Ação dos leucotrienos na fagocitose via receptores Fc`GAMA´ e manose em macrófagos alveolares e mecanismos moleculares envolvidos / Importance of leukotrienes en phagocytosis of Fc`GAMA´ and mannose receptor in alveolar macrophages and molecular mecanismes involved

Os leucotrienos aumentam a fagocitose e a atividade microbicida contra uma série de patógenos. Em macrófagos alveolares, LTB`IND.4´ e LTD`IND.4´ aumentam a fagocitose via Fc`GAMA´R de modo dependente de PKC. Entretanto, o papel das isoformas específicas da PKC, das MAPK, e da Pi3K neste processo, ainda não é conhecido. Além disso, pouco se sabe sobre a importância dos leucotrienos na fagocitose via outros receptores. Os objetivos deste trabalho são: a) ampliar o conhecimento sobre as vias de sinalização ativadas pelos leucotrienos durante a fagocitose de hemácias opsonizadas por IgG; b) avaliar o efeito dos leucotrienos na fagocitose de Candida albicans, por macrófagos alveolares e as vias de sinalização intracelular envolvidas. Observou-se que os leucotrienos endogenamente produzidos ou adicionados aos macrófagos alveolares, aumentam a fagocitose via Fc`GAMA´R e para isso utilizam distintas vias de sinalização intracelular. A ação do LTB`IND.4´ envolveu predominantemente a via ERK1/2 e PKC`ALFA´ e com menor intensidade da PKC`DELTA´...

Lysozyme plays a dual role against the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis / A lisozima desempenha um papel duplo contra o fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis

In order to determine the role of lysozyme, an antimicrobial peptide belonging to the innate immune system, against the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis, co-cultures of the MH-S murine alveolar macrophages cell line with P. brasiliensis conidia were done; assays to evaluate the effect of physiological and inflammatory concentrations of lysozyme directly on the fungus life cycle were also undertaken. We observed that TNF-α-activated macrophages significantly inhibited the conidia to yeast transition (p = 0.0043) and exerted an important fungicidal effect (p = 0.0044), killing 27 percent more fungal propagules in comparison with controls. Nonetheless, after adding a selective inhibitor of lysozyme, the fungicidal effect was reverted. When P. brasiliensis propagules were exposed directly to different concentrations of lysozyme, a dual effect was observed. Physiologic concentrations of the enzyme facilitated the conidia-to-yeast transition process (p < 0.05). On the contrary, inflammatory concentrations impaired the normal temperature-dependant fungal transition (p < 0.0001). When yeast cells were exposed to lysozyme, irrespective of concentration, the multiple-budding ability was badly impaired (p < 0.0001). In addition, ultra-structural changes such as subcellular degradation, fusion of lipid vacuoles, lamellar structures and interruption of the fibrilar layer were observed in lysozyme exposed conidia. These results suggest that lysozyme appears to exert a dual role as part of the anti-P. brasiliensis defense mechanisms.

Com a finalidade de determinar o papel da lisozima, um peptídeo antimicrobiano que pertence ao sistema imune inato, contra o fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis, foram feitas co-culturas de uma linha de macrófagos alveolares murinos (MH-S) com as conídias do fungo na presença ou não do TNF-α e/ou um inibidor da lisozima; também foram feitos ensaios que avaliaram o efeito das concentrações fisiológicas e inflamatórias de lisozima diretamente sobre o ciclo de vida do fungo. Observamos que os macrófagos ativados com a citoquina tiveram um efeito significativo na inibição da transição conídia/levedura (p = 0,0043) e exerceram um efeito fungicida importante (p = 0,0044), matando mais de 27 por cento das propágulas do fungo em comparação com os macrófagos não ativados. No entanto, após ser o inibidor seletivo da lisozima adicionado, o efeito fungicida foi revertido. Quando os propágulos do fungo foram expostos diretamente a diferentes concentrações da lisozima, um duplo efeito foi observado. Assim, as concentrações fisiológicas da enzima facilitaram o processo de transição conídia-levedura (p < 0,05). Contrariamente, as concentrações inflamatórias prejudicaram a transição fúngica (p < 0,0001). Quando as leveduras foram expostas a qualquer concentração de lisozima, sua capacidade de multi-brotação foi gravemente prejudicada (p < 0,0001). Além disso, mudanças ultra-estruturais, como a sub degradação, a fusão dos vacúolos dos lípidos, estruturas lamelares e interrupção da camada fibrilar foram observadas em conídios expostos à lisozima. Estes resultados sugerem que a lisozima poderia exercer um duplo papel no mecanismo antifúngico contra P. brasiliensis.

Atividade fungicida e secretora de macrófagos alveolares de camundongos susceptíveis e resistentes infectados pelo P. brasiliensis / Fungicidal and secretory ability of alveolar macrophages from susceptible and resistant mice infected with P. brasiliensis

Estudos em nosso laboratório carcterizaram camundongos B10.A e A/J, respectivamente, como susceptíveis e resistentes à infecção pulmonar pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis. A imunidade inata desempenha papel fundamental no controle inicial dos patógenos e na regulação da resposta imune adquirida. Como os macrófagos alveolares são as primeiras células do hospedeiro a interagir com o fungo, propusemo-nos a estudar a capacidade fungicida e secretora dos macrófagos alveolares de camundongos susceptíveis e resistentes ao P. brasiliensis para melhor compreender a PCM pulmonar. Camundongos B10.A e A/J normais (n: 10-15) foram submetidos a lavagem bronco-alveolar (LBA) e a suspensão celular obtida (2x'10 POT. 5' células/poço)...

Previous studies in our laboratory characterized B10.A and A/J mice as susceptible and resistant strains to pulmonary Paracoccidioides brasiliensis infection. Innate immunity plays a fundamental role on the control of the initial growth of pathogens as well as in the acquired immunity that subsequently develops. As alveolar macrophages are the first host cells to interact with P. brasiliensis we decided to study the fungicidal and secretory ability of alveolar macrophages from resistant and susceptible mice to P. brasiliensis to better understand the pulmonary model of paracoccidioidomycosis. Normal B10.A and A/J mice (n=10-15) were submitted to bronchoalveolar lavage (BAL) and cell suspensions (2x105 cells/well) were pre-activated ovemight with IFN-γ, IL-12 or the combination of these two cytokines (50,000, 10,000 and 2,000 pg/rnL). After that, macrophages were in vitro challenged with P. brasiliensis yeasts (1:50 fungus: macrophage ratio) and 72h later fungicidal activity was determined by colony forming units counts (CFU). Nitrite and cytokines production were determined in culture supematants by Griess reaction and ELISA, respectively. Data were expressed as means ± SE and analyzed by Student's t test. Our results showed that B10.A macrophages pre-activated with the different assayed concentrations of IFNγ, IL-12 or both cytokines presented elevated fungicidal ability (51¬-97%) concomitant with the presence of high levels of NO, IL-12 and MCP-l and low amounts of IL-10 and GM-CSF. NO synthesis occurred in low levels but high concentrations of IL-10 and GM-CSF associated to low amounts of IL-12 and MCP-1 were detected in the co-cultures supematants. NO synthesis inhibition by aminoguanidine clearly showed that the fungicidal ability of B10.A but not of A/J macrophages was NO¬ dependent. Treatment ...