Resposta à quimioterapia com benzonidazol em camundongos com tríplice infecção por clones da cepa 21SF (São Felipe / Bahia) do trypanosoma cruzi / Response to chemoterapy with benzonizadol of mice with triple infection with clones of 21SF trypanosoma cruzi strain ( São Felipe/Bahia)

Populações que residem em áreas endêmicas da doença de Chagas são submetidas a múltiplas infecções pelo Trypanosoma cruzi e podem estar infectadas com cepas ou clones com diferentes graus de virulência e susceptibilidade à quimioterapia. Este é um fator importante para o desenvolvimento e morbidade da doença. As cepas de Trypanosoma cruzi representam complexas populações multiclonais, homogêneas ou heterogêneas, com predominância de um clone principal. São biologicamente classificados em Biodemas (Tipos I, II e III) que apresentam diferentes graus de resistência à quimioterapia. Cepas do Tipo I são muito suscetíveis ao tratamento; cepas do Tipo II possuem uma média susceptibilidade (cepa 21SF); cepas de Tipo III são muito resistentes (cepa Colombiana). No presente estudo, é avaliado o resultado do tratamento de camundongos triplamente infectados com clones da cepa 21SF, em comparação com os infectados com a cepa parental. 50 camundongos foram infectados com a cepa 21SF (infecção única). O inóculo foi de 5 x 104 formas tripomastigotas sanguícolas. 80 camundongos foram infectados, sucessivamente, com 3 clones da cepa 21SF (C6, C7 e C8), inóculo: 1x104 formas tripomastigotas (infecção tripla). A infecção simples com cada clone também foi feita. Os camundongos de ambos os grupos foram divididos em dois subgrupos: tratados com Benzonidazol – BZ (100 mg/kg/dia - 60 doses) e controles não tratados. Após 60 dias do final do tratamento, os camundongos sobreviventes foram eutanasiados, por exsanguinação, pós-anestesia; o sangue foi coletado para o exame sorológico de imunofluorescência indireta; testes de cura foram realizados (parasitemia, xenodiagnósticos, hemocultura) e seções do coração e músculo esquelético foram coletadas, fixadas e processadas para o estudo histopatológico em cortes corados com Hematoxilina & Eosina. A PCR foi também usada como uma técnica diagnóstica complementar. Os testes parasitológicos mostraram uma positividade variando de 54,4% nos camundongos infectados com a cepa parental e tratados; 33,4 a 66,7% nos animais com infecção única pelos diversos clones e tratados e 26,7% nos camundongos com infecção tríplice, tratados. Os títulos sorológicos (TIFI) variaram de 1:20 a 1:280 nos infectados com cepa parental tratados com BZ e de 1:640 a 1:1280 para controles não tratados. Os títulos sorológicos na infecção única com cada clone variaram de 1:10 a 1:1280 em camundongos tratados e de 1:160 a 1:1280 nos controles não tratados. A PCR revelou positividade em todos os animais infectados, tratados. O resultado final foi obtido pela combinação dos testes parasitológicos com os títulos sorológicos revelando positividade de 6,6% nos camundongos infectados com a cepa parental e tratados; 0 a 18,2% nos animais com infecção única pelos diversos clones e tratados e 12% nos camundongos com infecção tríplice, tratados. Estudo histopatológico: Os camundongos infectados com a cepa parental apresentaram lesões que variavam de leves a moderadas, na maioria dos casos, predominante no miocárdio (animais tratados e controles não tratados) camundongos submetidos à infecção única por cada clone apresentaram lesões semelhantes aos demonstrados pela infecção com cepa parental. Os camundongos com infecção tripla apresentaram uma exacerbação de lesões, evoluindo para a miocardite crônica. Nestes casos, havia intensas lesões no músculo esquelético; animais tratados apresentaram uma nítida redução das lesões no miocárdio e no músculo esquelético. Os resultados da quimioterapia com Benzonidazol em animais triplamente infectados, considerando os testes parasitológicos e sorológicos, revelaram baixos índices de cura e agravamento das lesões tissulares nos camundongos submetidos a múltiplas infecções com clones obtidos da cepa 21SF.

The role of MHC haplotypes H2d/H2b in mouse resistance/susceptibility to cyst formation is influenced by the lineage of infective Toxoplasma gondii strain

Toxoplasma gondii strains displaying the Type I/III genotype are associated with acquired ocular toxoplasmosis in humans. Here, we used a mice model to characterize some immunological mechanisms involved in host resistance to infection with such strains. We have chosen the Type I/III strains D8, G2 and P-Br, which cause a chronic infection in mice that resembles human toxoplamosis. Mice deficient of molecules MyD88, IFN-gamma, and IL-12 were susceptible to all three parasite strains. This finding indicates the importance of innate mechanisms in controlling infection. On the other hand, MHC haplotype did not influenced resistance/susceptibility; since mice lineages displaying a same genetic background but different MHC haplotypes (H2b or H2d) developed similar mortality and cyst numbers after infection with those strains. In contrast, the C57BL/6 genetic background, and not MHC haplotype, was critical for development of intestinal inflammation caused by any of the studied strains. Finally, regarding effector mechanisms, weobserved that B and CD8+ T lymphocytes controlled survival,whereas the inducible nitric oxide synthase influenced cyst numbers in brains of mice infected with Type I/III strains. These findings are relevant to further understanding of the immunologic mechanisms involved in host protection and pathogenesis during infection with T. gondii.

Cepas de Toxoplasma gondii que apresentam o genótipo I/III são associadas a toxoplasmose ocular adquirida em humanos. No presente trabalho, nós utilizamos um modelo da doença em camundongos para caracterizar mecanismos imunológicos envolvidos na resistência do hospedeiro à infecção por aquelas cepas. Escolhemos as cepas D8, G2 e P-Br, que causam infecção crônica em camundongos, semelhante à toxoplasmose humana. Camundongos deficientes em MyD88, IFN-G e IL-12 foram susceptíveis a infecções com todas as três linhagens do parasita. Esses dados indicam a importância de mecanismos inatos no controle da infecção. Por outro lado, o haplótipo do MHC não influenciou na resistência/susceptibilidade, na medida em que linhagens de camundongos com um mesmo "background'' genético, mas diferentes haplótipos de MHC (H2b e H2d) apresentam o índice de mortalidade e número de cistos semelhantes após a infecção com aquelas cepas do parasita. Em contraste, o "background'' genético de C57BL/6, mas não o haplótipo de MHC, foi crítico para o desenvolvimento de inflamação intestinal causada pelas cepas estudadas. Finalmente, com relação aos mecanismos efetores, observamos que linfócitos B e T CD8+ controlam a sobrevivência após infecção. Por outro lado, a ativação da enzima óxido nítrico sintase induzida foi um fator importante para controle do número de cistos cerebrais em camundongos infectados com cepas do Tipo I/III. Esses achados são relevantes para o melhor entendimento dos mecanismos imunológicos envolvidos na proteção e patogênese durante infecção com T. gondii.

Trypanosoma cruzi: inducción de alteraciones del sistema nervioso periférico en diferentes cepas de ratones / Trypanosoma cruzi: induction of changes in the peripheral nervous system in different strains of mice

Este estudio fue diseñado buscando un método sencillo que permitiera evaluar el compromiso denervatorio o muscular primario en la infección experimental con T. cruzi. Para ello se empleó la exploración electromiográfica convencional de los músculos isquiotibiales de una de las patas en diferentes cepas de ratones infectados con 3 cepas de T. cruzi. Se estudiaron las siguientes asociaciones entre parásitos y huéspedes: Tulahuén (Tul) y C3H/HeN, C57Bl, Balb/c ó Swiss; CA-I y C3H/HeN, Rockland, NIH; RA y C3H/HeN, Rockland. Los ratones se infectaron con tripomastigotes sanguíneos de t. cruzi administrados por vía intraperitoneal. En el electromiograma fueron estudiadas la amplitud, duración y número de fases de los potenciales de undad motora aislados. Se observó que la cepa Tul inducía alteraciones de tipo denervatório en ratones C3H/HeN y C57BI y que igual acontecía con la cepa RA en ratones C3H/HeN. Modificaciones sugestivas de daño muscular primario se vieron en la asociación parásito CA-I y huéspede C3H/HeN y entre CA-I y HIH. La metodología empleada demostró ser de utilidad práctica para la rápida detección del tipo de compromiso de la unidad motora en las infecciones murinas experimentales con T. cruzi

Estudo imunopatológico de camundongos de seis diferentes linhagens isogênicas à infecçäo por três tipos de cepas do "Trypanosoma cruzi" / Immunepathologic study of mice of six embread strains infested by three different Trypanosoma cruzi strains

Foi feito um estudo da infecçäo por três diferentes cepas do trypanosoma cruzi em camundongos isogênicos de seis diferentes linhagens com o objetivo de estudar a reposta imunológica humoral e celular e comparar o comportamento das cepas do T. cruzi em linhagens de camundongos geneticamente distintas. As linhagens isogênicas de camundongos foram: A/J,AKR,BALB/c,C3H/He,C57BL/10 e DBA/1. As cepas do T. cruzi classificadas em três tipos de acordo com seus caracteres morfobiológicos, isoenzimáticos e antigênicos foram: cepa Peruana (Tipo I), cepa 21 DF (Tipo II) e cepa Colombiana (Tipo III). O inóculo utilizado em todos os grupos experimentais foi de 100.000 tripomastigotas sangüícolas. Foram utilizados como parâmetros para o acompanhamento da infecçäo: os níveis de parasitemia, os índices de mortalidade e o cálculo da resistência através da édia harmônica da sobrevida, os níveis das fraçöes das imunoglobulinas séricas: IgG1,IgG2a,IgG2b e IgM, avaliados pela técnica de imunodifusäo radial quantitativa; titulaçäo de anticorpos específicos pela imunofluorescência indireta com antígeno específico; teste cutâneocom antígeno específico. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística aplicando-se a análise da variância para a compara;cäo enter os diversos parâmetros. A associaçäo entre os diversos dados obtidos foi estudade pelo teste da adequaçäo da curva para uma correlaçäo linear. Os animais sacrificados durante o curso do experimento, a partir do 5o.dia de infecçäo para estudo histopatológico. O estado reacional do baço foi avaliado histologicament e pela relaçäo peso baço/peso corporal. A avaliaçäo da resistência das diferentes linhagens através da comparaçäo, pela análise da variância, da média harmônica da sobrevida mostrou que, na infecçäo pela cepa Peruana (Tipo I) näo houve diferença significante entre as várias linhagens sendo todas muito susceptíveis a este tipo de cepa. Na infecçäo pela cepa de Tipo II (21 SF) a linhagem AKR é extremamente susceptível e a B10 muito resistente. As demais formam um espectro bem definido quanto à susceptibilidade que difere do espectro que se apresenta à infecçäo pela cepa de Tipo III (Colombiana). Nesta última os animais DBA säo os mais resistentes e os A/J os mais susceptíveis. Comparando-se a infecçäo pelas cepas de Tipos II e III, verifica-se que, com exceçäo da linhagem AKR, as outras säo mais resistentes à infecçäo pela cepa 21 SF do que pela Colombiana. Os níveis de parasitemia variam conforme a linhagem do camundondo porém o perfil da curva parasitêmica é característico par o tipo de cepa empregado, mantendo-se constante, independentemente da linhagem. Entre os animais das linhagens mais resistentes há uma correlaçäo entre o maior grau de resistência e os menores níveis parasitêmicos, à infecçäo com as cepas 21 DG e Colombiana. Esta correlaäo näo é entretanto observada entre os animais mais susceptíveis podendo-se observar animais com alta taxa de mortalidade e com uma média parasitêmica baixa. O oposto também pode seer observado em que algumas linhagens resistentes podem apresentar níveis elevados de parasitemia e elevada sobrevida...