Molecular detection of Mycoplasma gallisepticum in different poultry breeds of Abbottabad and Rawalpindi, Pakistan / Detecção molecular de Mycoplasma gallisepticum em diferentes raças de aves de Abbottabad e Rawalpindi, Paquistão

Abstract The poultry sector in Pakistan is contributing mainly in bridging gap between demand and supply for protein. Mycoplasma gallisepticum is an emerging bacterium causing serious problems in poultry industry of Pakistan. A cross-sectional study was conducted to evaluate the M. gallisepticum load in poultry populated regions of Pakistan. Total 600 serum and 600 swab samples were collected, 200 from each broiler, layers and breeders poultry in Rawalpindi and Abbottabad districts. Serum samples were analyzed through ELISA for seroprevalence. Swabs were cultured on Frey's medium followed by PCR and partial mgc2 gene sequencing. Results of seroprevalence of M. gallisepticum showed that layers (75%, n=150) are more positive as compared to breeders (70%, n=140) and broilers (50%, n=100). Typical colonies of the M. gallisepticum were observed in breeder (26.5%), followed by layer (21%) and broilers (9%). A total of 37.1% (n=42) samples were identified positive through PCR out of total 113 cultured based positive samples. A total of six M. gallisepticum isolates of current study showed 98-99 percent similarity with previously reported isolates on the basis of mgc2 gene partial sequencing. The M. gallisepticum was found highly prevalent in different poultry breads. Results of this study would add into basic data and provide a direction for livestock sector to strengthen a control strategy for mycoplasmosis in poultry farms.

Resumo O setor avícola do Paquistão está contribuindo principalmente para preencher a lacuna entre a demanda e a oferta de proteína. Mycoplasma gallisepticum é uma bactéria emergente que causa sérios problemas na indústria avícola do Paquistão. Um estudo transversal foi conduzido para avaliar a carga de M. gallisepticum em regiões de avicultura do Paquistão. Um total de 600 amostras de soro e 600 amostras de esfregaço foi coletado, 200 de cada frango de corte, poedeiras e aves reprodutoras nos distritos de Rawalpindi e Abbottabad. Amostras de soro foram analisadas por ELISA para soroprevalência. As zaragatoas foram cultivadas em meio Frey, seguido de PCR e sequenciação parcial do gene mgc2. Os resultados da soroprevalência de M. gallisepticum mostraram que as poedeiras (75%, n = 150) são mais positivas em comparação com matrizes (70%, n = 140) e frangos de corte (50%, n = 100). Colônias típicas de M. gallisepticum foram observadas em reprodutoras (26,5%), seguidas de poedeiras (21%) e frangos de corte (9%). Um total de 37,1% (n = 42) das amostras foi identificado como positivas por PCR de um total de 113 amostras positivas baseadas em cultura. Um total de seis isolados de M. gallisepticum do estudo atual mostrou 98-99% de similaridade com isolados relatados anteriormente com base no sequenciamento parcial do gene mgc2. O M. gallisepticum foi encontrado com alta prevalência em diferentes pães de aves. Os resultados deste estudo acrescentariam dados básicos e forneceriam orientação para o setor pecuário fortalecer uma estratégia de controle da micoplasmose em granjas avícolas.

Prevalência e estudo genético de Mycoplasma gallisepticum e M. synoviae em poedeiras comerciais, na região centro-oeste do estado de São Paulo, Brasil / [Prevalence and genetic study of Mycoplasma gallisepticum and M. synoviae strains from commercial laying hens in the Midwest region of Sao Paulo state, Brazil]

O objetivo deste trabalho foi estudar a prevalência de MG e MS e a filogenia das cepas circulantes, comparando-as com outras já descritas em poedeiras comerciais no Brasil. Foram coletados 140 suabes traqueais de poedeiras comerciais com sinais respiratórios em seis granjas da região centro-oeste de São Paulo. As amostras foram avaliadas por PCR, com posterior sequenciamento e análise filogenética das cepas identificadas. Das 140 amostras, 16,4% foram positivas para MG e 68,6% para MS. Houve diferença significativa nas frequências de MG e MS por granja, segundo o teste G de independência (P<0,05). Todas as cepas identificadas de MG e MS de granjas distintas apresentaram similaridade tanto pela lipoproteína para MG quanto pela região 16s rRNA para MS. Neste estudo, foi possível observar altas prevalências dos agentes estudados, sendo a de MS maior que a de MG. Foi detectada infecção mista por MG e MS em 11,4% das amostras e sabe-se que esses micoplasmas podem agir de forma sinérgica, agravando o quadro respiratório. As cepas circulantes identificadas, pela análise das regiões gênicas da lipoproteína para MG e 16S rRNA para MS, são similares em todas as granjas estudadas.(AU)

The aim of this study was to evaluate the prevalence of MG and MS and the phylogeny of the circulating strains, comparing them with others already described in commercial laying hens from Brazil. A total of 140 tracheal swabs were collected from commercial laying hens with respiratory signs in six farms from the western region of São Paulo state. The samples were analyzed by PCR with subsequent sequencing and phylogenetic analysis of the identified strains. From the 140 samples, 68.6% were positive for MS and 16.4% for MG. There was a significant difference in the frequencies of MG and MS per farm according to G Test of independence (P<0.05). All strains identified as MG and MS from distinct farms presented similarity both by lipoprotein to MG and by 16s rRNA region to MS. In this study, it was possible to observe a high prevalence of MS compared to MG. Mixed MG and MS infection was detected in 11.4% of the samples. These mycoplasmas may act synergistically, worsening the respiratory signs. The circulating strains identified by analysis of the lipoprotein for MG and 16S rRNA for MS are similar on all poultry farms studied.(AU)

Investigation of Mycoplasma spp. in birds of the Rio de Janeiro Zoo by isolation and PCR / Investigação de Mycoplasma spp. em aves do Zoológico do Rio de Janeiro por isolamento e PCR

Brazil is one of the countries with the most abundant avifauna in the world. The confinement of birds associated with close contact with other animals and humans favor the spread of agents of respiratory diseases. Among them, mycoplasmas can cause asymptomatic or apparent disease that manifests in birds by coughing, sneezing, rales, conjunctivitis, ocular and nasal discharge. Several described mycoplasmas cause disease in birds, especially Mycoplasma gallisepticum(MG) andMycoplasma synoviae(MS). The diagnosis ofMycoplasmaspp. can be done by clinical observation and laboratory analysis. Molecular diagnosis by PCR was boosted by its speed, sensitivity, and low cost of agent isolation techniques that take up to 21 days to complete. This study aimed to verify the occurrence ofMycoplasmaspp. in birds of the Rio de Janeiro Zoo (Rio Zoo), by isolation and PCR. Of the total 635 birds from the Rio Zoo, 81 were studied for detection ofMycoplasmaspp., when taken for routine health assessment exams. These birds belonged to the following orders: Psittaciformes (45), Accipitriformes (18), Galliformes (7), Piciformes (5), Strigiformes (4), Falconiformes (1) and Cariamiformes (1), all individuals already identified by microchip or leg-ring. There was no isolation of mycoplasmas in any of the samples tested, whereas, in the PCR, 62.96% (51/81) were positive, with 1.96% (1/51) identified as MG and 19.61% (10/51) as MS, representing 1.23% (1/81) and 12.34% (10/81) of the total population studied. PCR was shown to be a more effective technique than isolation in the detection ofMycoplasmaspp. in birds. It was possible to detect mycoplasmas in birds from Riozoo with no clinical respiratory signs, with higher MS prevalence than MG. The positivities forMycoplasmaspp., MS, and MG were different among the orders studied, being the highest occurrence in birds of prey, followed by Galliformes and Piciformes. The presence of MG and MS in birds of Rio de Janeiro Zoo confirms the circulation of these agents and the need for further studies on the dissemination of mycoplasmas in zoos for the epidemiological analysis of these bacteria in these places.(AU)

O Brasil é um dos países com maior avifauna do mundo. O confinamento de aves associado ao contato próximo a outros animais e seres humanos favorece a disseminação de agentes etiológicos causadores de doenças respiratórias. Dentre eles, os micoplasmas podem causar doença assintomática ou aparente que se manifesta em aves por espirros, estertores, conjuntivite, corrimentos oculares e nasais. São diversos os micoplasmas descritos causadores de doença em aves, com destaque para Mycoplasma gallisepticum (MG) e Mycoplasma synoviae (MS). O diagnóstico de Mycoplasma spp. pode ser feito pela observação clínica e análises laboratoriais. O diagnóstico molecular pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) ganhou impulso por sua rapidez, sensibilidade e baixo custo em relação às técnicas de isolamento do agente que levam até 21 dias para conclusão do gênero Mycoplasma. Objetivou-se verificar a ocorrência da infecção por Mycoplasma spp. em aves no Zoológico do Rio de Janeiro (Rio Zoo), por isolamento e PCR. Do plantel de 635 aves do Rio Zoo, foram estudadas 81 para detecção de Mycoplasma spp., quando contidas para exames rotineiros de avaliação da condição de saúde. Essas aves eram pertencentes às ordens Psittaciformes (45), Accipitriformes (18), Galliformes (7), Piciformes (5), Strigiformes (4), Falconiformes (1) e Cariamiformes (1), todas já identificadas por microchip ou por anilha. Não houve isolamento de micoplasmas em nenhuma das amostras testadas, enquanto na PCR, 62,96% (51/81) foram positivas, sendo 1,96% (1/51) identificadas como MG e 19,61% (10/51) como MS, representando 1,23% (1/81) e 12,34% (10/81) da população total estudada. A PCR demonstrou ser uma técnica mais efetiva que o isolamento na detecção de Mycoplasma spp. em aves. Foi possível detectar micoplasmas nas aves do Riozoo sem sinal clínico respiratório, tendo MS maior prevalência do que MG. As positividades para Mycoplasma spp., MG e MS foram diferentes entre as ordens de aves estudadas, sendo a maior ocorrência nas aves de rapina, seguida dos Galliformes e dos Piciformes. A presença de MG e MS nas aves do Rio de Janeiro Zoo confirma a circulação destes agentes e a necessidade de mais estudos sobre a disseminação de micoplasmas em zoológicos para análise epidemiológica dessas bactérias nesse local.(AU)

Pesquisa de Mycoplasma em aves da família Psittacidae mantidas em diferentes cativeiros no Brasil Central / Research of Mycoplasma in the family Psittacidae kept in different captivities in Central Brazil

O presente estudo teve como objetivo investigar a presença de Mycoplasma gallisepticum e M. synoviae em diferentes espécies de psitacídeos cativos no Brasil Central. Um total de 300 amostras foram coletadas e corresponderam a 41 espécies de psitacídeos da fauna brasileira, provenientes do CETAS, criadouro comercial e criadouro conservacionista. Quatorze espécies apresentaram amostras positivas para M. gallisepticum destacando a maracanã-verdadeira (Primolius maracana) (01/02, 50%), a arara-canindé (Ara ararauna) (15/48, 33,3%) e a jandaia-verdadeira (Aratinga jandaia) (03/10, 30%). Amostras do CETAS obtiveram total de 21,62% (16/74) de amostras positivas, do criadouro comercial 15,7% (19/121) e do criadouro conservacionista 6,66% (7/105). Apenas três espécies foram positivas para M. synoviae sendo essas, a maracanã-pequena (Primolius maracana) (1/10 - 10%), arara-macao (Ara macao) (1/12, 8,3%) e arara-canindé (Ara ararauna) (2/48, 4,1%). O CETAS obteve 2,7% (2/74) de amostras positivas totais, enquanto o criadouro conservacionista obteve total de 1,9% (2/105) de amostras. Não ocorreram amostras positivas para M. synoviae no criadouro comercial. Os resultados mostraram um considerável número de amostras positivas para M. gallisepticum em espécies da família Psittacidae, indicando que estes animais podem ser uma fonte de infecção silenciosa para outras aves, uma vez que não apresentaram sintomatologia clínica.(AU)

The study aimed to investigate the presence of Mycoplasma gallisepticum and M. synoviae in different species of captive parrots, in Central Brazil. A total of 300 samples were collected from 41 brazilian species of Psittacidae at three captivities: Centro de Triagem de Animais Silvestres (CETAS), a conservation and a commercial captivity. Fourteen species presented positive samples for M. galisepticum, the most affected were blue-winged macaw (Primolius maracana) (01/02, 50%), blue-and-yellow macaw (Ara ararauna) (15/48, 33.3%), and jandaia parakeet (Aratinga jandaia) (03/10, 30%). CETAS facility showed 21.62% (16/74) of positive samples, while the commercial captivity showed 15.7% (19/121), and the conservation captivity 6.66% (7/105). Only three species presented positive samples for M. synoviae: blue-winged macaw (Primolius maracana) (1/10, 10%), scarlet macaw (Ara macao) (1/12, 8.3%) e blue-and-yellow macaw (Ara ararauna) (2/48, 4.1%). CETAS facility showed 2.7% (2/74) of positive samples, while the conservation captivity presented 1.9% (2/105), and no positive samples were found in the commercial captivity. Results showed a considerable number of positive samples for M. galisepticum in species of Psittacidae family, indicating that these animals can be a silent source of infection for other birds, since they did not present clinical symptoms.(AU)

Performance, serologic and tracheal responses of laying hens exposed to F strain of Mycoplasma gallisepticum / Desempenho, sorologia e respostas traqueias de galinhas poedeiras expostas a cepa F de Mycoplasma gallisepticum

The F strain of Mycoplasma gallisepticum (MG-F) protects chickens against mycoplasma infections, in which monitoring is made by serology and histopathology of trachea. This trial used 90 chickens, being 30 unvaccinated (G1 group), 30 eye-drop vaccinated at 8 weeks of age with MG-F (Ceva Animal Health, São Paulo, SP, Brazil) (G2), and 30 immunized at 8 and 11 weeks of age (G3). Samples were obtained from chickens on the 8, 12, 15, 18, 20 and 24th weeks of age for the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) test. Tracheal fragments were collected after necropsies on the 15 and 24th weeks of age. Up to 12 weeks, the ELISA reactions in optical density (OD) were 0.165 (G1), 0.151 (G2) and 0.151(G3), all below 0.20 and with no significant difference among groups (p > 0.05). After the 15th week, the ELISA reactions rose, yielding the following group averages by collecting dates: G1 (0.18, 0.19, 0.18, and 0.16), G2 (0.36, 0.49, 0.47, and 0.44) and G3 (0.41, 0.52, 0.59, 0.60), being the means in G2 and G3 not significantly different between than, but significantly different from G1. The initial weight (592.71, 621.33, and 594.40), the final weight (1,932.58, 1,987.59, and 1,875.20) and the weekly weight gain (11.65, 11.90, and 11.14) were not significantly different among groups. At necropsy the gross tracheal score means by group and dates were: 15th week (0.25, 0.61, and 0.54) and 24th week (0.54, 0.58, and 0.67), being these difference not significantly (p > 0.05). On microscopy, the tracheal score averages by groups G1, G2 and G3, respectively, were: 15th week (0.25, 0.32, and 0.47) and 24th week (0.07, 0.75, and 0.08). G2 yielded higher score average than G1 and G3 on the 24th week. Higher tracheal changes for G2 and G3 as compared to G1 could be ascribed to MG-F infection. There were no evident prejudicial effects on live weight, weight gain and tissue changes by applying one or two vaccination doses.(AU)

A cepa F de Mycoplasma gallisepticum (MG-F) protege as galinhas de micoplasmose, e sua monitorização é feita por sorologia e histopatologia de traqueia. Este estudo utilizou 90 frangos, sendo 30 não vacinados (grupo G1); 30 vacinados via gota ocular a 8 semanas de idade com MG-F (Ceva Saúde Animal, São Paulo, SP, Brasil) (G2); e 30 imunizados em 8 e 11 semanas de idade (G3). As amostras foram obtidas nas 8ª, 12ª, 15ª, 18ª, 20ª e 24ª semanas para ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA). Fragmentos traqueais foram coletados após necropsias nas 15ª e 24ª semanas. Até a 12ª semana, as reações de ELISA em densidade óptica (DO) foram 0,165 (G1), 0,151 (G2) e 0,151 (G3), todas abaixo de 0,20, e não houve diferença significativa entre os grupos (p > 0,05). Após a 15ª semana , a reação de ELISA subiu, produzindo as seguintes médias dos grupos por datas de coleta: G1 (0,18, 0,19, 0,18 e 0,16), G2 (0,36, 0,49, 0,47 e 0,44) e G3 (0,41, 0,52, 0,59, 0,60), sendo as médias de G2 e G3 não significativamente diferentes entre si, mas significativamente diferentes da de G1. O peso inicial (592,71, 621,33, 594,40), o peso final (1.932,58, 1.987,59, 1.875,20) e o ganho de peso semanal (11,65, 11,90, 11,14) não foram significativamente diferentes entre os grupos. Na necropsia, as médias do escore da macroscopia de traqueia por grupo e data foram: 15ª semana (0,25, 0,61 e 0,54) e 24ª semana (0,54, 0,58 e 0,67), e não se apresentou diferença significativa (p > 0,05). Na microscopia, a média de escores de traqueia por grupos G1, G2 e G3, respectivamente, foram: 15ª semana (0,25, 0,32 e 0,47) e 24ª semana (0,07, 0,75 e 0,08). G2 apresentou maior média de escore do que G1 e G3 na 24ª semana. Alterações traqueais mais elevadas para G2 e G3 em relação a G1 poderiam ser atribuídas à vacinação por MG-F. Não houve efeitos prejudiciais evidentes no peso vivo nem no ganho de peso, tampouco alterações teciduais na aplicação de uma ou duas doses de vacinação.(AU)

Transmission, serologic and tissue responses in chickens vaccinated with Mycoplasma gallisepticum F strain (MG-F) / Transmissão, resposta sorológica e tecidual de poedeiras vacinadas com Mycoplasma gallisepticum cepa F

MG-F protects chickens from MG Mycoplasmosis and monitoring is done by serology (SAR and ELISA) and PCR. Histopathology is used to evaluate bird response to MG. This study evaluated MG-F profile vaccination in SPF chicken. This trial used 100 chickens, being 40 unvaccinated (G1), 40 eye-drop vaccinated at 8 weeks of age with MG-F ( Ceva Animal Health , São Paulo , SP , Brazil ) (G2) and 20 immunized by contact (G3) . Samples were obtained on the 8th, 12th, 15th, 18th, 20th and 24th week for SAR, ELISA and PCR. Fragments of trachea and air sac, for microscopy, were got after necropsies on the 15th and 24th week. Up to 12 weeks there was no significant difference among groups by SAR. SAR reactions appeared from the 15th week with these averages: G1 (1.7, 1.76 , 0.1, 0.15) , G2 (7.81, 7.65, 8.25, 6.29) and G3 (8.1, 8.5, 9.5, 6.16), while by ELISA it occurred after the 18th week with optical densities averages: G1 (0.19, 0.14, 0.16) , G2 (0.47, 0.45, 0.41) and G3 (0.55, 0.51, 0.51) . Positivity in G3 by PCR occurred seven weeks after exposure. At the 15th week the air sac score means were 0.20, 0.55, and 0.32 and 24th week were 0.15, 0.80 and 0.66 (p>0.05). For trachea, G2 (0.48) yielded higher score average than G1 (0.10) and G3 (0.00) on the 15th week. Changes in G3 were seen only at 24th week, being this average (1.00) significantly different (p<0,05) from G1 (0.08) and G2 (0.46). SAR and PCR detected MG-F in G3 earlier than ELISA...

Mycoplasma gallisepticum cepa F (MG-F) é altamente utilizada em vacinação de poedeiras. MG-F confere bons níveis de proteção às galinhas, deslocando MG de campo ou diminuindo o número deles no trato respiratório. Soroaglutinação Rápida (SAR), ELISA e PCR são testes no monitoramento da micoplasmose, enquanto a histopatologia, mesmo não sendo rotineira, é usada para avaliar a resposta das aves à infecção por MG. O objetivo deste estudo foi avaliar a transmissibilidade, soroconversão e alterações teciduais de MG-F em galinhas. Um total de 100 galinhas SPF foi utilizado, sendo 40 delas não vacinadas (G1), 40 vacinadas na 8ª semana de idade com MG-F (Ceva Saúde Animal, São Paulo/SP, Brasil) (G2) e 20 imunizadas por contato com aves do G2 (G3). Soros e suabes traqueais foram obtidos na 8ª, 12ª, 15ª, 18ª, 20ª, 24ª semana para monitoramento por SAR, ELISA e PCR. Fragmentos de traqueia e saco aéreo, para microscopia, foram feitas após necropsias na 15ª e 24ª semana. Até a 12ª semana não houve diferença significativa entre os grupos pela SAR. Houve reação a SAR a partir da 15ª semana com as seguintes médias: G1 (1,7; 1,76; 0,1; 0,15), G2 (7,81; 7,65; 8,25; 6,29) e G3 (8,1; 8,5; 9,5; 6,16), enquanto por ELISA a soroconversão ocorreu a partir da 18ª semana com médias de densidades óticas de G1 (0,19; 0,14; 0,16), G2 (0,47; 0,45; 0,41) e G3 (0,55; 0,51; 0,51). Todas as aves do G3 apresentaram positividade pela PCR sete semanas após exposição. Não houve diferença significativa entre as medias dos escores de saco aéreo entre os grupos, na 15ª semana (0,20; 0,55; 0,32) e 24ª semana (0,15; 0,80 e 0,66). Em relação à traqueia, G2 apresentou média maior na 15ª semana (0,48) que G3 (0,00) e G1 (0,10). Alterações em G3 foram observadas somente na 24ª semana onde as médias foram de 0,08(G1); 0,46 (G2) e 1,00 (G3), havendo significância (p<0,05) entre G1 e G3. SAR e PCR foram capazes de detectar a transmissão de MG-F de forma precoce em relação ao ELISA...

Detecção molecular e isolamento de Mycoplasma spp. em psitacídeos no estado de Pernambuco, Brasil / Molecular detection and isolation of Mycoplasma spp. in psittacines in Pernambuco state, Brazil

Objetivou-se com este estudo investigar a ocorrência de Mycoplasma spp., Mycoplasma galissepticum (MG) e Mycoplasma synoviae (MS) em psitacídeos de cativeiro localizado no estado de Pernambuco, Brasil. Foram estudadas 85 aves provenientes do Parque Estadual Dois Irmãos, localizado no estado do Pernambuco, Brasil. De cada psitacídeo analisado foram obtidas três amostras por meio de swabs da cloaca, palato e conjuntiva totalizando 255 amostras. As amostras coletadas foram submetidas à extração de DNA e à reação em cadeia da polimerase (PCR), sendo as positivas submetidas ao isolamento em ágar Frey. O DNA de Mycoplasma spp. foi detectado em 16,47% (14/85) dos psitacídeos estudados. Das 255 amostras analisadas, 6,66% (17/255) foram positivas para a presença de Mycoplasma spp., sendo 41,18% (7/17) provenientes da conjuntiva, 35,29% (6/17) do palato e 23,53% (4/17) da cloaca. Nenhuma amostra foi positiva para MG ou MS na PCR. Os resultados obtidos permitem confirmar a presença do DNA de Mycoplasma spp. em conjuntiva, palato e cloaca nas aves estudadas. Foram detectadas colônias semelhantes a membros da classe Mollicutes em 17,64% das amostras (3/17). Esse é o primeiro relato da presença de Mycoplasma spp. em psitacídeos de cativeiro no Nordeste do Brasil.

The aim of this study was to investigate the occurrence of Mycoplasma spp., Mycoplasma galissepticum (MG) and Mycoplasma synoviae (MS) in captive psittacines. Eighty-five wild birds from Parque Estadual Dois Irmãos, Pernambuco state, northeastern Brazil, were used. From each psittacid analyzed three samples were obtained through cloaca, palate and conjunctiva swabs, totaling 255 samples. Samples collected were submitted to DNA extraction and Polimerase Chain Reaction (PCR). Mycoplasma spp. DNA was detected in 16.47% (14/85) of psittacines studied. From 255 samples, 6.66% (17/255) were positive for Mycoplasma spp.: 41.18% (7/17) of positivity in conjunctiva, 35.29% (6/17) in palate and 23.53% (4/17) in cloaca. There was no positive sample for MG or MS in PCR. Similar colonies were found for members of the Mollicutes Class in 17.64% of the samples (3/17). The results confirmed Mycoplasma spp. DNA in conjunctiva, palate and cloaca from the wild birds analyzed. This is the first record of Mycoplasma spp. in captive psittacines from northeastern Brazil.

Occurrence and risk factors assessment associated with Mycoplasma gallisepticum (MG) infection in chickens in the semiarid region of Pernambuco, Brazil / Ocorrência e fatores de riscos associados à infecção por Mycoplasma gallisepticum em galinhas na região Semiárida do estado de Pernambuco

The aim of the present study was to assess the occurrence of Mycoplasma gallisepticum (MG) infection and risk factors of this disease in three hundred serum samples from on 23 familiar agricultural properties in the semiarid region of the state of Pernambuco, Brazil. ELISA was used to study antibodies anti-Mycoplasma gallisepticum. The univariate analysis (chi-squared test or Fischer's exact test) followed by multivariate analysis (logistic regression) were used to assess the risk factors with two variables: management and sanity of the poultry. It was detected a frequence of 53.33% (157/300) of the birds were positive for MG, with 100% foci. The risk factors confirmed by multivariate analysis, in the present study, were the presence of other poultry species on the property, including Numida meleagris (OR=2.22; p=0.005), parrots (OR=1.72; p=0.027), and of passerines (OR=1.88; p=0.007). These results showed that Mycoplasma gallisepticum infection is endemic among backyard poultry in the semiarid region of the state of Pernambuco. These birds could be a source of infection for other wild or domestic poultry. . This is the first report of the occurrence of avian mycoplasmosis in backyard poultry in the state of Pernambuco in northeastern Brazil. The risk factors identified should serve as a parameter for the health authorities to seek solutions related to controlling the disease.

Objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrência de infecção por Mycoplasma gallisepticum (MG) e os fatores de risco dessa doença em trezentas amostras de soro sanguíneo de galinhas domésticas em 23 propriedades da agricultura familiar na região semiárida do estado de Pernambuco, Brasil. Para a pesquisa de anticorpos contra Mycoplasma gallisepticum utilizou-se o Ensaio Imunoenzimático (ELISA). A análise univariada (Qui-quadrado ou Exato de Fischer) seguida pela análise multivariada (Regressão Logística) foram utilizadas para avaliar os fatores de risco com duas variáveis: manejo e sanidade das aves. Foi detectada uma frequência de 53,33% (157/300) de aves soropositivas para MG com 100% de focos. Os fatores de risco confirmados na análise multivariada, neste estudo, foram a criação de outras espécies de aves na propriedade como Numida meleagris(OR=2,22; p=0,005), criação de diferentes espécies de psitacídeos (OR=1,72; p=0,027) e a criação de passeriformes (OR=1,88; p=0,007). Estes resultados demonstram que a infecção por Mycoplasma gallisepticum é endêmica entre galinhas de criação doméstica na região semiárida do estado de Pernambuco. Estas aves podem atuar como fonte de infecção para outras aves silvestres e domésticas. Este é o primeiro relato da ocorrência de micoplasmose aviária em galinhas de criação doméstica no estado de Pernambuco, nordeste do Brasil. Os fatores de risco identificados devem servir como um parâmetro para as autoridades sanitárias buscarem soluções de controle da doença.

Evaluation of a PCR multiplex for detection and differentiation of Mycoplasma synoviae, M. gallisepticum, and M. gallisepticum strain F-vaccine / Avaliação de uma PCR multiplex para detecção e diferenciação de Mycoplasma synoviae, Mycoplasma gallisepticum e Mycoplasma gallisepticum cepa F vacinal

Mycoplasma gallisepticum (MG) and Mycoplasma synoviae (MS) are the mycoplasma infections of most concern for commercial poultry industry. MG infection is commonly designated as chronic respiratory disease (CRD) of chickens and infections sinusitis of turkeys. MS causes sub clinical upper respiratory infection and tenosynovitis or bursitis in chickens and turkeys. The multiplex PCR was standardized to detect simultaneously the MS, MG field strains and MG F-vaccine strain specific. The generic PCR for detection of any species of Mollicutes Class was performed and compared to the multiplex PCR and to PCR using species-specific primers. A total of 129 avian tracheal swabs were collected from broiler-breeders, layer hens and broilers in seven different farms and were examined by multiplex PCR methods. The system (multiplex PCR) demonstrated to be very rapid, sensitive, and specific. Therefore, the results showed a high prevalence of MS in the flocks examined (27.9%), and indicate that the MS is a recurrent pathogen in Brazilian commercial poultry flocks...

Mycoplasma gallisepticum (MG) and Mycoplasma synoviae (MS) são micoplasmas que causam infecção de maior preocupação para a indústria avícola. MG é a bactéria responsável pela infecção, comumente designada, como doença crônica respiratória (DCR) de galinhas e sinusite infecciosa de perus. MS é responsável por infecções subclínicas do trato respiratório superior e tenosinovite ou bursite em galinha e perus. A reação da PCR multiplex foi padronizada para detectar simultaneamente MS, MG cepa de campo e MG-F cepa vacinal. A PCR genérica para detecção de qualquer espécie de Mycoplasma foi realizada e comparada a PCR multiplex e a PCR com primers específicos. O total de 129 amostras de suabes de traqueia foi coletado de reprodutoras pesadas, poedeiras e frangos em sete diferentes empresas avícolas e então foram examinados por PCR multiplex. O sistema da PCR multiplex demonstrou ser muito rápido, sensível e específico. Então, os resultados mostraram uma alta prevalência de MS nos lotes examinados ( 27,9%), e indica que MS é um patógeno recorrente nos lotes de aves comerciais brasileiro...

Occurrence of Mycoplasma synoviae on commercial poultry farms of Pernambuco, Brazil / Ocorrência de Mycoplasma synoviae em granjas comerciais da avicultura de Pernambuco

The state of Pernambuco is the largest producer of eggs in the North and Northeast of Brazil and second one in the broiler production. Mycoplasmas are important avian pathogens, which cause respiratory and joint diseases that result in large economic losses. The aim of the present study was to investigate the occurrence of Mycoplasma gallisepticum (MG) and Mycoplasma synoviae (MS) in broilers and commercial laying hens in the state of Pernambuco, Brazil. Tracheal fragments were analyzed from 55 healthy broilers, 35 broilers with respiratory signs and 30 commercial laying hens with respiratory signs, from 24 commercial poultry farms, each sample was composed of a pool of five birds. The bacteriological exam, PCR and nested PCR were used for the detection of Mycoplasma gallisepticum (MG) and Mycoplasma synoviae (MS). All samples were negative in bacteriological isolation. In the PCR analyses, seven samples from birds with respiratory signs were positive for MS and one was positive for MG, the latter of which was confirmed as the MG-F vaccine strain. The occurrence of MS in chickens with respiratory signs may indicate inadequate sanitary management on poultry farms, favoring the propagation of mycoplasmosis.

O estado de Pernambuco é o maior produtor de ovos da região Norte e Nordeste e ocupa a segunda posição na produção de frangos de corte. Os micoplasmas são importantes patógenos aviários que causam doenças respiratórias e sinovite que resultam em grandes perdas econômicas. Objetivou-se pesquisar a ocorrência de Mycoplasma gallisepticum (MG) e Mycoplasma synoviae (MS) em frangos de corte e poedeiras comerciais no Estado de Pernambuco, Brasil. Foram colhidos fragmentos de traquéia de 55 frangos de corte sadios, 35 com sinais respiratórios e de 30 poedeiras comerciais também com sinais respiratórios, provenientes de 24 granjas, cada amostra foi composta por um "pool" de cinco aves. Para detecção de Mycoplasma gallisepticum (MG) e Mycoplasma synoviae (MS) foram utilizados o exame bacteriológico, PCR e Nested-PCR. Todas as amostras apresentaram resultados negativos no exame bacteriológico. Na PCR, sete amostras foram positivas para MS e uma para MG em amostras de aves com sinais respiratórios, sendo a amostra positiva para MG confirmada como cepa vacinal MG-F. A ocorrência de MS em aves com sinais clínicos respiratórios pode indicar ausência de barreiras sanitárias adequadas em granjas de frangos de corte e de poedeira comercial, favorecendo a sua propagação.

Diagnóstico imuno-histoquímico e caracterização anatomopatológica de Mycoplasma gallisepticum em galinhas de subsistência / Immunohistochemical diagnosis and pathological characterization of Mycoplasma gallisepticum in free-range chicken

A micoplasmose aviária é causada por bactérias da família Mycoplasmataceae. Mycoplasma gallisepticum (MG) é a espécie mais patogênica e que tem a maior importância econômica para a produção avícola. Este estudo teve por objetivo utilizar a técnica de imuno-histoquímica (IHQ) como método de diagnóstico da infecção por MG em aves. No presente relato são descritos dois surtos de micoplasmose por MG em galinhas de subsistência. Clinicamente as aves apresentaram prostração, hiporexia, dificuldade respiratória, secreção nasal e ocular. Na necropsia foram observados secreção serosa, edema e deposição de cáseo em conjuntiva (7/10) e seios nasais (4/10), sacos aéreos espessados com espuma e cáseo (6/10); traqueia difusamente avermelhada (4/10); pulmões com pontos esbranquiçados de 0,5cm (2/10); e saco pericárdico com deposição de fibrina (2/10). No exame histopatológico foram evidenciados traqueíte (10/10), sinusite (5/5) e conjuntivite (3/4) hiperplásica linfoplasmocitária aguda; broncopneumonia fibrinonecrótica (5/10); pericardite fibrinosa aguda (2/10); e aerossaculite fibrinonecrótica (1/1). No exame de IHQ anti-MG foi evidenciada marcação na superfície extracelular dos cílios e/ou topo do epitélio da traqueia (10/10), brônquios (5/10) e seios nasais (4/5). Em sete dos dez casos analisados foi detectada a presença de MG por PCR em tempo real realizado a partir de amostras de suabe traqueal. A técnica de IHQ anti-MG utilizada como método de diagnóstico apresentou boa concordância com os sinais clínicos, as lesões histopatológicas e os resultados de PCR em tempo real.

Avian mycoplasmosis is caused by bacteria from the Mycoplasmataceae family. Mycoplasma gallisepticum (MG) is the most pathogenic and economically significant species affecting poultry. The aim of this study was to use the immunohistochemistry technique (IHC) as a diagnostic method for the MG infection in poultry. In this report we described two outbreaks of mycoplasmosis caused by MG in free-range chickens. Clinical signs were characterized by prostration, decreased appetite, difficult breathing, nasal and ocular discharge. Necropsy findings were serous secretion in conjunctiva (7/10) and seioses (4/10), edema and caseous exudate; air sacs thickened with foam and caseous exudate (6/10); trachea diffusely reddish (4/10); lungs with 0.5 cm whitish spots (2/10); and pericardial sac with fibrin exudate (2/10). Histologically was observed a lymphoplasmacytic hyperplastic acute tracheitis (10/10), seiositis (5/5) and conjunctivitis (3/4); fibrinonecrotic bronchopneumonia (5/10); acute fibrinous pericarditis (2/10); and fibrinonecrotic aerosaculitis (1/1). IHC anti-MG stained in the extracellular surface of ciliated brush border and/or in the top of epithelium of trachea (10/10), bronchi (5/10) and sinuses (4/5). In seven out of ten cases it was possible to detect MG by real-time PCR from tracheal swabs. IHC anti-MG used as a diagnostic method showed good correlation with clinical signs, lesions and real-time PCR results.

Infecção experimental por Mycoplasma gallisepticum e Escherichia coli em perus / Experimental infection with Mycoplasma gallisepticum and Escherichia coli in turkeys

Mycoplasma gallisepticum (MG) é responsável por provocar sinusite infecciosa em perus. A infecção por Mycoplasma spp. torna a ave susceptível a infecção por Escherichia coli. O objetivo deste estudo foi desenvolver em perus, um modelo experimental para a sinusite infecciosa. Utilizou-se 250 peru,s machos da linhagem Nicholas (Aviagen®) divididos em grupo não infectado (T1) e grupo desafiado (T2) que recebeu por via ocular, com um dia de idade, Mycoplasma gallisepticum cepa F e aos 21 dias de idade E. coli por via saco aéreo. Analisou-se a mortalidade, os sinais clínicos e lesões em sacos aéreos, fígado e coração. Concluiu-se que o delineamento experimental utilizado foi eficaz para simular a infecção natural por MG e E. coli, sendo que a vacina contra MG-F utilizada para poedeiras é patogênica para perus.

Mycoplasma gallisepticum (MG) causes infectious sinusitis in turkeys, and is commonly associated with Escherichia coli. The objective of this study was to develop in turkeys an experimental model for infectious sinusitis. Two hundred and fifty male turkeys of Nicholas breed (Aviagen®) were divided into negative control group and challenged, animals were housed until 42 days old. The birds were inoculated in the first day of age with the MG vaccine (F-VAX ® Schering Plough) and on day 21 with E. coli. We analyzed the mortality, clinical signs and lesions in air sacs, liver and heart. The results showed that the vaccine against Mycoplasma gallisepticum (MG-F) is pathogenic for turkeys and that the experiment was able to simulate natural infection with MG and E. coli.

A Multiplex real-time PCR for detection of Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae in clinical samples from Brazilian commercial poultry flocks

Mycoplasma gallisepticum (MS) and Mycoplasma synoviae (MS) are important avian pathogens and cause economic losses to the poultry industry. Molecular biology techniques are currently used for a rapid detection of these pathogens and the adoption of control measures of the diseases. The aim of this study was to develop and validate a technique for simultaneous detection of MG and MS by multiplex real time polymerase chain reaction (PCR). The complete assay (Multiplex MGMS) was designed with primers and probes specific for each pathogen and developed to be carried out in a single tube reaction. Vaccines, MG and MS isolates and DNA from other Mycoplasma species were used for the development and validation of the method. Further, 78 pooled clinical samples from different poultry flocks in Brazil were obtained and used to determine the sensitivity and specificity of the technique in comparison to 2 real time PCR assays specific for MG (MG PCR) and MS (MS PCR). The results demonstrated an agreement of 100% (23 positive and 44 negative samples) between Multiplex MGMS and MG PCR in the analysis of 67 samples from MG positive and negative poultry flocks, and an agreement of 96.9% between Multiplex MGMS and MS PCR in the analysis of 64 samples from MS positive and negative poultry flocks. Considering the single amplification tests as the gold standard, the Multiplex MGMS showed 100% of specificity and sensitivity in the MG analysis and 94.7% sensitivity and 100% specificity in the MS analysis. This new assay could be used for rapid analysis of MG and MS in the poultry industry laboratories.

Development and evaluation of a novel subunit vaccine for Mycoplasma gallisepticum / Desenvolvimento e avaliação de uma nova vacina para Mycoplasma gallisepticum

Adhesion proteins from Mycoplasma gallisepticum (MG) encoded by cytadhesion genes mgc1 and mgc2 were cloned into plasmid vectors and transformed into E. coli. Seventeen groups of specific-pathogen free (SPF), birds at four weeks of age were used to inoculate these two proteins (MGC1 and MGC2) mixed into an oil emulsion creating a novel MG vaccine. Six different protein concentrations (50, 100, 200, 400, 800, and 1000µg/bird) were tested with two equal concentration doses at four and seven weeks of age. In addition, many control groups were needed such as bacterin, membrane, no vaccine or challenge, oil emulsion alone, and no vaccine but challenged. Three weeks following the second vaccination, 50% of the birds in each treatment group were challenged with MG strain S6. The remaining birds were left as contacts to verify protection against horizontal transmission. All birds were bled before vaccinations, challenge and euthanasia. Birds were negative for MG at the first vaccination, as shown by serum plate agglutination test. At necropsy, tissue samples (trachea, lungs, and air sacs) were collected for histopathological examination. Swabs from trachea were used for PCR analysis. ELISA results showed a strong immune response to both protein preparations and almost the same response level for different doses tested, proving the immunogenic features of MGC1 and MGC2. However, humoral responses failed to prevent MG infection and disease when challenged as demonstrated by PCR and histopathology. MGC1 contact birds showed some degree of infection by PCR analysis. In addition, histopathological and ELISA results suggest that contact birds did not have enough time to develop lesions and to mount an immune response.

Os genes mgc1 e mgc2, codificadores de duas proteínas de adesão (MGC1 e MGC2) da bactéria Mycoplasma gallisepticum, foram clonados em E. coli. Dezessete grupos de aves livres de patógenos específicos (SPF), com quatro semanas de idade, foram inoculados com uma emulsão oleosa contendo as proteínas MGC1 e MGC2 purificadas. Seis concentrações (50, 100, 200, 400, 800, e 1000µg/ave) foram testadas com duas doses idênticas, às quatro e sete semanas de vida, respectivamente. Além disso, grupos controles foram avaliados com uma vacina comercial contra micoplasmose aviária, membrana de MG, grupo sem vacina/sem desafio, grupo vacina oleosa de MGC1 sem desafio, grupo com vacina oleosa de MGC2 sem desafio, grupo desafiado mas sem vacina. Três semanas após a segunda e a última vacinação, 50% dos animais dos grupos tratamentos foram desafiados com a cepa S6 de MG. O restante dos animais foi deixado como contato para averiguar proteção contra a transmissão horizontal da doença. Amostras de sangue de todas as aves foram coletadas antes das vacinações, do desafio e da eutanásia. As aves eram negativas para MG às quatro semanas de vida, conforme visto na aglutinação em placa. Na necropsia, tecidos (traqueia, pulmão e sacos aéreos) foram coletados para exame histopatológico. Suabes da traqueia foram utilizados para a PCR. Os resultados do ELISA demonstraram forte resposta imune contra as duas proteínas testadas e resposta similar independentemente do número de doses, provando a sua capacidade imunogênica. Porém, esta resposta humoral gerada foi incapaz de prevenir a infecção e a doença após desafio, conforme demonstrado pelos exames PCR e histopatológico. Aves-contato, inoculadas com MGC1, demonstraram estar infectadas nas análises de PCR. Além disso, os resultados do histopatológico e ELISA sugerem que os animais-contato não tiveram tempo suficiente para demonstrar lesões ou resposta imune.

Diferenciación de cepas de Mycoplasma gallisepticum a partir de RFLP / Differentiation of Mycoplasma gallisepticum Strains through RFLP

La micoplasmosis aviar es una enfermedad que afecta considerablemente al sector avícola, lo que se ve reflejado en la disminución de parámetros productivos en aves de engorde ponedoras de huevo fértil y ponedoras de huevo comercial. Los costos de su presentación son tan altos que es imposible la supervivencia de la avicultura industrial sin pensar en el control efectivo o en su erradicación. Existe un gran interés en la tipificación de cepas de M. gallisepticum(Mg) tanto vacunales como de campo, aspecto clave para el manejo de la enfermedad, pero aún no existe un método definitivo de caracterización de cepas de Mg. En la actualidad se están estudiando genes relacionados con proteínas de superficie —gapA y mgc2, lipoproteína (lp)— que permitan identificar y caracterizar genómicamente al Mg. En el presente estudio se amplificaron regiones del gen lp a partir de las cepas F y Ts-11 del Mg por la técnica de reacción en cadena de la polimeras a (PCR) que dio un amplicón de 455 pb para cada una de las cepas; a cada uno de las aplicaciones se les hizo la prueba de polimorfismo de longitud de los fragmentos de restricción (RFLP) con la enzima Taq I, lo que permitió diferenciar cepas vacunales de cepas de campo obtenidas a partir de muestras de hisopos traqueales tomados en granjas de explotación comercial. Se demostró que el PCR-RFLP es un método adecuado de diagnóstico de la micoplasmosis en nuestro medio...

Avian mycoplasmosis is a disease that considerably affects the poultry sector, which is reflectedin the decrease of the production parameters in fertile and commercial egg layingbroilers. Presentation costs are so high that it is impossible for the poultry industry to survivewithout thinking of its effective control or eradication. There is great interest in the type ofM. gallisepticum (Mg) strains, both vaccine and field, which are key aspects to handle thedisease, but there is still no definitive method for Mg strain characterization. Genes relatedto surface proteins —gapA and mgc2,lipoprotein (lp)— that make it possible to identify andcharacterize the Mg genomically are currently being studied. In this study, regions of the lpgene were amplified from strains F and Ts-11 of Mg through the polymerase chain reaction(PCR) technique, which gave an amplicon of 455 bp for each of the strains; each of amplicons was applied the restriction fragment length polymorphism (RFLP) test with theTaq I enzyme, which made it possible to differentiate vaccine strains from field strains obtainedfrom tracheal swab samples taken at commercial farms. It was demonstrated that PCRRFLPis an appropriate method of diagnosis of mycoplasmosis in our environment...

A micoplasmose aviar é uma doença que afeta consideravelmente o setor avícola, isso se refletena diminuição de parâmetros produtivos em aves de engorde poedeiras de ovo fértil epoedeiras de ovo comercial. Os custos de sua apresentação são tão altos que é impossível asobrevivência da avicultura industrial sem pensar no controle efetivo ou em sua erradicação.Existe um grande interesse na tipificação de cepas de M. gallisepticum (Mg) tanto vacinaiscomo de campo, aspecto chave para o manejo da doença, mas ainda não existe um métododefinitivo de caracterização de cepas de Mg. Na atualidade estão sendo estudados genes relacionadoscom proteínas de superfície —gapA e mgc2, lipoproteína (lp)— que permitamidentificar e caracterizar genômicamente ao Mg. No presente estudo se amplificaram regiõesdo gen lp a partir das cepas F e Ts-11 do Mg pela técnica de reação em cadeia da polimerase(PCR) que deu um amplicon de 455 pb para cada uma das cepas; a cada um dos ampliconsfoi feito o teste de polimorfismo de longitude dos fragmentos de restrição (RFLP) com aenzima Taq I, o que permitiu diferenciar cepas vacunais de cepas de campo obtidas a partirde mostras de mostras traqueais tomadas em granjas de exploração comercial. Demonstrou-seque o PCR-RFLP é um método adequado de diagnóstico da micoplasmose em nosso meio...

Mycoplasma gallisepticum como fator de risco no peso de lotes de frangos de corte com condenação por aerossaculite na Inspeção Sanitária Federal / Mycoplasma gallisepticum as a risk factor on weight of broilers condemnated with airsacculitis by Federal Sanitary Inspection

A Indústria avícola brasileira cresce anualmente e se torna cada vez mais representativa na produção e exportação dos seus produtos. Os cuidados com a sanidade avícola têm acompanhado e favorecido essa evolução, entretanto, agentes respiratórios que afetam o peso e a qualidade da carcaça, continuam a provocar grandes prejuízos à produção avícola. A aerossaculite é considerada uma das principais causas da condenação total e/ou parcial de carcaças de frangos de corte, sendo de grande importância Mycoplasma gallisepticum (MG). O objetivo do presente estudo foi detectar MG pela PCR e correlacionar sua positividade a aerossaculite, queda de peso e condenação de carcaças de lotes de frangos de corte na Inspeção Sanitária Federal. Do total de 40 lotes de frangos de corte abatidos sob Inspeção Sanitária Federal, localizado no Estado do Rio Grande do Sul, Brasil, foram selecionados ao acaso. Em cada lote, três frangos de corte, independente de sexo, foram randomicamente selecionados para necropsia, sendo as traquéias coletadas e agrupadas em pool para formação de uma amostra para análise. Pela PCR, o DNA foi extraído pelo método de fenol-clorofórmio e amplificado com pares de "primers" específicos para MG. Dos 40 lotes analisados pela PCR, 20% (8/40) foram positivos para MG. Houve relação entre a positividade para MG, aumento da taxa de aerossaculite e queda de peso por Regressão Logística Múltipla (p<0,05), LogitPi= 7,9409 + (0,5601 x X1) - (3,3080 x X2). O aumento da taxa de aerossaculite esteve relacionada à queda de peso por Regressão Linear Simples (p<0,05), Y= 2, 1050-0,6397X. Em conclusão, a positividade por MG está relacionada à aerossaculite que provoca queda de peso em frangos de corte. Em adição, a PCR foi uma técnica eficaz para a detecção de MG em lotes de frangos de corte, não sendo este diagnóstico influenciado pelo tipo de colheita do material biológico, por escarificado ou swab de traquéia.

The Brazilian poultry industry improves annually and is more representative on production and exportation of their products. Care on poultry health cooperates to these developments, however, respiratory agents that affect weight and carcass quality, continue to threaten poultry production. Airsacculitis is considered the main cause of total and/or partial condemnation of broilers carcasses, being Mycoplasma gallisepticum (MG) the most important agent of it. This study aimed to detect MG by "Polymerase Chain Reaction" (PCR) and to correlate its positivity with airsacculitis, weight losses and condemnated broilers by Federal Sanitary Inspection. A total of 40 flocks of slaughter broilers under Federal Inspection in Rio Grande do Sul, Brazil, were randomly selected. In each flock three broilers, regardless of sex, were randomly chosen for necropsy where tracheas were collected and polled in one sample for analysis. For PCR, DNA was extracted by the method of phenol-chloroform and amplified with pairs of specific primers for MG. From the 40 flocks PCR analyzed, 20% (8/40) were positive for MG. MG detection was found to be correlected with airsacculitis increase and weight decrease by multiple logistic regression equation (p<0,05), LogitPi= 7.9409 + (0,5601 x X1) - (3.3080 x X2). Airsacculitis rate increase also correleted with decrease in body weight by simple linear regression equation (p<0.05), Y= 2.1050 - 0.6397X. In conclusion, MG positivity is related to airsacculitis which causes weight loss in broilers. In addition, the PCR was an effective technique for the detection of MG in flocks of broilers, but was not affected by the kind of biological specimens collected, as tracheal scraping or swab.

In vitro behavior of Mycoplasmagallisepticumlive-type nosode / Comportamento in vitro do bioterápico tipo nosódio vivo mycoplasmagallisepticum / Conducta in vitro de nosodio vivo de mycoplasmagallisepticum

As a step of a doctoral research project, in this study a live-type nosode was prepared from microorganism Mycoplasmagallisepticum strain R (ATCC 93-08/19610) according to Costa model and the rules by Brazilian Homeopathic Pharmacopoeia. Live nosode was tested in vitro to assess safety when used to immunize domestic fowl (Gallus gallus) against infection by this microorganism and to investigate its behavior under laboratory conditions. M. gallisepticum was not shown to grow in fluid (broth) and solid (plate) modified Frey medium with dilutions 11d, 12d, 20d and 30d. Inhibition halos about 2.0 mm were observed around paper disks impregnated with live-type nosode in microorganism-sown Petri dishes, whereas disks impregnated with conventional antibiotic oxytetracycline exhibited 8.0 mm inhibition halos. Protein assessment by Folin-Lowry method showed protein absence in dilutions 12d and 30d and neither microbial DNA traces were found in PCR assay in dilutions 12d, 20d and 30d.

Una etapa de un proyecto de doctorado, en este estudio fue preparado un nosode vivo del microorganismo Mycoplasmagallisepticumcepa R (ATCC 93-08/19610) según el modelo de Costa y las normas de la Farmacopea Homeopática Brasileña. El nosode vivo fue testeado in vitro para determinar su seguridad cuando utilizado para inmunizar aves domésticas (Gallus gallus) contra la infección por este microorganismo e investigar su conducta en condiciones de laboratorio. Fue observado que M. gallisepticum no creció en medio modificado de Frey líquido (caldo) y sólido (placa) con las diluciones 11d, 12d, 20d y 30d. Fueron observados halos de inhibición de aproximadamente 2,0 mm alrededor de discos de papel impregnados con el nosode vivo en placas de Petri sembradas con el microorganismo, mientras fueron observados halos de inhibición de 8,0 mm en los discos impregnados con el antibiótico convencional oxitetraciclina. La medición de proteínas mediante el método de Folin-Lowry evidenció ausencia de proteínas con las diluciones 12d y 30d y ausencia de vestigios de DNA microbiano por PCR con las diluciones 12d, 20d y 30d.

Como parte do experimento de uma tese de doutorado, um bioterápico do tipo nosódio vivo utilizando o microrganismo Mycoplasmagallisepticum estirpe R (ATCC 93-08/19610) foi preparado de acordo com o paradigma desenvolvido por Costa, observando as normas da Farmacopeia Homeopática Brasileira. O nosódio vivo foi testado in vitro com a finalidade de avaliar a segurança de sua utilização para imunizar galinhas domésticas (Gallus gallus) contra a infecção pelo microrganismo M.gallisepticum, e também conhecer seu comportamento sob condições de laboratório. Não houve crescimento de M. gallisepticum no cultivo em meio de Frey modificado líquido (caldo) e sólido (placa) das diluições 11d, 12d, 20d e 30d, enquanto que as diluições 1d e 10d mostraram crescimento do microrganismo. Foram observados halos de inibição de cerca de 2,0 mm em torno de discos de papel impregnados com o nosódio vivo em placas de Petri cultivadas com o microrganismo, enquanto os discos impregnados com o antimicrobiano convencional oxitetraciclina apresentaram halos de inibição de 8,0 mm. A dosagem de proteína pelo método de Folin-Lowry identificou a ausência de proteínas nas diluições 12d e 30d, assim como também não foram encontrados traços de DNA microbiano na prova de PCR para as diluições 12d, 20d e 30d.

Molecular characterizaton of mycoplasma gallisepticum isolated from chicken and turkey

Mycoplasma gallisepticum [MG] infection in chicken and turkey is still one of the important reasons causing economic losses in poultry. The current study concerned with rapid detection and molecular characterization of MG isolates. The all samples positive by culture were positive by PCR and rt- PCR. Five isolated [four from chicken and one from turkey] were sequenced for mgc2 gene. The present molecular study proved that four wild-type MG strains. [Eis 3- C-10, Eis 4- C-10, Eis 5- C-10 were recovered from chicken and one [Eis 6-T-10] was recovered from turkey. While Eis 7-C-10 [vaccinal F-strain] was isolated from commercial layer flock vaccinated with F- strain vaccine. We concluded that mgc2 gene was able to distinguish between MG wild - type and vaccinal strains

Epidemiological survey on Mycoplasma gallisepticum and M. synoviae by multiplex PCR in commercial poultry / Investigação epidemiológica de Mycoplasma gallisepticum e M. synoviae por PCR Multiplex em estabelecimentos comerciais de aves

Mycoplasmas are important avian pathogens, which cause respiratory and joint diseases that result in large economic losses in Brazilian and world-wide poultry industry. This investigation regarding the main species of mycoplasmas, Mycoplasma gallisepticum (MG) and M. synoviae (MS), responsible for the above mentioned conditions, was carried out through PCR Multiplex analysis. One thousand and forty-six (1,046) samples of tracheal swabs and piped embryos were collected from 33 farms with laying hens, breeders, broilers or hatchery, located in the Brazilian states of São Paulo, Paraná and Pernambuco, where respiratory problems or drops in egg production had occurred. The MG and MS prevalence on the farms was 72.7 percent. These results indicated (1) high dissemination of mycoplasmas in the evaluated farms, with predominance of MS, either as single infectious agent or associated with other mycoplasmas in 20 farms (60.6 percent), and (2) an increase of MS and decrease of MG infection in Brazilian commercial poultry.

Os Micoplasmas são importantes patógenos aviários que causam doenças respiratórias e de articulações que resultam em grandes perdas econômicas para a indústria avícola brasileira e mundial. O estudo das principais espécies de Mycoplasma, Mycoplasma gallisepticum (MG) e M. synoviae (MS), responsáveis pelas doenças mencionadas acima, foram analisadas pela técnica de PCR Multiplex. Foram colhidas 1046 amostras de suabe traqueal e embriões bicados de 33 estabelecimentos de aves de postura, matrizes, frangos de corte e um incubatório, localizados nos Estados brasileiros de São Paulo, Paraná e Pernambuco, as quais apresentavam problemas respiratórios ou queda na produção de ovos. A prevalência de MS e MG nas granjas foi de 72,7 por cento. Os resultados indicaram uma alta disseminação de Mycoplasma nas granjas avaliadas, com predominância de MS, como um único agente infeccioso ou associado com outros micoplasmas em 20 granjas (60,6 por cento). Assim, este estudo indicou o aumento da incidência de MS e a redução de MG nas granjas comerciais no Brasil.

Evaluation of multiplex pcr based test in comparison with culture method for detection of mycoplasmosis in infected chickens

A total of 94 chicken samples were examinedfor Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma syjzoviae either by culturing procedure or by using the multiplex PCR. The comparative analysis of the obtained results indicated that the multiplex PCR was more sensitive and reliable in the detection of both organisms, where the multiplex PCR detected Mycoplasma gallisepticum in 20.21% of the tested samples while it gave 5.319% prevalence forMycoplasma synoviae. Moreover isolation and culturing procedures detected Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae in a prevalence rate of 15.956% and 2.127% of the tested samples comparatively. So these results concluded that, the multiplex PCR has become a valuable and easy test aiding in diagnosis of M. gallisepticum and M. synoviae infection in chickens