Megacariopoyesis humana in vitro: determinación de la concentración óptima de trombopoyetina / In vitro human megacaryocytopoiesis: determination of thrombopoietin optimal concentration / Megacariópoiesis humana in vitro: determinação da concentração ótima da trombopoietina

El estudio de la megacariopoyesis humana se ha visto obstaculizado por la relativa escasez de megacariocitos en la médula ósea (0,05-0,2 % de las células medulares), lo que ha llevado a la optimización de protocolos de expansión in vitro a partir de precursores de diversos orígenes (cordón umbilical, médula ósea y sangre periférica con o sin movilización previa). Los cultivos celulares a partir de precursores han permitido la producción y el estudio tanto de megacariocitos así como de proplaquetas y plaquetas Sin embargo, la producción in vitro óptima de megacariocitos que culminen todos los estadios de diferenciación es un reto aún no resuelto. En este trabajo reportamos los hallazgos concernientes a la determinación de las condiciones y concentraciones de trombopoyetina para lograr una óptima relación entre la cantidad de trombopoyetina empleada y el porcentaje y grado de diferenciación megacariocítica en muestras obtenidas de cinco donantes alogénicos aceptados para trasplante de médula ósea.

The study of human megakaryocytopoiesis has been hampered by the relative scarcity of megakaryocytes in bone marrow (0.05-0.2 % of medullary cells), which has led to the optimization of protocols of in vitro expansion of precursors from diverse sources (umbilical cord, bone marrow and peripheral blood with or without previous mobilization). Cell cultures from different precursors have allowed the production and study of megakaryocytes as well as proplatelets and platelets. However, the in vitro production of megakaryocytes that culminate all stages of differentiation is a challenge that has not yet been resolved. In this work we report the findings related to the determination of thrombopoietin treatment conditions and concentrations to achieve an optimal relationship between the amount of thrombopoietin and the percentage and degree of megakaryocytic differentiation in five allogeneic donors that were accepted for bone marrow transplantation.

O estudo da megacariopoiese humana tem sido dificultado pela relativa escassez de megacariócitos na medula óssea (0,05-0,2 % das células medulares), o que levou à otimização dos protocolos de expansão in vitro a partir de precursores de diversas origens (cordão umbilical, medula óssea e sangue periférico com ou sem mobilização prévia). Culturas de células a partir de precursores permitiram a produção e o estudo tanto de megacariócitos e de proplaquetas e plaquetas. No entanto, a produção ótima in vitro de megacariócitos que culminam em todas as fases de diferenciação é um desafio ainda não resolvido. Neste trabalho, relatamos as descobertas relativas à determinação das condições e concentrações de trombopoietina para obter uma relação ótima entre a quantidade de trombopoietina usada e a taxa e o grau de diferenciação megacariocítica em amostras obtidas de cinco doadores alogênicos aceitos para transplante de medula óssea.

Effects of low molecular weight heparin on alveolar bone loss in wistar rats

Abstract This study aimed to assess the effects of low molecular weight heparin (LMWH) on alveolar bone loss (ABL), blood count, and counting of megakaryocytes and adipocytes in male Wistar rats. Forty male 60-day Wistar rats were randomly divided into four groups: Control (C), Periodontal Disease (PD), Heparin (Hp) and Heparin + Periodontal Disease (Hp+PD). LMWH was applied for 60 days at doses of 1 ml/kg/day. Blood samples were collected at baseline, 30 and 60. On day-49, PD and Hp+PD groups were subjected to ligature-induced periodontitis around second upper right molar. The left side was assessed as spontaneous alveolar bone loss. Mean ABL in the side with ligature showed significantly different between C (0.35±0.07 mm) and Hp+DP (0.49±0.09 mm) groups (p<0.001), between PD (0.55±0.11 mm) and Hp (0.32±0.06 mm) groups (p<0.001) and between Hp and Hp+DP groups (p<0.001). No significant differences were found among groups for ABL in the side without ligature. Animal weight, food intake, and water consumption showed no statistically significant difference among groups. Megakaryocytes and adipocytes were counted using optical microscopy and no statistically significant differences were found. Within-groups, there were an increase and a decrease, respectively, in the counting of lymphocytes (p=0.005 for C and p=0.009 for Hp+PD groups only) and leukocytes (p=0.003 for C, p=0.001 for PD, p=0.002 for Hp, and p<0.001 for Hp+PD groups). There was no decrease in the number of platelets in the three collection periods. LMWH was not able to affect ABL, but it may change the blood counting, especially increasing lymphocytes.

Resumo O presente estudo objetivou verificar o efeito da heparina de baixo peso molecular (HBPM) sob a perda óssea alveolar (POA), contagem de células sanguíneas, megacariócitos e adipócitos em ratos Wistar machos. Quarenta ratos Wistar de 60 dias foram randomicamente divididos em quatro grupo: Controle (C), Doença Periodontal (DP), Heparina (Hp) e Heparina + Doença Periodontal (Hp+DP). HBPM foi aplicada durante 60 dias em doses de 1 mL/kg/dia. Coletas sanguíneas foram realizadas nos dias 0, 30 e 60. No dia 49, os grupos DP e Hp+DP receberam indução de doença periodontal por ligadura ao redor do segundo molar superior direito. No lado esquerdo, verificou-se perda óssea alveolar espontânea. A média de POA no lado com ligadura mostrou-se estatisticamente diferente entre os grupos C (0,35±0,07 mm) e Hp+PD (0,49±0,09 mm) (p<0,001), entre os grupos DP (0,55±0,11 mm) e Hp (0,32±0,06 mm) (p<0,001) e entre os grupos Hp e Hp+DP (p<0,001). Nenhuma diferente significativa foi observada entre os grupos no lado sem ligadura. Peso dos animais, consumo de ração e ingestão de água não mostraram diferenças significativas entre os grupos. Megacariócitos e adipócitos foram contados por microscopia óptica e nenhuma diferença significativa foi encontrada. Dentro dos grupos, houve um aumento e uma diminuição, respectivamente, na contagem de linfócitos (p=0,005 no grupo C e p=0,009 no grupo Hp+DP somente) e leucócitos (p=0,003 no grupo C, p=0.001 no grupo DP e p=0,002 no grupo Hp e Hp+DP). Não houve diminuição no número de plaquetas nos três períodos de coleta. HBPM não foi capaz de modificar a POA, porém modificou a contagem de células sanguíneas, especialmente aumentando o número de linfócitos.

Congenital amegakaryocytic thrombocytopenia (CAMT): a case report with review of literature.

Congenital amegakaryocytic thrombocytopenia (CAMT) is an uncommon cause of thrombocytopenia in children. Mutations in the thrombopoietin (Tpo) receptor gene C-mpl were found to be the likely cause of thrombocytopenia and complete marrow failure. Two types are identified: CAMT with or without congenital anomalies. We report a case of the latter type for its extreme rarity.