Diagnóstico de precisão das lesões mamárias / Accurate diagnosis of breast lesions

PONTOS-CHAVE As lesões mamárias compreendem uma ampla variedade de diagnósticos que apresentam comportamentos diversos. As lesões mamárias podem ser classificadas como lesões benignas, de potencial de malignidade indeterminado (B3), carcinoma in situ e carcinoma invasor. Na era da medicina personalizada, individualizar e obter um diagnóstico preciso faz grande diferença no desfecho final da paciente, principalmente no caso do câncer de mama. Exames de imagem direcionados e de qualidade, métodos de biópsia adequadamente selecionados e análises de anatomopatologia convencional, imuno-histoquímica e até molecular são determinantes no diagnóstico e no manejo das pacientes.

Precisión diagnóstica de pruebas basadas en amplificación isotérmica mediada en lazo de transcriptasa inversa (RT-LAMP) para SARS-CoV-2 / Diagnostic Accuracy of Tests Based on Loop-mediated Isothermal Amplification reverse transcriptase (RT-LAMP) for SARS-CoV-2

ANTECEDENTES: Los coronavirus son una familia de virus causantes de enfermedades respiratorias, digestivas y del sistema nervioso en humanos y animales. En diciembre de 2019, se identificó en la provincia de Wuhan, China una cepa de coronavirus nunca antes encontrada en humanos, la cual recibió el nombre de SARS-CoV-2. La infección por SARS-CoV-2 se ha extendido a más de 212 países y fue declarada como pandemia por la Organización Mundial de la Salud. En nuestro país, se ha reportado 65 015 casos y un total de 1 814 fallecidos. La técnica molecular estándar para detectar SARS-CoV-2 es la reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR). Estudios en cepas diferentes de coronavirus, sugieren que las pruebas moleculares basadas en amplificación isotérmica mediada en lazo de transcriptasa inversa (RT-LAMP) podrían mostrar mayor sensibilidad y especificidad que las pruebas RT-PCR, además de ser más rápidas y no requerir reactivos o instrumentos costosos. OBJETIVO: Describir la evidencia científica disponible sobre la precisión diagnóstica de las pruebas RT-LAMP para SARS-CoV-2. MÉTODO: Búsqueda sistemática en Medline (Pubmed), Cochrane Central Register of Controlled Trials (CENTRAL), Medrxiv y Chinese Clinical Trial Registry (CCTR) de estudios en idioma español o inglés publicados entre el 01 de diciembre de 2019 y el 06 de mayo de 2020, complementada con una búsqueda en Google Scholar. La calidad metodológica se evaluó usando el instrumento QUADAS 2. RESULTADOS: Se identificaron 09 estudios publicados en el año 2020, procedentes de Australia, Corea del Sur, Israel, Pakistán, China y Reino Unido. El número de muestras analizadas varió entre 21 y 260. Un estudio fue desarrollado en pacientes de un asilo de ancianos, mientras que el resto estudios fue desarrollado en un ámbito hospitalario. La evaluación de calidad mostró una probabilidad alta de sesgo en las dimensiones de selección de individuos y prueba de referencia. En cuanto a la aplicabilidad de los resultados del estudio, existe una probabilidad incierta en la dimensión de selección de los pacientes y la clasificación de la condición según la prueba de referencia. La calidad global de la evidencia es muy baja. CONCLUSIONES: • Las pruebas RT-LAMP fueron desarrolladas para identificar con mayor frecuencia el gen N (04 estudios), seguido de los genes ORF1a y N (02 estudios), gen RdRp (01 estudio), gen ORF1a (01 estudio) y genes ORF1ab y S (01 estudio). Existió variabilidad en los protocolos seguidos en cada estudio. Comparado con la prueba de reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR), las pruebas basadas en amplificación isotérmica mediada en lazo de transcriptasa inversa (RT-LAMP) mostraron una sensibilidad entre 80% y 100%, y una especificidad entre 73% y 100% para el diagnóstico de SARS-CoV-2. El valor predictivo positivo de las pruebas RT-LAMP varió entre 73% y 100%, mientras que el valor predictivo negativo varió entre 75% y 100%. Ambos valores son influenciados por la prevalencia de la enfermedad, la cual varió en los estudios entre 9,1% y 70,8% (mediana: 62,7%). La calidad de la evidencia para la precisión diagnóstica de las pruebas RT-LAMP desarrolladas en los estudios identificados es muy baja, debido al alto riesgo de sesgo, imprecisión en los resultados y aplicabilidad incierta.(AU)

Application of Microfluidics in Molecular Diagnostics / 中国医疗器械杂志

In recent years, molecular diagnostics has been the most promising branch of

An in-house real-time polymerase chain reaction: standardisation and comparison with the Cobas Amplicor HBV monitor and Cobas AmpliPrep/Cobas TaqMan HBV tests for the quantification of hepatitis B virus DNA

This study aimed to standardise an in-house real-time polymerase chain reaction (rtPCR) to allow quantification of hepatitis B virus (HBV) DNA in serum or plasma samples, and to compare this method with two commercial assays, the Cobas Amplicor HBV monitor and the Cobas AmpliPrep/Cobas TaqMan HBV test. Samples from 397 patients from the state of São Paulo were analysed by all three methods. Fifty-two samples were from patients who were human immunodeficiency virus and hepatitis C virus positive, but HBV negative. Genotypes were characterised, and the viral load was measure in each sample. The in-house rtPCR showed an excellent success rate compared with commercial tests; inter-assay and intra-assay coefficients correlated with commercial tests (r = 0.96 and r = 0.913, p < 0.001) and the in-house test showed no genotype-dependent differences in detection and quantification rates. The in-house assay tested in this study could be used for screening and quantifying HBV DNA in order to monitor patients during therapy.

Nanotechnology: a new frontier in virus detection in clinical practice.

Researchers are expanding the applications of nanotechnology in the field of medicine since mid-2000. These technologies include nanoarrays, protein arrays, nanopore technology, nanoparticles as a contrivance in immunoassays and nanosensors, among others. Nanobiotechnologies are clinically applicable and possess the potential to be useful in laboratory diagnosis of infections in general and viral infections in particular. Nanotechnology is a significant advance in molecular diagnostics. The technology strengthens and expands the DNA and protein microarray methods. In particular, the waveguide technology is an emergent area with many diagnostic applications. Nanosensors are the new contrivance for detection of bioterrorism agents. All these new technologies would have to be evaluated in clinical settings before their full import is appreciated and accepted.

Procedimiento de detección molecular del polimorfismo C677T en el gen de la metilentetrahidrofolato reductasa (MTFHR) / Molecular detection procedure of the C677T polymorphism in the gen of the methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR)

La hiperhomocisteinemia es uno de los factores asociados a enfermedad vascular. Las causas genéticas son muy poco frecuentes, excepto la relacionada con termolabilidad de la metilentetrahidrofolato reductasa (MTHFR), rasgo de herencia autosómica recesiva. La variante molecular responsable es la sustitución C677T (Ala®Val) en el gen que codifica la MTHFR; la misma crea un sitio de restricción Hinf I, lo que posibilita su detección mediante digestión de ADN amplificado. La homocigosis para este alelo en un contexto de ácido fólico relativamente bajo se correlaciona con hiperhomocisteinemia moderada, y ésta sobre todo con arteriopatía periférica oclusiva. Nos propusimos poner a punto una técnica molecular para detectar esta sustitución. Para ello se extrajo ADN de gotas de sangre recogidas en una matriz especial; alícuotas de las suspensiones obtenidas calentando la matriz en agua fueron amplificadas enzimáticamente, y el producto digerido con Hinf I. Los fragmentos resultantes fueron analizados mediante electroforesis en geles de agarosa y tinción con bromuro de etidio. La técnica permite distinguir los genotipos homocigota dominante, homocigota recesivo y heterocigota para la sustitución investigada. Disponer de esta tecnología nos permitirá evaluar la relevancia patogénica de este polimorfismo en la población local, como paso previo a la oferta del servicio diagnóstico.