 (1.18%) were seropositive, and all 459 sheep were seronegative. Of the 62 goat herds eight (12.9%) presented at least one seropositive animal. Risk factors for the occurrence of seropositive goats were area of the property ≤35 ha (odds ratio = 3.28; p=0.044), not training of producers (odds ratio = 8.29; p=0.042) and use of uncontrolled natural mating (odds ratio = 6.78; p=0.012). It is concluded that lentivirus infection detected by serology is spread in goat flocks in the semiarid of the State of Paraíba, and it is suggested to encourage the continous capacitation of owners, maintenance of reproducers negative for SRLV and use of artificial insemination aiming to avoid the physical contact among male and females.(AU)

Ocorrência do vírus da artrite encefalite caprina (CAEV) em cabras leiteiras produzidas em sistema intensivo confinado no estado de Minas Gerais / Occurrence of caprine arthritis encephalitis virus (CAEV) in dairy goats produced in an intensive confined system in the state of Minas Gerais, Brazil

Objetivou-se no estudo identificar a ocorrência de infecção pelo vírus da artrite encefalite caprina (CAEV) em propriedades produtoras de leite caprino com sistema intensivo no estado de Minas Gerais. Foram avaliadas cinco propriedades, localizadas em cidades distintas, totalizando 1072 animais, sendo 48 machos e 1024 fêmeas de diferentes faixas etárias, das raças Toggenburg, Alpina e Saanen. O método de diagnóstico utilizado foi o de imunodifusão em ágar gel (IDGA), para detecção de anticorpos anti-CAEV, por ser o diagnóstico preconizado pela Organização Mundial de Saúde Animal (OIE). A ocorrência de anticorpos anti-CAEV nas propriedades estudadas foi de 49,5% (531/1072), entretanto a mesma variou de acordo com a propriedade. Foram observados os seguintes resultados por propriedade: propriedade 1 = 69,6% (156/224); propriedade 2 = 41,5% (47/113); propriedade 3 = 40,3% (63/156); propriedade 4 = 24,6% (18/73) e propriedade 5 = 48,8% (247/506). Do total de machos avaliados, 14,5% (7/48) apresentaram sorologia positiva. De acordo com os resultados, uma alta ocorrência de animais soropositivos foi identificada no estado de Minas Gerais, o qual possui um dos maiores rebanhos de cabras leiteiras do Brasil. Portanto, salienta-se a necessidade de se adotar medidas estratégias sanitárias para o controle da CAE, como a realização de exames rotineiros nas propriedades e a separação de animais infectados dos sadios. A exclusão de reprodutores positivos nas propriedades também é uma medida de controle, pois já foi demonstrado que estes são fontes de infecção importantes.(AU)

The objective of the present study was to identify the occurrence of caprine arthritis encephalitis virus (CAEV) infection in dairy goat farms with intensive system in Minas Gerais State. Five properties were evaluated, totaling 1072 animals, being 48 males and 1024 females of different ages and breeds (Toggenburg, Saanen and Alpine). The diagnostic method used was the agar gel immunodiffusion (AGID) test, to detect antibodies anti-CAEV, which is the diagnostic test recommended by World Organization for Animal Health - OIE. The occurrence of anti-CAEV antibodies in the properties was 49.5% (531/1072), however varied according to the farm. The anti-CAEV antibodies detection varied according to the property: Farm 1 = 69.6% (156/224); farm 2 = 41.5% (47/113); farm 3 = 40.3% (63/156); farm 4 = 24.6% (18/73) and farm 5 = 48.8% (247/506). Of the total sampled males, 14.5% (7/48) were serologically positive. According to the results, there is a high occurrence rate of CAEV-seropositive animals in Minas Gerais, which has one of the largest Brazilian dairy goat herds. Therefore, it is essential to adopt strategies for CAE control, such as a routine of diagnostics tests in the properties and the separation of healthy from infected goats. The elimination of positive breeding goats in the properties is also a measure of control, because it has been shown that these are an important route of CAEV transmission in dairy farms.(AU)

Frequência de ovinos soropositivos para lentivírus de pequenos ruminantes no município de Colinas do Tocantins, estado do Tocantins, Brasil / Frequency of antibodies against ovine Lentivirus in sheep in Colinas do Tocantins, Tocantins state, Brazil

Maedi-Visna (MV) é uma enfermidade causada por lentivírus de pequenos ruminantes com evolução crônica e em grande parte dos casos sinais clínicos inaparentes. O diagnóstico da doença é baseado em sinais clínicos e dados epidemiológicos, sendo a imunodifusão em gel de ágar (IDGA) o método padrão para a detecção sorológica de anticorpos contra o lentivírus. Sabendo que o estado do Tocantins possui potencial para o desenvolvimento da ovinocultura e que grande parte dos produtores de Colinas do Tocantins, no referido estado, possui interesse em estabelecer criação racional, esta pesquisa teve por objetivo a realização de um estudo acerca da soroprevalência da doença. Foram coletadas 369 amostras de sangue de ovinos, independentemente de raça, sexo e idade, de diferentes propriedades rurais do município para diagnóstico de MV utilizando a técnica de IDGA. Após as análises laboratoriais, para avaliação dos resultados no tocante às categorias, foi utilizado o teste exato de Fisher e também foi calculado o odds ratio , com intervalo de confiança de 95% para verificação da idade como possível fator de risco ou de proteção. Constatou-se que 6 animais (1,62%) se apresentaram positivos no IDGA. Diante desses resultados, foi possível concluir que a frequência de ovinos soropositivos no município é baixa.(AU)

Maedi-Visna is a disease caused by a small ruminant lentivirus, with a chronic evolution and, in most cases, unapparent signs. Its diagnosis is based on clinical signs and epidemiological data, with the agar gel immunodiffusion (AGID) test being the classical method for detecting antibodies against lentiviruses. Considering that the state of Tocantins has the potential to develop sheep breeding and that the majority of producers from Colinas do Tocantins city has shown an interest in establishing a rational breeding, this study aimed to determine the prevalence of such disease in that region. A total of 369 blood samples was drawn from sheep bred in several farms of that town, regardless of breed, gender, and age. Every sample underwent an AGID to test for Maedi-Visna. After the laboratory analyses were concluded, the Fisher's exact test was used to evaluate the results against the categories. Also, the odds ratio, with 95% confidence interval, was calculated to check whether age played a role as either a risk or protective factor in these results. It was found that six animals (1.62%) were positive in AGID, therefore concluding that the frequency of seropositivity in that region is low.(AU)

Aspectos imunológicos e genéticos da expressão da integrina A4B7 na história natural e na intervenção terapêutica da infecção por lentivírus no homem e em modelos animais / [Immunological and genetic aspects of integrin expression A4B7 in the natural history and therapeutic intervention of infection by lentivirus in humans and animal models]

Integrinas são proteínas envolvidas na migração e adesão celular. Estudos recentes mostraram que a integrina α4ß7 interage com a proteína gp120 do HIV-1, auxiliando a entrada do vírus na célula hospedeira através de sinapses virológicas. Já foi demonstrada uma maior prevalência do genótipo C-C do SNP rs1449263, localizado na região promotora do gene itga4 (que codifica a subunidade α4 da integrina), em pacientes com esclerose múltipla. Estes pacientes apresentam uma alta expressão de integrina, sugerindo o envolvimento deste SNP na superexpressão da mesma. A interação de α4ß7 com seu ligante natural, MAdCAM, pode ser uma importante fonte de estímulo, capaz de gerar sinais intracelulares culminando com a ativação de linfócitos T. Diversos estudos tem avaliado o papel da integrina α4ß7 na transmissão do HIV em mucosas, bem como a utilização de anticorpos bloqueadores desta proteína como novas terapias para prevenção e tratamento da infecção. Neste sentido, a utilização de primatas não-humanos como modelos de estudo da infecção por SIV/HIV é de suma importância e utilidade. Neste estudo, avaliamos a prevalência dos diferentes genótipos do SNP rs1449263 e o perfil de expressão da integrina α4 em indivíduos de três coortes diferentes que compreendem adultos HIV+ e HIV- , e em crianças HIV+ ou expostas ao vírus e não-infectadas. A partir de PBMCs foram isolados DNA genômico e RNA para a avaliação dos genótipos encontrados e expressão relativa dos genes itga4, itgb7 e itgae. Esta última pode também se ligar a subunidade ß7 e competir com α4. Não foram observadas associações entre os genótipos e alelos do SNP estudado e a aquisição do HIV ou progressão para a Aids. Em relação à expressão de itga4, indivíduos portadores do alelo C apresentaram maior expressão do que os não-portadores. A expressão de itgb7 foi compatível com a de itga4 e o mesmo resultado foi observado por citometria de fluxo. Não foi observada expressão de itgae em níveis compatíveis aos de itgb7. Aplicando técnicas de cultura celular e citometria de fluxo, mostramos que MAdCAM pode atuar como molécula co-estimulatória de células T CD4+ naïves. Apesar deste estímulo não induzir proliferação celular, linfócitos cultivados na presença de MAdCAM são capazes de suportar a replicação do HIV in vitro. Este efeito mostrou-se mais intenso quando o estímulo foi realizado em presença de ácido retinóico (que induz a expressão de α4ß7) ou anti-CD28, induzindo até mesmo a proliferação dos linfócitos naïves. Através de um estudo com primatas não-humanos infectados com SIV e tratados com antirretrovirais em combinação ou não com anti-α4ß7, pretendemos utilizar o sequenciamento de nova geração para avaliar a dinâmica das populações virais ao longo da infecção mediante os diferentes tratamentos administrados. Nesta tese, validamos os protocolos necessários para a execução deste projeto, mostrando que protocolos desenvolvidos para o sequenciamento de HIV podem ser adaptados e utilizados para o estudo de SIV. Os resultados desta tese destacam a importância da integrina α4ß7 na infecção por HIV sob diferentes aspectos como impacto clínico, estabelecimento de infecção em mucosas e possível alvo terapêutico.

Integrins are transmembrane glycoproteins found in many vertebrate cell types. Recent studies show that HIV gp120 can bind the α4ß7 integrin, providing a favorable environment for virus transmission between cells. α4ß7 is a homing molecule to the gut-associated lymphocyte tissue (GALT). This protein has an important role during the initial course of HIV infection, since intense viral replication and lymphocyte depletion is observed in the GALT during this phase. A higher prevalence of the C-C genotype in the SNP rs1449263, located in the promoter region of the itga4 gene (that encodes α4 integrin), has been shown in multiple sclerosis patients, possibly related to a higher expression of this gene. The interaction between α4ß7 and its natural ligand MAdCAM can lead to cell activation, promoting proliferation of T lymphocytes. Several studies highlight the role of α4ß7 in the mucosal transmission of HIV as well as its possible use as a target for HIV prevention and antiviral therapy. Studies with non-human primates are useful in this field, as these animals have similarities with humans and can be infected with SIV. In the present study, we assessed the prevalence of different SNP rs1449263 genotypes in three different cohorts harboring HIV+ and HIVadults, as well as HIV+ or exposed-uninfected children. SNP genotyping and gene expression analysis were carried out from DNA and RNA isolated from PBMCs. No association between SNP genotype and HIV acquisition or progression to AIDS was observed in the cohorts. With respect to itga4, itgb7 (ß7) and itgae (αE) gene expression, a higher level of itga4 mRNA was observed in allele C carriers, compared to noncarriers. The itgb7 expression was compatible to itga4 levels and this result was confirmed by cell surface expression through flow cytometry. In some cases, the itgb7 levels were higher than itga4, raising the question whether ß7 could be pairing with its other partner, αE, but itgae levels were too low, and not compatible with itgb7 levels. Using T cell culture with different ligands and flow cytometry, we showed that MAdCAM can act as a co-stimulatory molecule on CD4+ naïve T cells. Despite the lack of cell proliferation under these conditions, naïve T lymphocytes cultured in presence of MAdCAM supported HIV replication in vitro. This effect was even more pronounced when retinoic acid (which upregulates α4ß7 expression) or anti-CD8 was added to the culture, and in this case cell proliferation was observed. In a study using non-human primates infected with SIV and treated to antiretroviral therapy (ART) in combination or not with anti-α4ß7 monoclonal antibody, some of the anti-α4ß7 treated animals were able to control viral replication when ART was discontinued. With this in mind, we aim to assess the viral population dynamics along the infection. This analysis will be done by next-generation sequencing (NGS). In this Thesis, we describe a protocol to be used with SIV samples, that was adapted and tested from two different protocols designed to HIV NGS sequencing. The results of this Thesis highlight the importance of integrin α4ß7 in HIV infection in different aspects such as clinical impact, establishment of infection in mucosal tissues and its use as a possible therapeutic target.

Interspecific transmission of small ruminant lentiviruses from goats to sheep

This study was conducted in order to evaluate the transmission of caprine lentivirus to sheep using different experimental groups. The first one (colostrum group) was formed by nine lambs receiving colostrum from goats positive for small ruminant lentiviruses (SRLV). The second group (milk group) was established by nine lambs that received milk of these goats. Third was a control group, consisting of lambs that suckled colostrum and milk of negative mothers. Another experimental group (contact group) was formed by eight adult sheep, confined with two naturally infected goats. The groups were monitored by immunoblotting (IB), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), agar gel immunodiffusion (AGID) and nested polymerase chain reaction (nPCR). All lambs that suckled colostrum and milk of infected goats and six sheep of the contact group had positive results in the nPCR, although seroconversion was detected only in three of the exposed animals, with no clinical lentiviruses manifestation, in 720 days of observation. There was a close relationship between viral sequences obtained from infected animals and the prototype CAEV-Cork. Thus, it was concluded that SRLV can be transmitted from goats to sheep, however, the degree of adaptation of the virus strain to the host species probably interferes with the infection persistence and seroconversion rate.

Use of serological diagnostic techniques in the control and eradication of caprine arthritis encephalitis: an update / Uso de técnicas sorológicas de diagnóstico no controle e erradicação da artrite encefalite caprina: atualização

Caprine arthritis encephalitis (CAE) is a chronic disease caused by a small ruminant lentivirus (SRLV), which causes significant losses in goat breeding. The actual state of animal infection with SRLV is difficult to determine due to a complex pathogenesis of the virus, including factors such as delayed or intermittent seroconversion in serological tests. Several serological techniques are available for disease diagnosis, such as screening or confirmation tests, which are different in sensitivity and specificity. Regarding the choice of the test to be applied, availability of commercial immunoreagents, team training, antigen used, and cost of techniques must be considered. This review presents the serological methods available for use in different stages of CAE control and eradication programs, and management measures to be adopted in conjunction with serological diagnosis of the disease...

A artrite encefalite caprina (CAE) é uma enfermidade crônica causada por um lentivírus de pequenos ruminantes (LVPR), que ocasiona perdas significativas na caprinocultura. O estado real da infecção animal pelo LVPR é de difícil determinação em virtude da complexa patogenia do vírus, incluindo fatores como soroconversão tardia ou intermitente em testes sorológicos. Para o diagnóstico da enfermidade, diversas técnicas sorológicas estão disponíveis, como testes de triagem ou confirmatórios, com variações na sensibilidade e especificidade. Para escolha do teste a ser usado, a disponibilidade de imunorreagentes comerciais, o treinamento da equipe, o antígeno utilizado, e o custo das técnicas devem ser considerados. Esta revisão apresenta os métodos sorológicos disponíveis para uso em diferentes fases dos programas de controle e erradicação da CAE e as medidas de manejo que devem ser adotadas em conjunto com o diagnóstico sorológico da enfermidade...

Prevalência da infecção por lentivírus de pequenos ruminantes em caprinos em Teresina, Piauí / Prevalence of small ruminants lentiviruses infection in goats from Teresina, Piauí, Brazil

The prevalence of anti-lentiviruses antibodies of small ruminants was investigated in goat herds in the city of Teresina, PI, Brazil. A seroepidemiological survey was conducted involving 480 animals, apparently healthy, belonging to six rural properties. The diagnostic test was the agar gel immunodiffusion (AGID), using antigens produced from cellular cultures infected with caprine arthritis encephalitis virus (CAEV Cork). Prevalences by gender and age were estimated considering sampling fractions for each farm. A general prevalence of 4.2 percent, was observerved, being 4.2 percent for females and 3.6 percent for males. Prevalences were higher among older goats. Regarding the breed standard, 23.5 percent were of the Anglo Nubian, 5.9 percent of the Boer, 35.3 percent Anglo Nubian x Boer crossbred, and 35.3 percent of undefined breed. It is concluded that small ruminant lentiviruses are endemic among goat herds of Teresina.

[ first survey on the status of bovine immunudeficiency virus infection and associated clinical, pathological, haematological and flow cytometric findings in Holestein cattle in Iran]

Bovine Immunodeficiency Virus is a Lentivirus which can cause varieties of infectious complications and induce remarkable losses to dairy industry. Considering to the probability of worldwide distribution of the BIV infection, this study was conducted for the first time in Iran to determine of the status of BIV infection in the Holstein cattle and evaluate the associated findings. According to the results of the Nested-PCR method in this study, 16.2% of 197 slaughtered Holstein cattle in Meysam abattoir of Tehran were infective with BIV. Sequencing of the amplicons obtained from PBLs of the cattle using gag-specific primers revealed that there was 98.7-98.9% homology between this field strain and reference sequences of BIV. The infection rate of cattle with enlarged heamal nodes was higher than the animals without these lesions [0.01

Produção de antígeno viral para o sorodiagnóstico da artrite-encefalite caprina utilizando um teste imunoenzimático (ELISA) / Viral antigen production for the sorodiagnóstico of the goat artrite-encefalite using one has tested imunoenzimático

O vírus da Artrite-encefalite caprina (CAEV) é um Lentivírus de pequenos ruminantes, que causa uma doença crônica e progressiva, caracterizada por encefalomielite, mastite, pneumonia e artrite. O diagnóstico é baseado na detecção de anticorpos contra o vírus através da Imunodifusão em Gel de Agarose (IDGA), técnica sorológica de referência para CAEV, porém de baixa sensibilidade. O objetivo deste trabalho foi produzir um antígeno a partir da cultura de células de membrana sinovial caprina (MSC) infectadas com a CAEV, para ser utilizado em um teste diagnóstico (ELISA indireto). O antígeno foi obtido de culturas de células de MSC infectadas e posterior tratamento com SDS 0,1%. Amostras de soros caprinos (n=343) foram utilizadas para detectar a presença de anticorpos para CAEV pelo teste ELISA indireto e a técnica IDGA. Nessas amostras, o teste ELISA detectou 72 (21%) amostras positivas. Entretanto, o teste IDGA detectou 30 (8%) amostras positivas. O ELISA indireto também detectou precocemente uma soroconversão em 5 animais de um total de 13 controlados periodicamente durante 2 anos. A sensibilidade e a especificidade do teste ELISA com relação a IDGA foi de 73,3% e 84% respectivamente. Esse ELISA com o antígeno viral assim produzido mostrou-se efetivo, de baixo custo e sensível para o diagnóstico sorológico de anticorpos para CAEV.

Occurrence of feline immunodeficiency virus infection in cats / Ocorrência da infecção pelo vírus da imunodeficiência felina em gatos

The occurrence of feline immunodeficiency virus (FIV) in Brazil has been previously described. This study aimed to investigate the frequency of FIV infection in 454 blood samples from healthy and sick domestic cats from 13 cities of São Paulo State, Brazil as well as to evaluate the risk factors associated with the infection. The results showed that 14.7 percent (67/454) of the cats were infected with FIV. The clinical evaluation showed that 29.2 percent of the FIV-positive animals were sick, while 7.3 percent did not show any type of clinical manifestation. In addition, the vast majority (23.1 percent) of positive cases corresponded to free-roaming owned cats. The incidence of FIV infection was higher in males (20.3 percent) than in females (9.7 percent). The results suggest that certain characteristics such as gender, health status and lifestyle may be associated with the risk of being infected with FIV in the population of cats studied.

No Brasil, a ocorrência da infecção pelo vírus da imunodeficiência felina (FIV) já foi descrita. Neste estudo, objetivou-se investigar a freqüência da infecção pelo FIV em 454 amostras de sangue de gatos domésticos doentes e sadios, oriundos de 13 cidades do Estado de São Paulo, assim como avaliar os fatores de risco associados à infecção pelo FIV. Os resultados demonstraram que 14,7 por cento (67/454) dos gatos estavam infectados pelo FIV. A avaliação clínica dos animais investigados mostrou que 29,2 por cento dos animais soropositivos para FIV estavam doentes, enquanto 7,3 por cento não apresentavam nenhuma manifestação clínica. Além disso, a vasta maioria dos animais positivos (23,1 por cento) vivia em residências e tinha livre acesso à rua. A incidência da infecção pelo FIV foi maior nos gatos machos (20,3 por cento) do que nas fêmeas (9,7 por cento). Os resultados sugerem que certas características como sexo, estilo de vida e estado de saúde podem estar associadas ao risco de contrair a infecção pelo FIV na população de gatos estudada.

Anticorpos contra lentivírus de pequenos ruminantes em caprinos e ovinos em abatedouros do estado de Pernambuco / Small ruminant lentivirus infection in goats and sheep from two abattoirs in Pernambuco State, Brazil

The prevalence of small ruminant lentivirus (SRL) infection was evaluated in goats and sheep in two counties of Pernambuco State, Brasil. Seriological examinations were performed from a total of 672 goats and 325 sheep, one year of age and older, at two abattoirs. Sera were analyzed by agar gel immunodiffusion using Maedi-Visna K-1514 antigens. There were 42 reactive samples (95 percent confidence interval 3.6 percent to 4.9 percent) in both slaughter houses. In São Lourenço da Mata county, 3.2 percent and 4.0 percent of goat and sheep sera were responsive, whereas in Paulista county, 5.1 percent of goat samples and 8.2 percent of sheep were reactive. Thus, the prevalence of small ruminant lentivirus was low in goats and sheep sampled from the region.