Molecular detection of vector-borne agents in cats in Southern Brazil / Detecção molecular de agentes transmitidos por vetores em felinos domésticos no Sul do Brasil

Abstract This study used serological and molecular methods to investigate the occurrence of vector-borne pathogens (VBP) with zoonotic potential in cats neutered at the University Veterinary Hospital in Canoinhas, Santa Catarina. The combined PCR and serological results revealed that 17 (56.6%) cats were positive for one or more pathogens. The sampled cats had antibodies to Ehrlichia spp. (7/30), Anaplasma phagocytophilum (3/30) and Leishmania infantum (2/30). The PCR assay detected DNA closely related to Ehrlichia canis in 6/30 cats, Mycoplasma haemofelis in 2/30 cats, A. phagocytophilum and Cytauxzoon sp. in one cat each. While Bartonella clarridgeiae and B. henselae were detected in two cats each, and B. koehlerae was detected in one cat.

Resumo Como os felinos podem ser parasitados por diversos patógenos transmitidos por vetores (PTV), alguns com caráter zoonótico, este estudo objetivou detectar por métodos sorológicos e moleculares, patógenos transmitidos por vetores hematófagos, em gatos atendidos em um Hospital Veterinário Universitário em Santa Catarina. Os resultados da PCR e da sorologia combinados, revelaram que 17 (56,6%) gatos foram positivos para um ou mais patógenos. Na sorologia, foram positivos 7/30 gatos para Ehrlichia, 3/30 para Anaplasma phagocytophilum e 2/30 para Leishmania infantum. Na PCR foi detectado DNA filogeneticamente associado a: Ehrlichia canis em 6/30 gatos; Mycoplasma haemofelis, em 2/30 gatos; A. phagocytophilum e Cytauxzoon sp. em 1/30 gatos cada. Enquanto Bartonella clarridgeiae e B. henselae foram detectadas, cada uma, em dois gatos, B. koehlerae foi detectada em um gato.

Mycoplasma in the spotlight of AIDS: partial biochemical characterization of mycoplasma-derived components inducing TNF alpha secretion and blast transformation.

We have previously demonstrated that the AIDS-associated Mycoplasma fermentans as well as Mycoplasma capricolum membranes activated bone marrow macrophages to secrete tumor necrosis factor alpha (TNF alpha) and induce blast transformation of splenic lymphocytes. Herein, we show that the membrane component of Mycoplasma capricolum capable of inducing TNF alpha secretion is a hydrophobic protein. This is supported by our findings that the TNF alpha inducing activity was eluted by a phenyl-Sepharose column in a peak distinct from bulk membrane lipids. The hydrophobic nature of the protein is indicated by the activity of the "hydrophobic protein" fraction of the membranes, and the pattern of elution obtained by the phenyl-Sepharose column. Fractionation of the M. capricolum membranes, solubilized by CHAPS (3-[(3-cholamidopropyl)-dimethylammoniol]1-propane sulfate) on a gel filtration column revealed a major peak of TNF alpha inducing activity of about 75,000 daltons, and a minor peak of about 55,000 daltons. The mitogenic activity, though spread throughout the column, peaked in the same fractions as the TNF alpha inducing activity. Both activities co-eluted by the phenyl-Sepharose column as well. However, the mitogenic activity of the membranes was much more resistant to elevated temperatures and extreme pH treatment.

Eficiência de antígenos aglutinantes elaborados com diferentes amostras de micoplasmas aviários / Efficiency of agglutinating antigens produced with several strains of avian mycoplasmas

Antígenos para soroaglutinaçäo rápida em placa (SAR) foram produzidos a partir de quatro amostras isoladas de Mycoplasma gallisepticum (Mg) e duas de Mycoplasma synoviae (Ms), além das amostras de padräo Mg S6 e Ms WVU1853. As culturas foram processadas em caldo Frey e os antígenos compostos de células íntegras coradas em suspensäo. Todos os antígenos foram comparados entre si em SAR e com outros dois antígenos comerciais, sendo ainda os isolados e amostras padräo comparadas em "immunoblotting". Os antígenos produzidos no laboratório mostraram sensibilidade acima de 0,92 a soros específicos, mas também alto índice de reatividade frente a soros SPF congelados, variando de 54 até 100 por cento. Os melhores resultados (especificidade de 0,87 e sensibilidade 0,94) foram obtidos no antígeno do isolado MgCNPSA88, o qual näo apresentou uma proteína de 68kDa na membrana. Sugere-se que essa proteína tenha papel importante nas reaçöes cruzadas de SAR para Mg

Reacao de coaglutinacao estafilococica na identificacao de micoplasmas / Staphylococcal coagglutination for mycoplasma identification

A reacao de coaglutinacao estafilococica foi utilizada como metodologia de identificacao rapida de micoplasmas para ser aplicada em laboratorios nao especializados. Amostras selvagens de micoplasmas isoladas de humanos, culturas celulares, ratos e camundongos foram identificados atraves da reacao de coaglutinacao estafilococica utilizando-se do Staphylococcus aureus produtor de proteina A (amostra Cowan I) sensibilizado com anticorpo de coelho contra amostra padrao micoplasma. Na identificacao, os micoplasmas estavam em suspensao concentrada provenientes de 4,0ml de cultivo....

Padronizaçäo do teste Elisa indireto para sorodiagnóstico de Mycoplasma bovis / Standardization of an enzyme-linked immunosorbent assay (elisa) for the serodiagnosis of Mycoplasma bovis

Foi desenvolvido um teste Elisa indireto para o sorodiagnóstico de Mycoplasma bovis.Foi avaliado o uso de albumina de sorobovino (BSA) como agente bloqueador.Dois tipos de microplacas foram avaliadas em combinaçäo com as células como antígeno bem como, fragmentadas após sonicaçäo.Os resultados mostraram que o uso de BSA näo melhorou a sensibilidade e a esfecificidade do teste;o antígeno de M.bovis sonicado foi o mais satisfatório e que as microplacas de cloreto de polivinila säo superiores àquelas feitas de polistireno.a concentraçäo ótima dos reagentes foi discutida.

Proteçäo de galinhas pela cepa vacinal Conn-F de Mycoplasma gallisepticum, na forma liofilizada e como cultura fresca / Protection against Mycoplasma gallisepticum in chickens vaccinated with the Conn-F strain in the lyophilized form or as a broth culture

Estudou-se a cepa Conn-F de Mycoplasma gallisepticum como vacina para galinhas, utilizada na forma liofilizada, com títulos variáveis, e como cultura fresca. A resposta vacinal foi avaliada através da inoculaçäo no saco aéreo da cepa patogênica R de M. gallisepticum aos 28 e 49 dias pós-vacinaçäo. Os resultados foram verificados pela freqüência de aves com lesöes nos sacos aéreos, severidade das lesöes e níveis de anticorpos circulantes medidos pelos testes de soroaglutinaçäo rápida (SAR) e inibiçäo da hemaglutinaçäo (IH). A imunoproteçäo conferida foi dependente do título vacinal, do tempo pós-vacinaçäo e da forma de apresentaçäo da cultura. Resultados ligeiramente melhores foram observados com a vacina na forma de cultura fresca. Os títulos vacinais de 105 UFC/dose conferiram considerável melhor proteçäo que o título de 103 UFC/dose. As aves vacinadas foram mais resistentes ao desafio aos 49 dias. O teste de SAR foi mais sensível que o de IH, sendo o mais indicado na detecçäo da resposta sorológica à vacinaçäo. A soroconversäo, medida pelo teste de SAR, foi dependente do período pós-vacinaçäo e do título vacinal e mostrou tendência de cair aos 49 dias pós-vacinaçäo. A resposta sorológica de galinhas à cepa Conn-F näo se relacionou com a proteçäo

Mycoplasma hominis infections in female genital tract & use of immunofluorescence for antibody detection.

A total of 325 women with genital tract infection and 108 healthy controls were screened for the presence of mycoplasmas. Of these, 325 patients, mycoplasmas were recovered in 186. Thirty five isolates were M. hominis and 151 isolates of Ureaplasma urealyticum. The fluorescent-antibody technique (FAT) has been employed for the rapid identification of mycoplasma colonies growing on agar plates. The method was found to be rapid for detection of M. hominis growing on primary isolation plates. The antibody titre of patient's serum was also detected by FAT. Patients' sera were diluted four fold from 1:4 to 1:256 dilutions. In 7 patients fluorescence was seen with 1:16 serum dilution, in 18 with 1:64 dilution and in 3 with 1:256. The immunofluorescence test gave a sensitivity of 96.66 per cent, specificity of 95.0 per cent, with percentage of false negativity and false positivity being 3.45 and 5.0 per cent respectively.

Enzyme linked immunosorbent assay for immunoglobulins G to Mycoplasma hominis.

Sera (187) from women patients attending the STD, Obstetrics and Gynaecology, and Family Planning Clinics were screened for the presence of the IgG class of immunoglobulins against M. hominis, using the ELISA technique. Sonicates of locally isolated M. hominis serotype (CS1) and standard PG 21 strain were used as antigens. The test was standardized using penicillinase as an enzyme. The ELISA showed 90.48 per cent sensitivity and 84.8 per cent specificity, and was also rapid (as compared to culture) and reproducible.