Antimicrobial resistance of Staphylococcus spp. from small ruminant mastitis in Brazil / Resistência antimicrobiana de Staphylococcus spp. de mastite de pequenos ruminantes no Brasil

The study aimed to determine the antimicrobial resistance patterns and to identify molecular resistance markers in Staphylococcus spp. (n=210) isolated from small ruminant mastitis in Brazil. The antimicrobial resistance patterns were evaluated by the disk diffusion test and by detection of the presence of mecA, blaZ, ermA, ermB, ermC and msrA genes by PCR. The efflux pump test was performed using ethidium bromide and biofilm production was determined by Congo red agar test along with PCR for detection of the icaD gene. The isolates were most resistant to amoxicillin (50.0%), streptomycin (42.8%), tetracycline (40.4%), lincomycin (39.0%) and erythromycin (33.8%). Pan-susceptibility to all tested drugs was observed in 71 (33.8%) isolates and 41 Staphylococcus isolates were positive for the efflux pump. Although phenotypic resistance to oxacillin was observed in 12.8% of the isolates, none harbored the mecA gene. However, 45.7% of the isolates harbored blaZ indicating that beta-lactamase production was the main mechanism associated with staphylococci resistance to beta-lactams in the present study. The other determinants of resistance to antimicrobial agents ermA, ermB, ermC, and msrA were observed in 1.4%, 10.4%, 16.2%, and 0.9% of the isolates, respectively. In addition, the icaD gen was detected in 32.9% of the isolates. Seventy three isolates (54 from goats and 19 from sheep) were negative for all resistance genes tested and 69 isolates presented two or more resistance genes. Association among blaZ, ermA, ermB, ermC and efflux pump were observed in 17 isolates, 14 of which originated from goats and three from sheep. The data obtained in this study show the resistance of the isolates to beta-lactamics, which may be associated with the use of antimicrobial drugs without veterinary control.

O presente trabalho teve como objetivo determinar os padrões de resistência a agentes antimicrobianos e identificar marcadores moleculares de resistência em Staphylococcus spp. (n=210) isolados de mastite de pequenos ruminantes no Brasil. Os padrões de resistência a agentes antimicrobianos foram avaliados pelo teste de difusão em disco e pela detecção da presença dos genes mecA, blaZ, ermA, ermB, ermC e msrA via PCR. O teste da bomba de efluxo foi realizado utilizando brometo de etídio e a produção de biofime foi determinada pelo teste do vermelho congo em paralelo com o PCR para detecção do gene icaD. Os isolados foram mais resistentes a amoxicilina (50,0%), estreptomicina (42,8%), tetraciclina (40,4%), lincomicina (39,0%) e eritromicina (33,8%). Setenta e um (33,8%) isolados foram sensíveis a todas as drogas testadas e 41 foram positivos para a bomba de efluxo. Embora a resistência fenotípica a oxacilina tenha sido observada observada em 12,8% dos isolados, nenhum possuiu o gene mecA. Entretanto, 45,7% dos isolados continham a gene blaZ, indicando que a produção de beta-lactamases foi o principal mecanismo associado com a resistência dos Staphylococcus aos beta-lactâmicos. Os outros determinantes de resistência a agentes antimicrobianos ermA, ermb, ermC e msrA foram observados em 1,4%, 10,4%, 16,2% e 0,9% dos isolados respectivamente. Além disso, o gene icaD foi detectado em 32,9% dos isolados. Setenta e três isolados (54 de cabras e 19 de ovelhas) foram negativos para todos os genes de resistência testados e 69 isolados apresentaram dois ou mais genes de resistência. A associação entre blaZ, ermA, ermB, ermC e bomba de efluxo foi observada em 17 isolados dos quais 14 eram oriundos de cabras e três de ovelhas. Os dados obtidos no presente estudo indicam a resistência dos isolados aos beta-lactâmicos, o que pode estar associado ao uso sem controle veterinário destas drogas nos animais.

Evaluation of the humoral immune response in BALB/c mice immunized with a naked DNA vaccine anti-methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) is the major pathogen involved in nosocomial infections, leading to high rates of morbidity and mortality in hospitals worldwide. The methicillin resistance occurs due to the presence of an additional penicillin-binding protein, PBP2a, which has low affinity for b-lactam antibiotics. In the past few years, vancomycin has been the only antibiotic option for treatment of infections caused by multiresistant MRSA; however, reports of vancomycin-resistant strains have generated great concerns regarding the treatment to overcome these infections. In the present study, we report preliminary results regarding the humoral immune response generated in BALB/c mice by two different doses of naked DNA vaccine containing an internal region, comprising the serine-protease domain, of the PBP2a of MRSA. The immunization procedure consisted of four immunizations given intramuscularly within 15-day intervals. Blood was collect weekly and anti-PBP2a-specific antibodies were screened by ELISA. BALB/c mice immunized with DNA vaccine anti-PBP2a have shown higher antibody titers mainly after the fourth immunization, and intriguingly, no correlation between the humoral immune response and DNA dose was observed. Our results suggest that the DNA vaccine anti-PBP2a induced an immune response by production of specific antibodies anti-MRSA in a non-dose-dependent manner, and it could represent a new and valuable approach to produce specific antibodies for passive immunization to overcome MRSA infections.

Determinación de los estafilococos meticilina resistentes para el uso racioanl de vancomicina / Determination of methycillin-resistant staphylococci and rational use of vancomycin

Se realió un estudio de 100 cepas de estafilococos procedentes de hemocultivos y cultivos de secreciones, utilizando los procedimientos y criterios del Comité Nacional de Estánderes para el Laboratorio Clínico (NCCLS, National Committee for Clinical Laboratory Standars, 55 cepas estudiadas fueron de S. aureus y 45 cepas de Staphylococcus coagulasanegativos, de ellas 47 por ciento fueron de S. epidermidis. Se encontró resistencia a la oxacilina en el 60 por ciento de las cepas de S. aureus y en 57 por ciento de S. epidermidis. La resistencia intrínseca real a meticilina, representada por la oxacilina, fue de 58 por ciento para S. aureus., 19 por ciednrto para S. epidermidis y 8 por ciento para los otros estafilococos coagulasanegativos. Se concluye que los estafilococos meticilina-resistentes están en aumento costante edn el Hospital Rebagliati y qaue los Stahylococos coagulasanegativos, que eran considerados no patógenos, en la actualidad son un importante agente de infección nosocomial por lo que es necesario ahora la valoración de la resistencia verdadera de los estafilococos para orientar la terapéutica y el uso racional de vancomicina

Bacteriemias por staphylococcus aureus en pediatría / Staphylococcus aureus bacteremias in pediatric patients

Introducción.Staphylococcus aureus ha permanecido como un agente patógeno que infecta y coloniza a pacientes hospitalizados y con alteraciones inmunológicas,así como a huéspedes inmunocompetentes provenientes de la comunidad.Con el objetivo de analizar las caracteristícas epidemiológicas,microbiológicas,clínicas,complicaciones y mortalidad se analizaron 35 episodios de bacteriemia durante el año 1990.Resultados.la mediana de edad de los pacientes fue de 36 meses.El 80 por ciento tenía patología subyacente,siendo las neoplasia las más frecuentes.Aproximadamente la mitas(18/35)de las bacteriemias fue de origen intrahospitalario.En 9 pacientes se detectó S.aureus meticilino-resistente.Ninguna cepa extrahospitalaria tuvo ese patrón de sensibilidad.El 48 por ciento de los pacientes presentó localización secundaria,siendo la osteoarticular la más frecuente.La mortalidad fue del 23 por ciento esta tasa no mostró diferencias significativas según edad,sexo y lugar de adquisición de la infección.La presencia de resistencia a la meticilina se correlacionó con una mayor mortalidad,sin alcanzar significancia estadística