Haemoparasites in captive birds at Uberlândia zoo, state of Minas Gerais, Brazil

Haemoparasites are one of the most important groups of bird parasites, with emphasis on the genera Haemoproteus, Plasmodium, Leucocytozoon and Trypanosoma. Zoos sustain different wild animals and are valuable tools for the education and conservation of species. The conditions of captive animals differ from wild animals, as zoos have sufficient availability of food throughout the year, protection against predators and veterinary care for animals. This study aimed to determine the prevalence of haemoparasites in captive birds of the Sabiá Municipal Park Zoo, municipality of Uberlândia, state of Minas Gerais, Brazil. Blood samples were collected from the alveolar vein puncture to make blood swabs. This material was fixed with methanol, stained by the GIEMSA technique and examined under optical microscope. A total of 46 birds (19 species) were analyzed and only three individuals (6.52%) were positive for Plasmodium sp. The hosts were Pavo cristatus and Tyto furcata. This low positivity was expected, since haemoparasites do not generally present high infection rates among birds. Even if a parasite is not pathogenic for a given species, these individuals are important reservoirs for the infection of more vulnerable species. Differences in the prevalence and intensity of infection of these hosts depend on the virulence of the parasite, ability of the host to respond to such infections and vector availability. This low prevalence rate suggests a good health status of the captive birds in the study area.

Comparative morphometric evaluation of hepatic hemosiderosis in wild Magellanic penguins (Spheniscus magellanicus) infected with different Plasmodium spp. subgenera / Avaliação morfométrica comparativa da hemossiderose hepática em pinguins-de-Magalhães (Spheniscus magellanicus) de vida livre infectados por diferentes subgêneros de Plasmodium spp

Abstract Avian malaria is one of the most important diseases of captive penguins. We employed morphometric techniques to evaluate hepatic hemosiderosis in rehabilitating wild Magellanic penguins (Spheniscus magellanicus) that were negative (n = 9) or naturally infected by different subgenera of Plasmodium spp. (n = 24), according with: Plasmodium subgenera (Haemamoeba, Huffia, Other lineages, and Unidentified lineages), severity of Plasmodium histopathological lesions, and concurrent diseases, age class (juvenile or adult plumage), sex (male, female or not determined), body score (emaciated, thin, good, excellent, not available), molt, presence or absence of oil contamination upon admission, iron supplementation, and rehabilitation center. The percentage of the area occupied by hemosiderin was called 'Index of Hepatic Hemosiderosis (IHH)'. Plasmodium-positive females presented significantly higher IHH values (17.53 ± 12.95%) than males (7.20 ± 4.25%; p = 0.041). We observed higher levels of congestion (p = 0.0182) and pneumonia (p = 0.0250) severity between Unidentified lineages vs. Huffia. We believe that the hepatic hemosiderosis observed in this study was multifactorial, the result of pathological processes caused by malaria, molting, hemoglobin and myoglobin catabolism during migration, anemia, concomitant diseases, and iron supplementation, all possibly potentiated by decreased liver mass. Further studies are needed to clarify the mechanisms of these hypotheses.

Resumo Malária aviária é uma das mais relevantes doenças em pinguins cativos. Foram aplicadas técnicas morfométricas para avaliar a hemossiderose hepática em pinguins-de-Magalhães (Spheniscus magellanicus ) de vida livre em reabilitação negativos (n = 9) e naturalmente infectados por diferentes subgêneros de Plasmodium spp. (n = 24), quanto a: subgênero de Plasmodium (Haemamoeba , Huffia, Outras Linhagens, e Linhagens não identificadas), severidade das lesões histopatológicas causadas por Plasmodium e doenças concomitantes, faixa etária (plumagem juvenil ou adulta), sexo (macho, fêmea, indeterminado), condição corporal (emaciado, magro, bom, excelente, indisponível), muda, presença/ausência de óleo a admissão, suplementação de ferro, e centro de reabilitação. A porcentagem da área ocupada por hemossiderina foi denominada "Índice de Hemossiderose Hepática (IHH)". Fêmeas Plasmodium -positivas apresentaram IHH significativamente mais elevado que machos, respectivamente, 17,53 ± 12,95% e 7,20 ± 4,25% (p = 0,041). Níveis mais elevados de congestão (p = 0,0182) e pneumonia (p = 0,0250) foram observados entre Linhagens não identificadas vs. Huffia. Possivelmente, a hemossiderose hepática observada nesse estudo seja multifatorial, resultado de processos patológicos causados por malária, muda, catabolismo de hemoglobina e mioglobina durante a migração, anemia, doenças concomitantes e suplementação de ferro, potencialmente intensificados por massa hepática reduzida. Estudos complementares são necessários para esclarecer os mecanismos de tais hipóteses.

Molecular characterization of Plasmodium juxtanucleare in Thai native fowls based on partial cytochrome C oxidase subunit I gene / 대한수의학회지

Avian malaria is one of the most important general blood parasites of poultry in Southeast Asia. Plasmodium (P.) juxtanucleare causes avian malaria in wild and domestic fowl. This study aimed to identify and characterize the Plasmodium species infecting in Thai native fowl. Blood samples were collected for microscopic examination, followed by detection of the Plasmodium cox I gene by using PCR. Five of the 10 sampled fowl had the desired 588 base pair amplicons. Sequence analysis of the five amplicons indicated that the nucleotide and amino acid sequences were homologous to each other and were closely related (100% identity) to a P. juxtanucleare strain isolated in Japan (AB250415). Furthermore, the phylogenetic tree of the cox I gene showed that the P. juxtanucleare in this study were grouped together and clustered with the Japan strain. The presence of P. juxtanucleare described in this study is the first report of P. juxtanucleare in the Thai native fowl of Thailand.

Haemoproteus in barn and collared scops owls from Thailand

The barn owl (BO) and the collared scops owl (CSO) are common nocturnal raptors throughout Thailand. Blood samples from 23 adult BOs and 14 CSOs were collected and processed for complete blood cell counts and parasite morphological examinations. Two Haemoproteus-positive samples were processed for ultrastructural observation. Polymerase chain reaction (PCR) analysis for a partial cytochrome b gene (cytb) from Haemoproteus was performed in all samples. Haemoproteus presence detected by light microscopy was lower than that detected by PCR (30.4% and 34.8%, respectively, in BO; and 50.0% and 78.6%, respectively, in CSO). Comparative hematology revealed that Haemoproteus-positive BOs had higher mean cell hemoglobin concentration, total leukocyte, absolute heterophil, basophil, and monocyte counts than Haemoproteus-negative BOs, but no significant differences between Haemoproteus-negative and

Plasmodium spp. and Haemoproteus spp. infection in birds of the Brazilian Atlantic Forest detected by microscopy and polymerase chain reaction / Infecção por Plasmodium spp. e Haemoproteus spp. em aves da Mata Atlântica brasileira detectada por microscopia e reação em cadeia da polimerase

In recent years haemosporidian infection by protozoa of the genus Plasmodium and Haemoproteus, has been considered one of the most important factors related to the extinction and/or population decline of several species of birds worldwide. In Brazil, despite the large avian biodiversity, few studies have been designed to detect this infection, especially among wild birds in captivity. Thus, the objective of this study was to analyze the prevalence of Plasmodium spp. and Haemoproteus spp. infection in wild birds in captivity in the Atlantic Forest of southeastern Brazil using microscopy and the polymerase chain reaction. Blood samples of 119 different species of birds kept in captivity at IBAMA during the period of July 2011 to July 2012 were collected. The parasite density was determined based only on readings of blood smears by light microscopy. The mean prevalence of Plasmodium spp. and Haemoproteus spp. infection obtained through the microscopic examination of blood smears and PCR were similar (83.19% and 81.3%, respectively), with Caracara plancus and Saltator similis being the most parasitized. The mean parasitemia determined by the microscopic counting of evolutionary forms of Plasmodium spp. and Haemoproteus spp. was 1.51%. The results obtained from this study reinforce the importance of the handling of captive birds, especially when they will be reintroduced into the wild...

Nos últimos anos infecção por protozoários hemosporídeos dos gêneros Plasmodium e Haemoproteus, tem sido considerada um dos fatores mais importantes relacionados com a extinção e / ou declínio da população de várias espécies de aves em todo o mundo. No Brasil, apesar da grande biodiversidade aviária, poucos estudos foram desenvolvidos para detectar a infecção, especialmente entre as aves silvestres mantidas em cativeiro. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar a prevalência de infecção por Plasmodium spp. e Haemoproteus spp. em aves silvestres em cativeiro na Mata Atlântica do sudeste do Brasil, utilizando microscopia convencional e reação em cadeia da polimerase. Amostras de sangue de 119 aves mantidas em cativeiro no Ibama durante o período de julho de 2011 a julho de 2012, foram coletadas. A densidade parasitária foi determinada com base apenas em leituras de esfregaços de sangue por microscopia fotônica. A prevalência média de infecção por Plasmodium spp. e Haemoproteus spp. obtida por exame microscópico de esfregaços sanguíneos e PCR foi semelhante (83,19% e 81,3%, respectivamente), com Caracara plancus e Saltator similis sendo as espécies mais parasitadas. A parasitemia média determinada pela contagem microscópica de formas evolutivas de Plasmodium spp. e Haemoproteus spp. foi de 1,51%. Os resultados obtidos neste estudo reforçam a importância do manejo de aves em cativeiro, especialmente quando serão reintroduzidas na natureza...

Recent advances in the study of avian malaria: an overview with an emphasis on the distribution of Plasmodium spp in Brazil

Avian malaria parasites (Plasmodium) have a worldwide distribution except for Antarctica. They are transmitted exclusively by mosquito vectors (Diptera: Culicidae) and are of particular interest to health care research due to their phylogenetic relationship with human plasmodia and their ability to cause avian malaria, which is frequently lethal in non-adapted avian hosts. However, different features of avian Plasmodium spp, including their taxonomy and aspects of their life-history traits, need to be examined in more detail. Over the last 10 years, ecologists, evolutionary biologists and wildlife researchers have recognized the importance of studying avian malaria parasites and other related haemosporidians, which are the largest group of the order Haemosporida by number of species. These studies have included understanding the ecological, behavioral and evolutionary aspects that arise in this wildlife host-parasite system. Molecular tools have provided new and exiting opportunities for such research. This review discusses several emerging topics related to the current research of avian Plasmodium spp and some related avian haemosporidians. We also summarize some important discoveries in this field and emphasize the value of using both polymerase chain reaction-based and microscopy-based methods in parallel for wildlife studies. We will focus on the genus Plasmodium, with an emphasis on the distribution and pathogenicity of these parasites in wild birds in Brazil.

Os estudos em malária aviária e o Brasil no contexto científico internacional (1907-1945) / Studies of avian malaria and Brazil in the international scientific context (1907-1945)

Aborda a contribuição de cientistas brasileiros aos estudos sobre o protozoário causador da malária. Ao colocar em foco os trabalhos de Henrique Aragão e Wladimir Lobato Paraense, destaca a importância da malária aviária para o entendimento da malária humana e sua terapêutica, a rede de relações científicas estabelecidas, as agendas comuns de pesquisa, as trocas de informações entre pesquisadores, assim como o papel por eles desempenhado no contexto internacional das descobertas científicas.

A expressão de WARP, um alvo potencial para Vacinas de Bloqueio de Transmissão, durante o desenvolvimento sexual de Plasmodium gallinaceum

Durante o ciclo de vida dos parasitos causadores da malária, uma das fases cruciais é o desenvolvimento sexual e a conseqüente invasão do epitélio intestinal do hospedeiro invertebrado. Proteínas dos estágios do ciclo esporogônico podem ser alvos para vacinas Bloqueadoras de Transmissão (TBVs). Uma das proteínas micronemais que já demonstrou ser um alvo promissor para a inibição do desenvolvimento de oocistos e, portanto, da transmissão, é a WARP (von Willebrand Factor A Domain Related Protein), uma proteína secretada, aparentemente envolvida com a adesão e locomoção dos parasitos. Estudos recentes demonstraram que WARP é sujeita à repressão traducional em macrogametócitos de P. berghei, com o seu mRNA sendo silenciado pela proteína DOZI através da formação de uma ribonucleoproteína. Os objetivos deste estudo foram i) Analisar o perfil de expressão da proteína WARP nos estágios sexuais de P. gallinaceum, ii) Comparar o perfil de transcrição de WARP, durante o desenvolvimento sexual, com perfis de alguns genes relacionados à regulação da expressão ou à invasão epitelial, e iii) Avaliar o potencial da proteína WARP como um candidato à vacina através da análise do seu padrão de expressão.

O domínio vWA de PfWARP foi produzido como uma proteína recombinante que foi usada para a produção de anticorpos policlonais. Foram realizados experimentos de microscopia confocal usando estes anticorpos para se detectar WARP em estágios sexuais cultivados de P. gallinaceum. RT-PCR foi usada para detectar WARP e os outros genes estudados a partir de amostras de sangue contendo gametócitos e a partir de intestinos de Aedes fluviatilis infectados, coletados até 24 horas após a alimentação. A proteína WARP pode ser detectada desde os estágios iniciais do desenvolvimento de oocinetos, em zigotos recém-fertilizados, até as formas maduras alongadas. Em zigotos, sua expressão parece ser intra-vesicular e localizada na periferia citoplasmática, próxima à membrana celular, e em oocinetos maduros, WARP apresenta uma distribuição granular com concentração focal na região apical, corroborando sua localização micronemal. Seu transcrito foi detectado, por RT-PCR, em gametócitos de P. gallinaceum. Ainda, o transcrito para a proteína PgDOZI também foi detectado em gametócitos, indicando que a repressão traducional possa ser um mecanismo de regulação gênica também nesta espécie, e que WARP seja, provavelmente, um de seus alvos de regulação. Esta é a primeira vez que a proteína WARP é detectada tão prematuramente durante o desenvolvimento de oocinetos e a primeira evidência de expressão dos genes DOZI, α-Tubulina e MAOP em P. gallinaceum.

Análise de desempenho de mosquitos Aedes fluviatilis (Lutz, 1904) transgênicos expressando a fosfolipase A2 mutada do veneno de abelhas

A manipulação genética de insetos é uma alternativa às formas usuais de interferência, como por exemplo, o uso de inseticidas. Utilizando esta ferramenta podemos inserir, em insetos, genes que possuem a capacidade de bloquear parasitas. Estudos mostraram que a proteína fosfolipase A2 (PLA2) de venenos animais inibia a formação de ocistos de espécies de Plasmodium, se tornando uma ótima candidata para expressão em mosquitos transgênicos a fim de reduzir a transmissão do parasita. Contudo, ao expressar a PLA2 em mosquitos, observou-se que o desempenho biológico dos insetos foi prejudicado. A fim de contornar esse problema foram realizadas mutações no sítio ativo da enzima inativando-a, sem alterar sua capacidade de bloqueio de desenvolvimento de parasitas. Essa molécula de bloqueio (PLA2m) foi expressa em Aedes fluviatilis, vetor em laboratório do parasita causador da malária de aves. Ensaios prévios de avaliação de inibição do parasita e caracterização molecular das linhagens transgênicas (4T, 8T, 9T e 10T) não confirmaram se a PLA2m prejudicava o desempenho dos mosquitos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o desempenho biológico destes mosquitos. Fêmeas da linhagem 8T apresentaram longevidade significativamente maior que o controle; em machos, a longevidade das linhagens 8T, 9T e 10T foi maior que a do controle.

A fecundidade das fêmeas transgênicas foi igual à das fêmeas do grupo controle, porém a fertilidade das linhagens 4T, 8T e 10T foi menor (em porcentagem) que a do controle. A freqüência do transgene se manteve alta por várias gerações, mostrando que o mosquito transgênico se mantém persistente. Houve desvios de razão sexual nos transgênicos, quase sempre para maior proporção de machos. Não houve diferença significativa na susceptibilidade ao inseticida organofosforado Temefós entre as linhagens transgênicas e controle. Com relação à atividade das enzimas que detoxificam inseticidas, apenas a linhagem 4T apresentou atividade de acetilcolinesterase parcialmente alterada em relação ao controle. Entretanto, as outras linhagens mantiveram-se sensíveis. Para a alfa, beta e PNPA esterases, oxidases de função mista e glutationa S-transferase, todas as linhagens transgênicas mantiveram-se sensíveis. Podemos concluir que a PLA2m não interferiu nos parâmetros biológicos avaliados nos mosquitos transgênicos. Estes resultados a colocandom como uma forte candidata para ser expressa em mosquitos anofelinos vetores de parasitas da malária humana

Análise de desempenho de mosquitos Aedes fluviatilis (Lutz, 1904) transgênicos expressando a fosfolipase A2 mutada do veneno de abelhas / Performance Analysis mosquito Aedes fluviatilis (Lutz, 1904) transgenic expressing mutated phospholipase A2 from bee venom

A manipulação genética de insetos é uma alternativa às formas usuais de interferência, como por exemplo, o uso de inseticidas. Utilizando esta ferramenta podemos inserir, em insetos, genes que possuem a capacidade de bloquear parasitas. Estudos mostraram que a proteína fosfolipase A2 (PLA2) de venenos animais inibia a formação de ocistos de espécies de Plasmodium, se tornando uma ótima candidata para expressão em mosquitos transgênicos a fim de reduzir a transmissão do parasita. Contudo, ao expressar a PLA2 em mosquitos, observou-se que o desempenho biológico dos insetos foi prejudicado. A fim de contornar esse problema foram realizadas mutações no sítio ativo da enzima inativando-a, sem alterar sua capacidade de bloqueio de desenvolvimento de parasitas. Essa molécula de bloqueio (PLA2m) foi expressa em Aedes fluviatilis, vetor em laboratório do parasita causador da malária de aves. Ensaios prévios de avaliação de inibição do parasita e caracterização molecular das linhagens transgênicas (4T, 8T, 9T e 10T) não confirmaram se a PLA2m prejudicava o desempenho dos mosquitos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o desempenho biológico destes mosquitos. Fêmeas da linhagem 8T apresentaram longevidade significativamente maior que o controle; em machos, a longevidade das linhagens 8T, 9T e 10T foi maior que a do controle.

A fecundidade das fêmeas transgênicas foi igual à das fêmeas do grupo controle, porém a fertilidade das linhagens 4T, 8T e 10T foi menor (em porcentagem) que a do controle. A freqüência do transgene se manteve alta por várias gerações, mostrando que o mosquito transgênico se mantém persistente. Houve desvios de razão sexual nos transgênicos, quase sempre para maior proporção de machos. Não houve diferença significativa na susceptibilidade ao inseticida organofosforado Temefós entre as linhagens transgênicas e controle. Com relação à atividade das enzimas que detoxificam inseticidas, apenas a linhagem 4T apresentou atividade de acetilcolinesterase parcialmente alterada em relação ao controle. Entretanto, as outras linhagens mantiveram-se sensíveis. Para a alfa, beta e PNPA esterases, oxidases de função mista e glutationa S-transferase, todas as linhagens transgênicas mantiveram-se sensíveis. Podemos concluir que a PLA2m não interferiu nos parâmetros biológicos avaliados nos mosquitos transgênicos. Estes resultados a colocandom como uma forte candidata para ser expressa em mosquitos anofelinos vetores de parasitas da malária humana

A expressão de WARP, um alvo potencial para Vacinas de Bloqueio de Transmissão, durante o desenvolvimento sexual de Plasmodium gallinaceum / The Warp of expression, an potential target to vaccines of transmission of blockade, during the sexual development of Plasmodium gallinaceum

Durante o ciclo de vida dos parasitos causadores da malária, uma das fases cruciais é o desenvolvimento sexual e a conseqüente invasão do epitélio intestinal do hospedeiro invertebrado. Proteínas dos estágios do ciclo esporogônico podem ser alvos para vacinas Bloqueadoras de Transmissão (TBVs). Uma das proteínas micronemais que já demonstrou ser um alvo promissor para a inibição do desenvolvimento de oocistos e, portanto, da transmissão, é a WARP (von Willebrand Factor A Domain Related Protein), uma proteína secretada, aparentemente envolvida com a adesão e locomoção dos parasitos. Estudos recentes demonstraram que WARP é sujeita à repressão traducional em macrogametócitos de P. berghei, com o seu mRNA sendo silenciado pela proteína DOZI através da formação de uma ribonucleoproteína. Os objetivos deste estudo foram i) Analisar o perfil de expressão da proteína WARP nos estágios sexuais de P. gallinaceum, ii) Comparar o perfil de transcrição de WARP, durante o desenvolvimento sexual, com perfis de alguns genes relacionados à regulação da expressão ou à invasão epitelial, e iii) Avaliar o potencial da proteína WARP como um candidato à vacina através da análise do seu padrão de expressão.

O domínio vWA de PfWARP foi produzido como uma proteína recombinante que foi usada para a produção de anticorpos policlonais. Foram realizados experimentos de microscopia confocal usando estes anticorpos para se detectar WARP em estágios sexuais cultivados de P. gallinaceum. RT-PCR foi usada para detectar WARP e os outros genes estudados a partir de amostras de sangue contendo gametócitos e a partir de intestinos de Aedes fluviatilis infectados, coletados até 24 horas após a alimentação. A proteína WARP pode ser detectada desde os estágios iniciais do desenvolvimento de oocinetos, em zigotos recém-fertilizados, até as formas maduras alongadas. Em zigotos, sua expressão parece ser intra-vesicular e localizada na periferia citoplasmática, próxima à membrana celular, e em oocinetos maduros, WARP apresenta uma distribuição granular com concentração focal na região apical, corroborando sua localização micronemal. Seu transcrito foi detectado, por RT-PCR, em gametócitos de P. gallinaceum. Ainda, o transcrito para a proteína PgDOZI também foi detectado em gametócitos, indicando que a repressão traducional possa ser um mecanismo de regulação gênica também nesta espécie, e que WARP seja, provavelmente, um de seus alvos de regulação. Esta é a primeira vez que a proteína WARP é detectada tão prematuramente durante o desenvolvimento de oocinetos e a primeira evidência de expressão dos genes DOZI, α-Tubulina e MAOP em P. gallinaceum.

Exoerythrocytic development of Plasmodium ga llinaceum in primary fibroblast culture of chicken embryo / Desenvolvimento exoeritrocítico de Plasmodium gallinaceum em cultura primária de fibroblasto de embrião de galinha

In this study we assessed the susceptibility of primary fibroblast culture of chicken embryo to infection of P. gallinaceum sporozoites as well as the initial development of exoerithrocytic stages. Fibroblasts were obtained from the chest muscles of chicken embryos and sporozoites were obtained from experimentally infected Aedes fluviatilis salivary glands. After 1h, 3h, 24h, 48h and 72h periods pos-infection, cell cultures were fixed and analyzed both by indirect immunofluorescent-antibody test with anti-circumsporozoite protein monoclonal antibodies and by transmission electron microscopy. Circumsporozoite protein was detected in all parasitic forms. The mean percentage of fibroblasts with adhered or penetrated sporozoites did not significantly increase proportionately to the concentration of parasites in the inoculum, and independently if fetal calf or normal chicken sera were used in the culture medium. It was noted that the longer the incubation time, higher the possibility of the sporozoites to adhere and penetrate to fibroblats. Spozoites were observed penetrating in the fibroblast after 3h incubation when 0.68% of the cells had adhered parasites. Differentiation and development of the exoerythrocytic forms was observed after 24h incubation, when an average of 0,14% of the parasites have already invaded the cells. Developing parasites were found until 72h, when only 0.04% of fibroblasts were infected. Fibroblast cell culture seems to be a valuable experimental tool for in vitro investigation of the exoerytrocytic cycle of P. gallinaceum.

No presente estudo, avaliamos a susceptibilidade de cultura primária de fibroblastos de embrião de galinha à infecção por esporozoítas de P. gallinaceum, assim como o desenvolvimento de estágios do ciclo exoeritrocítico. Fibroblastos foram obtidos a partir da musculatura do peito de embriões de galinha e esporozoítas foram obtidos de glândulas salivares de Aedes fluviatilis experimentalmente infectados. Após períodos de 1h, 3h, 24h, 48h e 72h após a infecção, culturas de células foram fixadas e analisadas através de imunofluorescência indireta empregando-se anticorpos monoclonais contra a proteína circum-esporozoíta e microscopia eletrônica de transmissão. Proteína circum-esporozoíta foi detectada em todas as formas parasitárias. O percentual médio de fibroblastos com esporozoítas aderidos ou já penetrados não aumentou proporcionalmente com a concentração de parasitos no inóculo e independeu se o soro utilizado no cultivo celular era soro bovino fetal ou soro de galinha normal. Foi observado que, quando maior é o período de incubação, maior é a possibilidade dos esporozoítas aderirem e penetrarem nos fibroblastos. Esporozoítas foram observados penetrando em fibroblastos depois de 3h de incubação, quando 0,68% das células tinham parasitos aderidos. A diferenciação e o desenvolvimento das formas exoeritrocíticas foram observados após 24h de incubação, quando somente 0.04% dos fibroblastos achavam-se infectados. A cultura primária de fibroblastos de galinha parece ser um valioso modelo experimental para a investigação in vitro do ciclo exoeritrocítico do P. gallinaceum.

Change of serum transferrin receptor due to malarial infection, an experiment in Plasmodium gallinaceum infected chicken model.

BACKGROUND & OBJECTIVES: The serum transferrin receptor (sTfR) concentration in an individual reflects the extent of erythropoietic activity and is considered as an useful marker of iron deficiency independent of concurrent inflammation or infection. However, data on the impact of malaria on this parameter are ambiguous. METHODS: Here we performed an animal experiment to study the chronological change of serum transferrin receptor due to infection of Plasmodium gallinaceum. In this pilot study, we performed control experimental infection of P. gallinaceum to four newborn chicken from the same batch. We collected the venous blood samples from all chicken on Day 7 and 14. All samples were analysed for sTfR level by the immunoturbidimetric assay. RESULTS: The average level of sTfR level of the control chicken was 1.24 +/- 1.58 mg/L (range 0.18 to 3.52 mg/L). The average level of sTfR level of the experimental chicken on Day 7 was 5.42 +/- 2.19 mg/L (range 3.22 to13.94 mg/L). CONCLUSION: Although the trend of increase was observed but no significance was observed (p > 0.05). The results from this pilot study can be a good basic data for the further study in this area.

Obtenção e caracterização molecular de mosquitos Aedes fluviatilis transgênicos para o bloqueio da malária aviária / Attainment and molecular characterization of transgenics Aedes fluviatilis mosquitoes for the blockade of the avian malaria

Teve como objetivo estudar duas moléculas antiparasíticas (gomesina e fosfolipase A2 (PLA2m)) como candidatas à expressão em mosquitos. O peptídeo antimicrobiano gomesina da aranha Acanthoscurria gomesiana, foi capaz de inibir o desenvolvimento das formas sanguíneas das cepas W2 e 3D7-GFP de P. falciparum, com valores de IC50 de 75,8 e86,6 (...). Anteriormente, experimentos in vitro, mostraram que aenzima fosfolipase A2 (PLA2) isolada do veneno de abelha apresentou ação inibitória sobre o desenvolvimento de P. falciparum e P. gallinaceum, mas apresentou efeitos deletérios em mosquitos transgênicos, quando na sua forma ativa. Neste trabalho, expressamos em bactérias e purificamos uma forma mutante da proteína (PLA2m). Na concentração de 0,1(...) a proteína recombinante foi capaz de reduzir em até 79 por cento o número de oocistosde P. gallinaceum em mosquitos Aedes fluviatilis, quando adicionada ao sangue de aves domésticas (Gallus gallus domesticus) infectadas. Para a geração de mosquitostransgênicos utilizamos o promotor da proteína 1 da matriz peritrófica de An. gambiae (AgPer1) para dirigir a expressão do gene da PLA2m. A construção do gene híbrido(AgPer1/PLA2m) foi inserida no elemento de transposição piggyBac, que contém como marcador, o gene da proteína verde fluorescente melhorada (EGFP). Pela microinjeção de770 embriões, foram formadas 15 famílias e, após a seleção de cerca de 22.000 larvas foram obtidas quatro linhagens transgênicas, representando uma eficiência na transformação de 27 por cento. A expressão do EGFP foi observada no tubo neural e olhos de larva, pupa e adulto. Utilizando iniciadores específicos, confirmamos, pela PCR, a presença dos genes EGFP (700pb) e PLA2m (500bp). A produção do RNAm da PLA2m foi específicano intestino de fêmeas, não variando após a alimentação sanguínea. Por microscopia confocal detectamos a presença da proteína PLA2m no intestino dos mosquitostransgênicos. Além disso, ensaios de bloqueio ao parasita mostrar.

Effect of the Aedes fluviatilis saliva on the development of Plasmodium gallinaceum infection in Gallus (gallus) domesticus

Effect of Aedes fluviatilis saliva on the development of Plasmodium gallinaceum experimental infection in Gallus (gallus) domesticus was studied in distinct aspects. Chickens subcutaneously infected with sporozoites in the presence of the mosquito salivary gland homogenates (SGH) showed higher levels of parasitaemia when compared to those ones that received only the sporozoites. However, the parasitaemia levels were lower among chickens previously immunized by SGH or non-infected mosquito bites compared to the controls, which did not receive saliva. High levels of anti-saliva antibodies were observed in those immunized chickens. Moreover, 53 and 102 kDa saliva proteins were recognized by sera from immunized chickens. After the sporozoite challenge, the chickens also showed significant levels of anti-sporozoite antibodies. However, the ability to generate anti-sporozoites antibodies was not correlated to the saliva immunization. Our results suggest that mosquito saliva components enhance P. gallinaceum parasite development in naive chickens. However, the prior exposure of chickens to salivary components controls the parasitemia levels in infected individuals.

Prevalência e variação dos estádios eritrocíticos do plasmodium (Novyella) juxtanucleare em Gallus gallus sob condições naturais, no período de um ano / Prevalence and variation of the erytrocytic forms of plasmodium (novyella) juxtanucleare in Gallus gallus about natural conditions, in the period of one year

The avian malaria caused by Plasmodium juxtanucleare in Gallus gallus, is a tipical plasmodiose from Brazilian gallinaceous. This disease can causes morbidy and mortality in its vertebrate hosts. This work was conducted at Boa Vista farm, Municipality of Santa Bárbara do Tugúrio, Minas Gerais, Brazil and the ours objectives were to evaluate the hight prevalence found in previous studies and to accompany the variation of the erytrocytic forms during one year. The bloods smears, dyed with Giemsa were examined in microscopy immersion. Twenty five half-breed fowls were accompany duting one year, monthly (from November/00 to May/01) and biweekly (from June/01 to October/01). The erytrocytic forms were registered and quantified by the observation of 100 microscopic fields. Was verified a prevalence of 100 por ciento by P. juxtanuclerare, but there wasn't statistics correlation between the increase of the erytrocytic forms during the year. The trophozoites were the more abundant form found in this studie.

Aspectos do parasitismo de Plasmodium (Novyella) juxtanucleare Versiani & Gomes, 1941 em Gallus gallus L., 1758 em criação rústica no município de Santa Bárbara do Tugúrio - MG / Aspects of the parasitism of Plasmodium (Novyella) juxtanucleare Versiani & Gomes, 1941 in Gallus gallus L. 1758, in a rustic raising in Santa Bárbara do Tugúrio - MG

Com o objetivo de se ampliar o conhecimento sobre a ocorrência do parasitismo por Plasmodium (Novyella) juxtanucleare Versiani e Gomes, 1941, em aves da espécie Gallus gallus L. 1758 no estado de Minas Gerais, realizou-se um levantamento de prevalência no município de Santa Bárbara do Tugúrio (21°15'12", 43°27'16"). Foram examinados esfregaços sangüíneos, corados pelo Giemsa e observados em microscopia fotônica em imersão, de 30 aves mestiças, adultas, de criação rústica, mantidas extensivamente, com peso médio de 2,18kg ± 0,34, sendo 29 fêmeas. As formas eritrocitárias foram registradas e quantificadas pela observação de 50 campos microscópicos assinalando-se o número de eritrócitos parasitados. A prevalência foi de 100 por cento e a intensidade média de 7,93 parasitos por lâmina nos campos examinados. Observaram-se em 33,3 por cento dos esfregaços de um a cinco parasitos, 40 por cento de seis a 10 e 26,6 por cento acima de 10. Não foram observados casos de poliparasitismo.