Biopanning the mimotopes of aflatoxin B1 and their immunogenicity / Panning de mimotopo aflatoxina B1 e sua imunogenicidade

Utilizando um anticorpo monoclonal contra a aflatoxina B1 (AFB1) como ligante, foi identificado um mimotopo específico de aflatoxina B1 após se realizarem quatro ciclos de seleção biológica de 7-peptídeos aleatórios em biblioteca de fago exibida. O mimotopo é denominado P10, e sua sequência de aminoácidos é YRRHEKD. O soro imunológico de ratos Balb/c imunizados com P10 foi especificamente ligado à aflatoxina B1-albumina, indicando que o anticorpo era específico ao AFB1. Esses resultados sugerem que é possível desenvolver a vacina baseada em mimotopo associado à toxina.(AU)

O probiótico Saccharomyces boulardii modula a resposta de IgG2a em camundongos expostos aos antígenos de Leishmania infantum / Probiotic Saccharomyces boulardii modulates IgG2a response in mice exposed to Leishmania infantum antigens

O objetivo do presente estudo foiavaliar os efeitos do probiótico Saccharomyces boulardii na modulação da resposta imune humoral de animais expostos a antígenos de Leishmania infantum. Para isso, 16 camundongos BALB/c foram imunizados com antígeno particulado de Leishmania infantum e divididos em dois grupos experimentais, um composto por animais suplementados e outro por animais não suplementados com o probiótico. Amostras de sangue dos animais foram colhidas semanalmente durante o período experimental e submetidas ao Ensaio da Imunoabsorbância Ligado à Enzima indireto para avaliação dos títulos de IgG totais e o perfil dos isotipos de IgG produzidos (IgG1 e IgG2a). A suplementação com o probiótico não exacerbou a produção de IgG total em comparação ao grupo controle, não havendo diferenças significativas entre os dois grupos. Porém, as soroconversões de IgG2a foram mais elevadas no grupo suplementado, no qual registrou-se um aumento de 1,46 vezes no final do experimento. Assim,a suplementação com S. boulardii foi capaz de modular a resposta de IgG2a/IgG1 nos animais expostos aos antígenos de Leishmania infantum.

The aim of the present study was to evaluate the effects of the Saccharomyces boulardii probiotic on the modulation of humoral immune response in animals exposed to Leishmania infantum antigens. For this, 16 BALB/c mice were immunized with Leishmania infantum particulate antigen and divided into two experimental groups, one consisting of supplemented animals and the other not probiotic supplemented animals. Blood samples from the animals were taken weekly during the experimental period and subjected to the Indirect Enzyme-Linked Immunosorbance Assay for evaluation of total IgG titers and the profile of the produced IgG isotypes (IgG1 and IgG2a). Probiotic supplementation did not exacerbate total IgG production compared to the control group, with no significant differences between the two groups. However, IgG2a seroconversions were higher in the supplemented group, which showed a 1.46-fold increase at the end of the experiment. Thus, supplementation with S. boulardii was able to modulate the IgG2a/IgG1 response in animals exposed to Leishmania infantum antigens.

Effect of phospholipase A2 inhibitors during infection caused by Leishmania (Leishmania) amazonensis

Background: Lipid metabolites play an important role in parasite differentiation and virulence. Studies have revealed that Leishmania sp. uses prostaglandins to evade innate barriers, thus enabling the parasites to survive inside immune cells. Despite the role of the enzyme Phospholipase A2 (PLA2) in prostaglandins production, few studies have investigated the role of parasite PLA2 during the interaction between L. (L.) amazonensis and the host (in vitro and in vivo) immune cells. Methods: In the present work, the leishmanicidal effect of PLA2 inhibitors, methyl arachidonyl fluorophosphonate (MAFP), bromoenol lactone (BEL) and aristolochic acid (AA) were investigated in vitro (promastigote and intracellular amastigote forms of L. (L.) amazonensis) and during in vivo infection using BALB/c mice. Results: The aforementioned inhibitors were deleterious to promastigote and amastigote forms of the L. (L.) amazonensis and were non-toxic to peritoneal macrophages from BALB/c mice. L. (L.) amazonensis-infected BALB/c mice treated with the inhibitor BEL presented decreased lesion size and skin parasitism; however, BEL treatment induced hepatotoxicity in BALB/c mice. Conclusions: Results presented herein suggested that PLA2 inhibitors altered L. (L.) amazonensis viability. In spite of liver toxicity, treatment with BEL was the most selective compound in vitro, as well in vivo, resulting in lower skin parasitism in the infected mice. These findings corroborate the role of PLA2 in parasite virulence and maintenance in vertebrate hosts, and suggest that molecules structurally related to BEL should be considered when planning compounds against Leishmania sp.

Avaliação parasitológica e de parâmetros celulares e humorais da resposta imune associados à infecção e reinfecção pelo Schistosoma mansoni nas linhagens murinas C57BL/6 e BALB/c / Evaluating and parasitological parameters cellular and humoral immune response associated with infection and reinfection with Schistosoma mansoni in murine strains C57BL / 6 and BALB / c

Com o objetivo de gerar novos conhecimentos acerca da interação parasito-hospedeiro, o presente trabalho avaliou parâmetros parasitológicos e imunológicos associados ao desenvolvimento do parasito no hospedeiro definitivo após a infecção e reinfecção pelo S. mansoni, nas linhagens murinas BALB/c e C57BL/6. Para tanto, a avaliação dos parâmetros parasitológicos foi realizada utilizando animais das linhagens BALB/c e C57BL/6 infectados e reinfectados. Os animais infectados e reinfectados, 50 dias pós-infecção/reinfecção foram perfundidos para avaliação da carga parasitária. Dois dias antes da perfusão foi realizado o exame de fezes utilizando as metodologias HPJ e Eclosão de Miracídios. O número de ovos presentes no intestino e no fígado dos animais foram determinados através da digestão dos órgãos utilizando KOH 10%. Além disso, o peso dos animais foi avaliado durante todo o período de infecção, tratamento e reinfecção. Para realizar a avaliação da resposta celular, o baço de camundongos, de ambas as linhagens, infectados, infectados/tratados e reinfectados, bem como de camundongos não infectados, foram retirados nos dias 3, 7, 15, 30, 60, 110 e 155 pós-infecção/reinfecção para a obtenção e cultura de esplenócitos que foram estimulados, ou não, com SEA, extrato de verme adulto (AWA) e Ag. de Esquistossômulo. Os sobrenadantes das culturas dos esplenócitos foram coletados após 24 (para a quantificação das citocinas IL-4 e TNF-α) e 72 horas (para as citocinas IL-10, IL-17, IL-13, IFN-γ) de incubação. Os soros dos animais infectados e reinfectados, e de seus controles, foram obtidos nos dias 3, 7, 15, 30, 60 e 110 pós-infecção/reinfecção para a avaliação da resposta humoral.

Foram dosados os anticorpos IgG total, e seus subtipos IgG1 e IgG2c, específicos para SEA, AWA e Ag. de esquistossômulo, através da técnica de ELISA. Quanto à avaliação parasitológica, não foi possível observar diferença significativa em relação à carga parasitária pós-infecção/reinfecção em camundongos de mesma linhagem, bem como, entre os animais de linhagens diferentes. Também não foi observada diferença estatisticamente significativa no número de ovos/miracídios nas fezes de camundongos pós-infecção ou pós-reinfecção em ambas as linhagens. Em relação ao número de ovos retidos nos órgãos, observou-se diferença estatisticamente significativa apenas no fígado. Nesse órgão, os animais BALB/c reinfectados apresentaram um reduzido número de ovos em relação aos animais BALB/c infectados e aos C57BL/6 reinfectados. Quanto à produção das imunoglobulinas, os camundongos C57BL/6 reinfectados apresentaram maior produção de IgG2c e os animais BALB/c reinfectados maior produção de IgG1. Camundongos C57BL/6 apresentaram um perfil misto de produção de citocinas do tipo 1/tipo 2, com produção das citocinas IL-10 e IL-13 ao longo de toda a infecção/reinfecção, sendo também considerável a produção das citocinas IFN-γ e TNF-α.. Os animais BALB/c produziram as citocinas IL-13 e IL-10 ao longo de toda a infecção/reinfecção, porém foram os únicos a produzirem a citocina IL-4 durante todo o tempo de infecção e reinfecção. Os resultados do nosso trabalho puderam apontar as principais diferenças imunológicas e parasitológicas entre as linhagens murinas BALB/c e C57BL/6 durante a infecção e/ou reinfecção pelo Schistosoma mansoni contribuindo para a geração de novos conhecimentos acerca dos mecanismos imunológicos desencadeados em resposta ao desenvolvimento do parasito no hospedeiro definitivo tanto durante infecção quanto reinfecção.

Avaliação parasitológica e de parâmetros celulares e humorais da resposta imune associados à infecção e reinfecção pelo Schistosoma mansoni nas linhagens murinas C57BL/6 e BALB/c

Com o objetivo de gerar novos conhecimentos acerca da interação parasito-hospedeiro, o presente trabalho avaliou parâmetros parasitológicos e imunológicos associados ao desenvolvimento do parasito no hospedeiro definitivo após a infecção e reinfecção pelo S. mansoni, nas linhagens murinas BALB/c e C57BL/6. Para tanto, a avaliação dos parâmetros parasitológicos foi realizada utilizando animais das linhagens BALB/c e C57BL/6 infectados e reinfectados. Os animais infectados e reinfectados, 50 dias pós-infecção/reinfecção foram perfundidos para avaliação da carga parasitária. Dois dias antes da perfusão foi realizado o exame de fezes utilizando as metodologias HPJ e Eclosão de Miracídios. O número de ovos presentes no intestino e no fígado dos animais foram determinados através da digestão dos órgãos utilizando KOH 10%. Além disso, o peso dos animais foi avaliado durante todo o período de infecção, tratamento e reinfecção. Para realizar a avaliação da resposta celular, o baço de camundongos, de ambas as linhagens, infectados, infectados/tratados e reinfectados, bem como de camundongos não infectados, foram retirados nos dias 3, 7, 15, 30, 60, 110 e 155 pós-infecção/reinfecção para a obtenção e cultura de esplenócitos que foram estimulados, ou não, com SEA, extrato de verme adulto (AWA) e Ag. de Esquistossômulo. Os sobrenadantes das culturas dos esplenócitos foram coletados após 24 (para a quantificação das citocinas IL-4 e TNF-α) e 72 horas (para as citocinas IL-10, IL-17, IL-13, IFN-γ) de incubação. Os soros dos animais infectados e reinfectados, e de seus controles, foram obtidos nos dias 3, 7, 15, 30, 60 e 110 pós-infecção/reinfecção para a avaliação da resposta humoral.

Foram dosados os anticorpos IgG total, e seus subtipos IgG1 e IgG2c, específicos para SEA, AWA e Ag. de esquistossômulo, através da técnica de ELISA. Quanto à avaliação parasitológica, não foi possível observar diferença significativa em relação à carga parasitária pós-infecção/reinfecção em camundongos de mesma linhagem, bem como, entre os animais de linhagens diferentes. Também não foi observada diferença estatisticamente significativa no número de ovos/miracídios nas fezes de camundongos pós-infecção ou pós-reinfecção em ambas as linhagens. Em relação ao número de ovos retidos nos órgãos, observou-se diferença estatisticamente significativa apenas no fígado. Nesse órgão, os animais BALB/c reinfectados apresentaram um reduzido número de ovos em relação aos animais BALB/c infectados e aos C57BL/6 reinfectados. Quanto à produção das imunoglobulinas, os camundongos C57BL/6 reinfectados apresentaram maior produção de IgG2c e os animais BALB/c reinfectados maior produção de IgG1. Camundongos C57BL/6 apresentaram um perfil misto de produção de citocinas do tipo 1/tipo 2, com produção das citocinas IL-10 e IL-13 ao longo de toda a infecção/reinfecção, sendo também considerável a produção das citocinas IFN-γ e TNF-α.. Os animais BALB/c produziram as citocinas IL-13 e IL-10 ao longo de toda a infecção/reinfecção, porém foram os únicos a produzirem a citocina IL-4 durante todo o tempo de infecção e reinfecção. Os resultados do nosso trabalho puderam apontar as principais diferenças imunológicas e parasitológicas entre as linhagens murinas BALB/c e C57BL/6 durante a infecção e/ou reinfecção pelo Schistosoma mansoni contribuindo para a geração de novos conhecimentos acerca dos mecanismos imunológicos desencadeados em resposta ao desenvolvimento do parasito no hospedeiro definitivo tanto durante infecção quanto reinfecção.

Toxoplasma gondii: humoral and cellular immune response of BALB/c mice immunized via intranasal route with rTgROP2 / Toxoplasma gondii: avaliação da resposta imune humoral e celular de camundongos BALB/c imunizados pela via nasal com rTgROP2

TgROP2 is an intracellular protein associated with rhoptries of Toxoplama gondii and an antigen component of a candidate vaccine for toxoplasmosis. The purpose of the present study was to evaluate the efficacy of rTgROP2 to stimulate humoral and cellular immune responses in BALB/c mice via intranasal injection. TgROP2 partial coding sequence was (196-561) amplified by PCR from genomic T. gondii RH strain DNA and cloned into the pTrcHis expression vector. Escherichia coli Rosetta 2 cells transformed with pTrcHis-TgROP2 showed high levels (~1 mg.mL-1) of recombinant protein after 4 hours of IPTG induction. Recombinant TgROP2 exhibited an apparent Mr equal to 54 kDa. In order to test immunogenicity of the recombinant protein, 10 BALB/c mice received 10 µg of rROP2 protein + 10 µg of Quil-A via intranasal injection. Doses were administered at days 0, 21, and 42. Three animals were euthanized and used to evaluate cell-ular immune response on day 62. Five (50 percent) and two (20 percent) out of ten animals produced IgG (DO mean = 0.307; cut-off = 0.240) and IgA (DO mean = 0.133, cut-off = 0.101), respectively, by ELISA on day 62. The proliferation of splenocytes revealed high stimulation index (SI) when co-cultured with 5, 10 and 15 µg.mL-1 of rTgROP2. These results indicate that intranasal immunization with recombinant protein ROP2 plus Quil-A can elicit both cellular and humoral immune responses in BALB/c mice.

TgROP2 é uma proteína localizada nas roptrias do Toxoplasma gondii, sendo um antígeno candidato a componente de uma vacina contra a toxoplasmose. O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficácia da TgROP2 recombinante em estimular a resposta imune celular e humoral de camundongos BALB/c após estímulo intranasal. A sequência da TgROP2 foi amplificada pela PCR a partir da cepa RH e clonada em vetor de expressão pTrc-His. Após a transformação em Escherichia coli- Rosetta 2, a pTrcHis-TgROP2 exibiu alto nível de expressão após 4 horas de indução com IPTG. A proteína recombinante apresentou uma massa molecular aparente de aproximadamente 54 kDa. Para avaliar a imunogenicidade dessa proteína recombinante, 10 camundongos receberam, pela via intranasal, 10 µg da rROP2 associado a 10 µg de Quil-A. Três doses foram realizadas nos dias 0, 21 e 42. No dia 62 do experimento, três animais foram eutanasiados para avaliar as respostas imune celular e humoral. Cinco (50 por cento) e dois (20 por cento) dos 10 animais apresentaram níveis de IgG (DO média = 0,307; ponto de corte = 0,240) e IgA (DO média = 0,133; ponto de corte = 0,101) acima do ponto de corte no ELISA no dia 62. A proliferação de esplenócitos revelou altos Índices de Estimulação (SI), quando as células foram cultivadas com 5, 10 e 15 µg.mL-1 de rTgROP2. Os resultados obtidos indicam que a via nasal pode estimular tanto a resposta imune celular como a humoral.

TNF-á and IL-6 immunohistochemistry in rat renal tissue experimentaly infected with Leptospira interrogans serovar Canicola

Leptospirosis is a public health problem worldwide and its etiology remains unclear. Its pathogenesis involves a complex interaction between host and infecting microorganism. The inflammatory reaction that controls the infection process also underscores many pathophysiological events occurring in leptospirosis. We investigated the presence of tumor necrosis factor-alfa (TNF-alfa) and interleukin-6 (IL-6) in renal tissues by immunohistochemical and histopathological examination in animals experimentally inoculated with Leptospira serovar Canicola. All the tests were carried out 2, 7, 14, 21 or 28 days after inoculation. Although TNF-alfa and IL-6 had been detected in tissues throughout the observation period, these cytokines appeared more intensely during the initial phase of infection. Therefore, both TNF-alfa and IL-6 were associated with the immunopathogenesis of leptospirosis. This profile suggests a high immunocellular response throughout the early infection stages followed by subsequent humoral response.

Caracterização fenotípica e funcional de células T reguladoras em um modelo experimental de Leishmaniose Tegumentar Americana / Phenotypic charactrization and functional regulatory T cells in an experimental model of leishmaniasis american tegumentar

A Leishmaniose Tegumentar (LT) constitui um grave problema de saúde pública no Brasil. As células T reguladoras (CD4+CD25+) (Tregs) executam um papel geral na regulação imune, prevenindo uma resposta imune patológica induzida. As Tregs naturais são definidas a partir da expressão constitutiva de CD25, CTLA-4, GITR, CD103 e FoxP3, entre outros marcadores. As células Tregs, ao se acumularem no sítio de infecção por Leishmania, suprimem a proliferação de células T CD4+CD25-, levando à persistência do parasita por mecanismos dependentes de IL-10. Nosso objetivo foi caracterizar a população de células Treg em camundongos BALB/c infectados e re-infectados com L. Braziliensis e avaliar se estas células estão relacionadas com a persistência do parasota. Células T CD4+CD25+, obtidas de camundongos infectados, expressam diferentes marcadores de superfície de Tregs (CD103, GITR, FoxP3) e foram capazes de suprimir a proliferação das células T CD4+CD25-. Observamos também a produção IFN-y e IL-10 por parte de células T CD4+CD25+. Observamos que os parasitas persistem no lifondo e no baço cuja infecção, contudo na orelha, o número de parasitas diminui com a cicatrização da lesão. Observamos também que não há reativação da lesão após o desafio. Nossos resultados mostram que as células Tregs estão presentes na infecção experimental por L. Braziliensis e sugerem que estas células estão associadas com a ausência de reativação da doença após um desafio.

Avaliação do papel dos neutrófilos na infecção experimental por Leishmania braziliensis / Assessing the role of neutrophils in experimental infection by Leishmania braziliensis

Neutrófilos são componentes importantes do sistema imune e fazem parte da primeira linha de defesa contra infecções. Na infecção intradérmica com L. braziliensis demonstramos que os neutrófilos são constantemente recrutados ao sítio de infecção. Além disso, já foi demonstrado que a interação de neutrófilos com macrófagos regula a resposta contra L. major. Neste estudo, investigamos o papel dos neutrófilos na infecção causada por Leishmania braziliensis usando o modelo de infecção intradérmica. Neutrófilos foram purificados de camundongos BALB/c, após a injeção intraperitonial de tioglicolato, sua pureza foi avaliada pela marcação com Gr-1, utilizando a citometria de fluxo. A posterior co-cultura de neutrófilos vivos ou mortos pelo calor com macrófagos peritoniais infectados com L. braziliensis levou a uma redução significativa na taxa de infecção e no número de amastigotas por célula quando comparado com as culturas controle. A presença de neutrófilos vivo ou mortos na cultura de macrófagos infectados com L. braziliensis foi associada a produção de altos níveis de TNF-a. Para avaliar o papel dos neutrófilos in vivo, camundongos foram co-inoculados com neutrófilos vivos e L. braziliensis. Observou-se que estes animais desenvolveram lesões significativamente menores e apresentaram um número menor de parasitas quando comparados com os camundongos controle. Por último, camundongos BALB/c foram depletados de neutrófilos após injeção intraperitonial do anticorpo RB6-8C5 e foram, em seguida, infectados com L. braziliensis. Camundongos depletados apresentaram lesões e carga parasitária maiores quando comparados com camundongos controle, os quais receberam injeção de IgG de rato. Estes dados indicam que os neutrófilos são células fundamentais para a eliminação inicial de L. braziliensis em camundongos BALB/c.

Inmunización con subgenoteca de Leishmania amazonensis protege contra el reto a ratones BALB/c / Immunization with Leishmania amazonensis subgenomic libraries protects BALB/c mice against the challenge

Se construyó una genoteca de Leishmania amazonensis en vector de expresión en células eucariotas (pEF1HisA, pEF1HisB, pEF1HisC). Se prepararon 2 subgenotecas con un número aproximado de 500 clones cada una y ratones BALB/c fueron inmunizados con 50 mg/0,1 mL de ADN de cada una; 2 inmunizaciones por vía IM, con 15 d de intervalo fueron realizadas. Grupos de ratones controles fueron inmunizados con ADN del plásmido vacío, con antígeno soluble del parásito (100 mg/0,1 mL) y solución salina fisiológica. Se midió el tamaño de las lesiones durante 12 semanas y al final del experimento, la carga parasitaria en los sitios de lesión fue determinada por el método de microtitulación en placas. Los ratones inmunizados con ADN 1, controlaron el tamaño de las lesiones, así como también los inmunizados con antígenos solubles, lo que alcanzó diferencia estadística (p< 0,05) en relación con el resto de los grupos, cuyas lesiones aumentaron de manera creciente. La carga de parásitos encontrada en los sitios de lesión corroboró los resultados anteriores, encontrando un número de promastigotes significativamente menor en aquellos que habían sido protegidos. Se concluyó que en la subgenoteca ADN1 deben existir genes, o fragmentos de genes, cuya expresión in vivo resulta protectora contra el reto, en el modelo murino empleado

Construcción de una biblioteca genómica de Leishmania amazonensis y su expresión en músculo de ratones BALB/c / Building of a genomic library of Leishmania amazonensis and its expression in BALB/c miceïs muscle

Se construyó una biblioteca genómica de Leishmania amazonensis mediante el vector pcDNA3, con promotor de expresión en células eucariotas, con el objetivo de contribuir a la aplicación de la tecnología de inmunización con ácidos nucleicos en la leishmaniosis. Para demostrar la expresión de la genoteca en el músculo de ratones inmunizados con esta, se realizó la técnica de inmunofluorescencia indirecta. Como anticuerpo primario se utilizó una mezcla de sueros con alto título antileishmania, de una zona donde predomina la infección con L. braziliensis. Se obtuvo una biblioteca con 80 porciento de clones recombinantes. Se demostró la expresión de determinantes antigénicos en el músculo de ratones BALB/c inmunizados, según resultados de la inmunofluorescencia

Evaluación de la respuesta inmune humoral por western blot en ratones inmunizados con una biblioteca genómica de expresión de Trypanosoma cruzi / Evaluation of the humoral immune response by Western Blot test in mice immunized with expression genomic library of Trypanosoma cruzi

Se construyó una biblioteca genómica de expresión de Trypanosoma cruzi con la utilización como vector el plásmido pcDNA3, con la cual se inmunizaron ratones de la línea isogénica BALB/c por vía intramuscular. Se empleó un grupo control positivo al que se le administraron antígenos solubles de T. cruzi y otro grupo que recibió el plásmido utilizado para la construcción de la biblioteca genómica; un grupo no recibió inmunización. A todos los animales se les extrajo sangre del plexo retrorbital 2 semanas posteriores a la tercera inmunización, para estudiar la respuesta de anticuerpos específicos contra los antígenos solubles del parásito mediante la técnica de western blot. Se obtuvo una respuesta de anticuerpos en los animales inmunizados con la biblioteca genómica de expresión y con antígenos solubles del parásito

Procedimientos para la obtención de ratones Balb/c hiperinmunes contra el antígeno B del sistema ABO de grupos sanguíneos humanos / Production of Balb-c mice hyperimmunized against B antigen from ABO human blood groups

Los antígenos del sistema ABO de grupos sanguíneos son oligosacáridos presentes en la membrana celular que forman parte de las glicoproteínas y glicolípidos. La introducción de la tecnología de hibridomas murinos para la obtención de anticuerpos monoclonales (AcM) con especificidad para los antígenos ABO ha permitido iniciar en Cuba la producción de reactivos hemoclasificadores basados en AcM. El perfeccionamiento de los reactivos requiere la búsqueda de nuevos clones de hibridomas, para lo que se necesita la sensibilización de ratones Balb/c con los antígenos. Se presentan los resultados de la evaluación de dos vías de inoculación (intraperitoneal e intraesplénica) y tres formas de presentación del antígeno (hematíes completos del grupo B, sustancia específica B y sustancia B tratada con alúmina) en ratones Balb/c a los que se les determinó el título de anticuerpos hemaglutinantes por la técnica de microplacas frente a un panel de hematíes de los grupos A, B y O antes y durante el período de inmunización. La vía intraperitoneal con hematíes completos del grupo B resultó adecuada para alcanzar altos títulos de anticuerpos aglutinantes contra hematíes B, aunque también reaccionaron con los hematíes de otros grupos.

Tripomastigotes de sangre y de cultivo celular de trypanosoma cruzi Y: II patología de la enfermedad de Chagas en ratones Balb/c / Blood and culture trypomastigotes forms of trypanosoma cruzi Y: II pathology of Chagasïs disease in Balb/c mice

Se evaluó la histopatología y respuesta humoral de ratones BALB/c que sobrevivieron después de la infección con formas tripomastigotes de sangre y de cultivo celular de T. cruzi Y. Los animales estudiados fueron los ratones superaron la fase aguda de la infección, denominados Susceptiblesûü y los ratones en los cuales la presencia del parásito se detectó después de haber sido inmunosuprimidos, denominado Poco Susceptiblesûü. La autopsia en todos los animales reveló distención del intestino grueso, mientras el tamaño del micocardio fue aparentemente normal. Los estudios histopatológicos del tracto gastrointestinal mostraron miositis, miolisis y destrucción del plexo mioentérico. Estas alteraciones incrementaron en intensidad a lo largo del tracto gastrointestinal, apareciendo ligeras y moderadas entre la región del cardias y el intestino delgado e intensas en el colon y recto. Solo en tres casos fueron detectados parásitos. Las alteraciones del páncreas condujeron a la pérdida de la arquitectura de la glándula. presentando intenso edema e infiltrando inflamatorio entre los acinos glandulares y necrosis de los Islotes de Langerhans. Los cambios histológicos del miocardio fueron moderados. observándose pequeños focos inflamatorios de células mononucleares cerca de los grandes vasos del atrium y el ventrículo derecho. No se observaron parásitos. En todos los animales se detectaron títulos altos de IgG específica. El estudio no reveló diferencias relacionadas con procedencia de los tripomastigotes

Evaluación de la respuesta inmune celular inducida en ratones Balb/C por la proteína de envoltura del virus dengue 2 / Assessment of the cellular immune response induced in Balb/C mice with dengue virus 2 envelope protein

The cellular immune response to dengue type 2 virus envelope protein was studied. To this end, the lympho-proliferative capacity of T-lymphocytes obtained from splenocytes of animals immunized with the protein when they were stimulated by such protein and dengue 2 virus. It was realized that splenocytes proliferated significantly in response to both types of viral antigens and that the values of stimulation indexes were higher in response to the whole virus than to the protein alone. Based on the above-mentioned, it was concludes that purified dengue 2 virus envelope protein was capable of generating specific and memory responses of antigen T-cell to dengue 2 type virus.

Baccilary angiomatosis: negative results using normal Balb/c and Balb/c nude mice

Baccilary angiomatosis has recently been described as a disease that can spread systematically and that is potentially fatal. It is caused by Bartonella henselae and B. quintana, and presents as especially pronounced signs and symptoms in patients suffering from acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). To clarify the pathogenesis of the disease and to try to define the relationships among baccilary angiomatosis, cat scratch disease and Carrión's bartonellosis, the authors of this study have attempted to develop an experimental model using mice that were immunocompetent as well as those that had their cellular immunity genetically compromised. A know concentration of B. henselae was inoculated intradermally in Balb/c an isogenic mice or an athymic group of the same lineage. Blood samples were taken on days-0, 3, 7, 10, 14, 28, and 60 after inoculation for indirect immunofluorescence antibody testing. On the 21st and 60th day, one animal from each group was sacrificed and a post mortem carried out including histological evaluation of the liver, spleen, lymph nodes, skin and other organs. Hemocultures of the sacrificed animals were collected. All results of serologic response, cultures and histologic examination were negative. The authors discuss the methodology, especially the use of isogenic animals of the same lineage in B. henselae infection, with and without immunodeficiency, and the resources for the negative results of histopathology, serology and cultures.

Interleucinas IL-1ß, IL-6 e IL-10 durante la perfusión y la reperfusión pulmonar / Interleukines IL-1ß, IL-6 e IL-10 during lung perfusión and reperfusion

Introducción: La perfusión y reperfusión de órganos provocan daño celular. La síntesis y la liberación de citocinas se afectan como respuesta al daño celular. Objetivo: Evaluar los cambios que ocurren en la concentración de la interleucinas 1ß, 6 y 10 presentes en la solución de perfusión durante la perfusión y reperfusión pulmonar. Material y métodos: Se utilizaron los bloques pulmonares de 21 ratones Balb-c, estos bloques fueron divididos al azar en tres grupos de estudio (n = 7 en cada grupo). Grupo 1: los bloques fueron perfundidos in situ a través de la arteria pulmonar con solución de Krebs-Henseleit a 4ºC con un flujo de perfusión de 0.2 mL/min únicamente durante tiempo necesario para exaguinarlos; Grupos 2: Los bloques fueron perfundidos in situ durante 15' y 30' a través de la arteria pulmonar con solución de Krebs-Henseleit a 4ºC con un flujo de perfusión de 0.2 ml/min y Grupo 3: Los bloques fueron exanguinados mediante perfusión in situ a través de la arteria pulmonar con solución de Krebs-Henseleit a 4ºC con un flujo de perfusión de 0.2 mL/min, se preservaron durante 24 horas a 4ºC sumergidos en la misam solución y transcurrido el tiempo de isquemia, fueron reperfundidos ex vivo durante 15' y 30' con solución de Krebs-Henseleit a 4 ºC con un flujo de perfusión de 0.2 mL/min. Durante las perfusiones y las reperfusiones se recolectó la solución de perfución pulmonar y se determinó la concentración de las interleucinas mediante la técnica de ELISA. Resultados: Durante la perfusión y reperfusión pulmonar, las concentraciones de IL-1ß en la solución de perfusión, fueron menores que las concentraciones de IL-6 e IL-10, siendo ésta última, la interleucina detectada en mayor concentración. Las concentraciones de IL-1ß e IL-6 no se modificaron ni por el timepo de perfusión ni por efecto de la reperfusión mientras que la concentración de IL-10 disminuyó por efecto de la reperfusión

Interleucinas 1ß, 6 y 10 en homogeneizados de corazón y de pulmón postperfusión y reperfusión del bloque cardiopulmonar / Interleukines 1ß, 6 and 10 in heart and lung homogenates postperfusion and reperfusion of the cardiopulmonary block

Introducción: Como consecuencia de la perfusión y de la reperfusión de órganos existe daño tisular. La síntesis y la liberación de citocinas se afectan como respuesta al daño celular. Objetivo: En este trabajo, evaluamos los cambios que ocurren en la concentración de interleucinas 1ß, 6 y 10 en homogeneizados de corazón y de pulmón como respuesta al daño ocasionado por el efecto de la perfusión y de la reperfusión cardiopulmonar. Material y métodos: utilizamos los bloqueos cardiopulmonares de 21 ratones Balb-C, estos bloques fueron divididos al azar en tres grupos de estudio (n= 7 en cada grupo). Grupo 1: Los bloques fueron perfundidos in situ a través de la arteria pulmonar con solución de Krebs-Henseleit a 4 ºC con un flujo de perfusión de 0.2 mL/min únicamente durante el tiempo necesario para exanguinarlos. Grupo 2: los bloques fueron perfundidos in situ durante 30' a través de la arteria pulmonar con solución de Krebs-Henseleit a 4 ºC con un flujo de perfusión de 0.2 mL/min. Grupo 3: los bloques fueron exanguinados mediante perfusión in situ a través de la arteria pulmonar con solución de Krebs-Henseleit a 4 ºC con un flujo de perfusión de 0.2 mL/min, se preservaron durante 24 horas a 4 ºC sumergidos en la misma solución a transcurrido el tiempo de isquemia, fueron reperfundidos ex vivo durante 30' con solución de Krebs-Henseleit a ºC con un flujo de perfusión de 0.2 mL/min. Concluidas las perfusiones y las reperfusiones preparamos homogeneizados de corazón y de pulmón. Determinamos la concentración de las interleucinas presentes en cada homogeneizado tisular mediante la técnica de ELISA. Resultados. La concentración de IL-6 fue similar en los homogeneizados de corazón y de pulmón y no se alteró por efecto de la reperfusión, mientras que las concentraciones de IL-1ß e IL-10 parecen actuar de manera inversa entre ambos órganos y durante todo el estudio

Monoclonal antibodies against respiratory syncytial virus for rapid detection and subgroup determination.

Thirty-one hybridomas producing monoclonal antibodies (MAbs) against structural proteins of RSV subgroup A (Long strain) and RSV subgroup B (Japanese wild strain) were produced and separated into three groups by their reactivities with RSV-A and RSV-B using IFA. Group I was specific to RSV-A, Group II was specific to RSV-B and group III was specific to both subgroups. Characterization of selected two MAbs from each group indicated that three MAbs recognized phosphoprotein (P) and the others recognized fusion protein (F). All of the selected MAbs were IgG1 and carried kappa light chain. These selected MAbs can be used to detect the presence of RSV from NPAs and classify them into two subgroups. The infection rates of RSV in Thai children are very low and most of them were RSV subgroup A.

Determinación de la velocidad de tránsito intestinal en el ratón BALB/c / Determinaton of the velocity of intestinal transit in the BALB/c mouse

La determinación de la velocidad del tránsito intestinal en un modelo animal es de primordial importancia, sobre todo cuando se pretende utilizar la vía digestiva del mismo como sitio para la presentación de antígenos. En el presente trabajo se determinó la velocidad del tránsito intestinal en el ratón BALB/c, uno de los animales de laboratorio frecuentemente utilizado en la investigación de la respuesta inmune. Se administró un colorante vegetal por medio de una sonda orogástrica, a 45 ratones, mayores de 8 semanas de edad. Posteriormente se sacrificaron los animales a diferentes tiempos en un rango de 10 min a 24 h. El tracto intestinal se dividió de manera arbitraria, el intestino delgado en tres tercios y el intestino grueso, en dos partes. Las determinaciones mostraron que 25 min después de administrado el colorante, éste se localizó a nivel del primer tercio y en menor proporción, a nivel del segundo tercio del intestino delgado. A los 90 min, el colorante alcanzó la primera mitad del intestino grueso, y a las 2 h comenzó a ser eliminado en las heces. Sin embargo, 3 h después de la administración aún se encontró colorante en el estómago, con lo anterior se demostró que el colorante se emilinó de manera intermitente a partir del estómago hasta las 3 h. A las 10 h se encontró colorante en intestino grueso, pero no en intestino delgado ni en estómago, a las 24 h se había eliminado por completo. Se concluye que en el intestino, el tránsito del colorante es constante, aunque la liberación a partir del estómago es intermitente, y que la totalidad del proceso de tránsito intestinal se lleva a cabo antes de 24 h