Quantification of the neurons of myenteric plexus of the bat molossus rufus / Quantificação dos neurônios do plexo mientérico de morcegos da espécie Molossus rufus

There are no studies that characterize the enteric nervous system (ENS) bats. The organization and density of myenteric neurons may vary according to the animal species, as well as the segment of the digestive tube considered. The nitric oxide is one of the key neurotransmitters present in the myenteric neurons, acting as a mediator in the smooth muscle relaxation. These neurons are evidenced by immunohistochemistry of nitric oxide synthase (NOS) or by NADPH-diaphorase histochemistry. In this sense, this study aimed to characterize the total neuronal population and subpopulation NADPH-d+ of the myenteric plexus present in the jejunum of the insectivore species Molossus rufus quantitatively. Five specimens were collected of M. rufus in a buffer area of the "Reserva Biológica das Perobas" in the microregion of Cianorte/PR. After the euthanasia, in a chamber saturated with isoflurane, segments were collected from the small intestine corresponding to the jejunum intended for two techniques for neuronal marking, Giemsa and NADPH-diaphorase, and a fragment to the histological technique of hematoxylin-eosin and Masson's trichrome. All the procedures were approved by the "Comitê de Ética no Uso de Animais Unipar" (CEUA - protocol No. 34347/2017) and the "Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade" (ICMBio - protocol No. 60061-1) The histological sections allowed to highlight the location of the myenteric plexus between the longitudinal and circular layers of the muscular tunic. The myenteric plexus had an average of total neuronal population (neurons Giemsa+) of 279.23 neurons/mm2, being the nitrergic neurons (neurons NADPH-d+) represented 20.4% of this total population, with an average of 58.14 neuron/mm2. Therefore, the collected data are consistent with previous studies in other mammalian species concerning the location of the myenteric plexus, as well as the neural myenteric proportion NADPH-d+ compared with the population of neurons Giemsa+. The gaps in the knowledge of ENS of bats limits comparative intraspecific and interspecific studies.(AU)

Não há estudos que caracterizem o sistema nervoso entérico (SNE) destes animais, configurando uma lacuna no conhecimento quanto à biologia destes indivíduos. A organização e densidade dos neurônios mientéricos podem variar de acordo com a espécie animal bem como o segmento do tubo digestório considerado. O óxido nítrico é um dos principais neurotransmissores presentes nos neurônios mientéricos, atuando como mediador no relaxamento do músculo liso gastrointestinal, de modo que estes neurônios são evidenciados igualmente pela imunohistoquímica da óxido nítrico-sintase (NOS) ou pela histoquímica da NADPH-diaforase. Neste sentido, objetivou-se caracterizar quantitativamente a população neuronal total e subpopulação NADPH-d+ do plexo mientérico presente no jejuno da espécie Molossus rufus de hábito alimentar insetívoro. Foram coletados cinco espécimes de M. rufus em área de amortecimento da Reserva Biológica das Perobas na microrregião de Cianorte/PR. Após a eutanásia, em câmara saturada com isoflurano, foram coletados segmentos do intestino delgado correspondentes ao jejuno destinados a duas técnicas para marcação neuronal, Giemsa e NADPH-diaforase e, um fragmento para a técnica histológica de hematoxilina-eosina e tricômio de Masson. Todos os procedimentos realizados foram aprovados pelo Comitê de Ética no Uso de Animais da Unipar (CEUA - protocolo nº 34347/2017) e pelo Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade (ICMBio - protocolo nº 60061-1) Os cortes histológicos possibilitaram evidenciar a localização do plexo mientérico entre os estratos longitudinal e circular da túnica muscular. Neurônios Giemsa+ apresentaram uma média de 279,23 neurônios/mm2, já os neurônios nitrérgicos apresentaram em média 20,4% da população neuronal mientérica total, sendo evidenciados 58,14 neurônios NADPH-d+/mm2. Portanto, os dados coletados mostram-se condizentes com estudos anteriores em outras espécies de mamíferos quanto à localização do plexo mientérico, bem como, a proporção neuronal mientérica NADPH-d+ comparada com a população de neurônios Giemsa+. As lacunas existentes quanto ao conhecimento do SNE de morcegos limita possíveis inferências em comparativo intraespecífico e interespecífico.(AU)

Chronic effect of vagotomy in the morphometry of the myenteric plexus of rats' duodenum / Efeito crônico da vagotomia sobre a morfometria do plexo mioentérico do duodeno de ratos

BACKGROUND: The gastrointestinal disorders have been associated with morphological alterations in the myenteric nervous plexus. AIM: To evaluate, through morphometric studies, the chronic effects of the subdiaphragmatic trunk vagotomy on the nervous plexus. METHODS: Fifteen male exemplars of Wistar Rattus novergicus weighing about 150g, distributed into three groups, have been used: control (n=5), Sham (n=5) and vagotomized (n=5). The animals were sacrificed after 30 and 90 days post surgery. Fragments of duodenum were fixed in Bouin solution, embedded into paraffin and stained with HE and PAS. Morphometric analysis was performed by a Carl Zeiss KM 450 image system. The following aspects were observed: the density of nervous cells per linear micrometer (µm) (ND); the area of perikarya (µm²) (NA); the number of satellite cells per µm (SCD); and the number of satellite cells per neuron (SC/N). The averages were compared with the help of "software" program Sigma Plus through two way - ANOVA and Tuckey post-test. RESULTS: Denervation increased SC/N (p<0,05) and NA (p<0,05), in a time-dependent denervation way (p<0,05). However ND and SCD, decreased, which significantly with the animal's age (p<0,001). CONCLUSION: Vagotomy altered the myenteric plexus morphology in a time-dependent way.

RACIONAL: As disfunções gastrintestinais têm sido associadas à alterações morfológicas no plexo nervoso mioentérico. OBJETIVO: Avaliar através do estudo morfométrico, os efeitos crônicos da vagotomia troncular subdiafragmática sobre esse plexo nervoso. MÉTODOS: Foram utilizados 15 exemplares machos de Rattus novergicus da variedade Wistar, com cerca de 150 g, distribuídos nos grupos controle (n=5), Sham (n=5) e vagotomizados (n=5). Os animais foram sacrificados depois de 30 e 90 dias após as operações. Em seguida, fragmentos do duodeno foram fixados em solução de Bouin, incluídos em parafina e corados por HE e PAS. A análise morfométrica foi realizada por meio do sistema de análise de imagem Carl Zeiss KM 450. Foram observados: a densidade de células nervosas por micrômetro linear (µm); a área dos pericários (µm²); o número de células satélites por µm; e o número de células satélites por neurônio. As médias foram comparadas com o auxílio do programa de "software" Sigma Plus através do Two way - ANOVA e do pós-teste de Tukey. RESULTADOS: A desnervação aumentou o número de células satélites por neurônios (p<0,05) e a área média dos pericários (p<0,05), de maneira dependente do tempo de desnervação (p<0,05), mas diminuiu significativamente a densidade de neurônios (p<0,05) e de células satélites (p<0,05) em função da idade (p<0,001). CONCLUSÃO: A vagotomia alterou a morfologia do plexo mioentérico de maneira dependente do tempo.

Atrophy of the nitrergic myenteric neurons in the descending colon rats submitted to protein and vitamin deficiency / Atrofia en neuronas mientéricas nitrérgicas en el colon descendente de ratas sometidas a deficiencia de proteínas y vitaminas

Effects of protein and B-complex vitamin deficiency were assessed with respect to the morphometry of myenteric neurons in the descending colon of adult rats. Sixteen animals were divided into two groups: Control Group (CG, n=8) and Experimental Group (EG, n=8). The CG received 22 percent protein chow and the EG received 4 percent protein chow for 120 days. The descending colon was submitted to NADH- and NADPH-diaphorase technique in order to evidence nervous cells in the whole mounts preparations. In the EG, NADH-d positive neurons presented reduced nuclei, while NADPH-d positive neurons showed atrophy of the soma area (~41.7 percent) inducing an increase of the proportion occupied by the nucleus inside in the soma of these cells.

Esta investigación buscó evaluar los efectos de la desnutrición proteica y vitamínica delcomplexo B sobre aspectos morfométricos del plexo mientérico del colon descendente de ratones adultos. Dieciséis animales fueron distribuidos en dos grupos: control que recibieron ración comercial con 22 por ciento de proteína y experimental alimentados con ración de tenor proteico reducido para 8 por ciento, durante 120 días. Neuronas del plexo mientérico presentes en preparados totales fueron evidenciados a través de la técnica histoquímica de la NADH-diaforasa y de la NADPH-diaforasa. En el grupo experimental, las neuronas NADH-d positivos sufrieron reducción del núcleo celular, ya las neuronas NADPH-d sufrieron atrofia de 41,7 por ciento de la superficie de su pericarion, lo que hizo con que el núcleo celular pasase a ocupar una mayor proporción de la región trófica de las neuronas.

Alterações morfométricas no plexo mioentérico do cólon menor equino distendido experimentalmente / Morphometrical alterations in myoenteric plexus of experimentally distended equine small colon

O cólon menor dos equinos é frequentemente acometido por afecções obstrutivas, sendo a disfunção da motilidade uma complicação comum após o tratamento cirúrgico. Este transtorno pode estar relacionado com lesões no plexo mioentérico ocorridas durante a distensão intestinal, contudo pouco se sabe sobre sua fisiopatologia. O objetivo deste estudo foi avaliar as alterações morfológicas na inervação mioentérica em segmentos de cólon menor de eqüinos submetidos à distensão intraluminal com pressão suficiente para promover redução da perfusão microvascular (isquemia parcial) da parede intestinal. Nove eqüinos foram submetidos à distensão do cólon menor por 4h. Fragmentos da parede intestinal foram colhidos antes e ao final da distensão, após 1,5 e 12 horas de reperfusão no segmento experimental e ao final do procedimento em segmento distante. As amostras foram fixadas e processadas rotineiramente e secções histológicas foram coradas com cresil violeta para a morfometria. Por meio de um software de análise de imagens, obtiveram-se a área, o perímetro e os diâmetros mínimo e máximo do corpo neuronal, do núcleo e do nucléolo dos neurônios e as áreas do citoplasma e do nucleoplasma. Verificou-se redução significativa (P<0,05) das áreas do corpo neuronal e do citoplasma ao final da distensão, retornando aos valores equivalentes aos iniciais durante a reperfusão. Conclui-se que a distensão intraluminal alterou morfologicamente os neurônios do plexo mioentérico. Essas modificações morfológicas podem estar associadas e contribuir para explicar a disfunção da motilidade freqüentemente observada em casos clínicos.

The equine small colon is frequently affected by obstruction, and intestinal motility dysfunction is a common complication after its surgical treatment. This fact may be related to myoenteric plexus lesion caused by distention; however, little is known about the pathophysiology of this condition. The objective of this study was to evaluate the morphological alterations in the myoenteric inervation of segments of small colon of horses subjected to intraluminal distension with reduction of the microvascular perfusion (partial ischemia) of the intestinal wall. Nine horses were used to promote distension of on segment of small colon for 4 hours. Samples of intestinal wall were collected before and at the end of the distension, after 1.5 and 12 hours of reperfusion in the experimental segment and at the end of the procedure in a different distant segment. Samples were processed and histological sections were stained with cresyl violet for the morphometric studies. An image analyzer software was used to measure perimeter, diameter, and area of the neuronal body, nucleus and nucleolus of the neurons and the areas of the cytoplasm and nucleoplasm. Significant reductions (P<0.05) in the areas of the neuronal body and cytoplasm were detected at the end of intestinal distension, returning to the basal values during the reperfusion. In conclusion, intraluminal distension promoted changes in the morphology of the neurons of myoenteric plexus. These morphological modifications may be associated to the motility dysfunction frequently observed in clinical cases.

Density and morphometry of overall myenteric neurons population from the duodenum of diabetic rats (Rattus norvegicus) under ascorbic acid supplementation / Densidad y morfometría de la población total de neuronas mientéricas del duodeno de ratones diabéticos (Rattus norvegicus) tratados con ácido ascórbico

The objective of this work was to evaluate the overall myenteric neurons population from the duodenum of adult streptozotocin-induced diabetic rats supplemented with ascorbic acid (AA), a potent antioxidant. Fifteen 90-day-old rats were divided in groups: control (C), diabetic (D), diabetic treated with ascorbic acid (DA). After 120 days of experimental period duodenums were resected and processed as whole-mount preparations according to Giemsa's technique, which allowed us to evaluate neuronal density in an area of 8.96 mm² and measure the area of 500 neuronal cell bodies per group. It was observed a 32.55% reduction in neuronal density of group D when compared to group C (p<0.05). The density of spared neurons in group DA, in relation to group D, was not statistically different in this experimental model. No significant differences were found in neuronal areas when groups C and D or group D and DA were compared (p>0.05). These results lead us to conclude that the density of overall myenteric neurons population from the duodenum was reduced in diabetic rats (D), when compared to its control (C); and that diabetic rats supplemented with AA (DA) did not have their neuronal density preserved when compared to diabetic animals (D).

El objetivo de este trabajo fue evaluar la población total de neuronas mientéricas del duodeno de ratones adultos inducidos a diabetes por estreptozotocina, suplementados con ácido ascórbico (AA), un poderoso antioxidante. Quince ratones con 90 días de edad fueron divididos en los grupos: control (C), diabético (D) y diabético tratados con ácido ascórbico (DA). Después de 120 días de tratamiento con AA, los duodenos fueron resecados y procesados con el método de Giemsa, el cual permitió evaluar la densidad neuronal, en un área de 8,96 mm², y medir el área del soma de 500 neuronas por grupo. Se observó una reducción de 32,55% de la densidad neuronal del grupo D con respecto grupo C (p<0,05). La densidad de las neuronas observada en el grupo DA, en relación con el grupo D, no fue estadísticamente significativa en este modelo experimental. No fueron encontradas diferencias significativas en las áreas de neuronas, cuando los grupos C y D o el grupo D y DA (p>0,05) fueron comparados. Nuestros resultados permitieron concluir que la densidad de la población total de las neuronas mioentéricas del duodeno estuvo reducida en los ratones diabéticos comparados con los controles, mientras que, los ratones diabéticos suplementados con AA no mantuvieron su densidad neuronal cuando fueron comparados con los animales del grupo diabético.

Efeitos da desnutrição protéica severa sobre aspectos morfológicos e quantitativos dos neurónios mientéricos do colón ascendente de ratos / Effects of severe protein malnutrition on morphomological and quantitave aspects of rat ascending colon myenteric neurons / Efectos de la desnutrición proteica severa sobre aspectos morfológicos y cuantitativos de las neuronas del plexo mientérico del colon ascendiente de ratones

Objetivou-se avaliar os efeitos da desnutrição protéica sobre os aspectos morfológicos e quantitativos do plexo mientérico do colón ascendente de ratos adultos. Os animais controle (n=5) receberam ração comercial com 26% de proteína e os animais experimentais (n=4) ração com teor protéico reduzido para 4%, durante 90 dias. Por dissecção, elaboramos preparados totais, que foram corados pela técnica de Giemsa. Os ratos desnutridos apresentaram peso corporal 43,14% menor. A média da área do colón ascendente e a densidade neuronal estavam, respectivamente, 38,90% menor e 25,79% maior, em relação aos animais do grupo controle. Não foi observada redução no número total de neurônios mientéricos do cólon nos animais desnutridos. Dados morfométricos demonstraram aumento na área do pericário destes neurônios.

The effects of protein malnutrition on morphological and quantitative aspects of the myenteric plexus of adult rat ascending colon. The control animals (n=5) received 26%-protein commercial feed while the experimental (n=4) received 4%-protein commercial feed for 90 days. Whole mount preparations were Giemsa stained for dissection. Malnourished rats presented 43.14% lighter body weight. The means of the ascending colon area and the neuronal density were 38.90% lower and 25.79% higher, respectively, in relation to the Control Group. No reduction of the total number of colon myenteric neurons of malnourished animals was noticed. Morphometric data showed an increase of the perikarium of these neurons.

Esta investigación tuvo como objeto evaluar los efectos de la desnutrición proteica sobre los aspectos morfológicos y cuantitativos del plexo mientérico del colon ascendiente de ratones adultos. Los animales control (n=5) recibieron ración comercial con 26% de proteína y los animales experimentales (n=4) ración con tenor proteico reducido para 4%, durante 90 días. Por disección, elaboramos preparados totales, que fueron coloreados por la técnica de Giemsa. Los ratones desnutridos presentaron peso corporal 43,14% menor. La media del área del colon ascendiente y la densidad neuronal estaban, respectivamente, 38,90% menor y 25,79% mayor, en relación a los animales del grupo control. No fue observada reducción en el número total de neuronas del plexo mientérico del colon, en los animales desnutridos. Datos morfométricos demostraron aumento en el área del pericario de estas neuronas.

Morphometry of myenteric neurons in stomach.

The wall of the gastrointestinal tract presents extensive plexuses of nerve fibres and neuronal cell bodies responsible for the modulation of the rhythmic gastrointestinal peristaltic activities, among other functions. One of the most developed ganglionated plexuses of the gastrointestinal tract is the Myenteric plexus located between the inner circular layer and outer longitudinal layer of the smooth muscle tunica. The musculature of fundus, body and pyloric parts of stomach are differently disposed and they perform different functions. Thus the present study was conducted to study the myenteric plexus of all parts of stomach by counting the number of collections of neurons, number of neurons in each collection, diameter and area of the neurons of the plexus. The stomach walls of 1 cm in size were taken from 5 cadavers of medical post mortem cases from Postgraduate Institute of Medical Sciences and Research, Chandigarh and were processed for paraffin sections. 5 and 10 micro thick sections were stained with haematoxylin and Eosin and examined under light microscope. Randomly selected sections were photomicrographed using digital camera and morphometrical analysis was done using Image-Pro Express software. Number of collections of neurons was maximum in fundus with an average of 4.521 and each collection on an average contain 5.27 neurons ranging from 1-31, while body had 3.292 collections containing 1-19 neurons (mean: 3.198), pylorus had 3.883 collections of neurons which contained 1-16 neurons (mean: 4.411). The neurons were classified as small, medium and large according to the size of the area of their cell bodies. In this way, 11.3% neurons were found to be small, 69.5% medium and 19.1% large in fundus, 8.7% small, 80.6% medium and 11.2% large in body and 11.1% small, 74.3% medium and 14.5% large in pylorus.

Análise morfométrica e quantitativa dos neurônios do plexo mientérico do ceco de ratos submetidos a intensa carência de proteína / Análisis morfométrica y cuantitativa de las neuronas del plexo mientérico del ceco de ratas sometidos a una intensa carencia de proteína / Quantitative and morphometric analysis of myenteric neuron from the cecum of rats submitted to intensive protein deficiency

Avaliaram-se os efeitos crônicos de uma dieta severamente hipoprotéica, sobre aspectos quantitativos e morfométricos de neurônios mientéricos, NADPH-diaforase positivos do ceco de ratos jovens. Oito ratos foram divididos em dois grupos, sendo que para um dos grupos foi oferecida ração com teor protéico de 26% (controle) e, para o outro, ração com o teor protéico de 4%, mantendo-se o balanço vitamínico e mineral durante 12 semanas. Após eutanásia, o ceco de cada animal foi coletado e dissecado para confecção de preparados de membrana, os quais foram submetidos à técnica da NADPH-diaforase. Para contagem e mensuração destes neurônios, o ceco foi dividido em quatro regiões: apical mesentérica; apical antimesentérica; basal antimesentérica; próxima à ampola cecal. Não se observou alteração significativa para o peso dos animais, área do ceco e densidade populacional dos neurônios mientéricos no final do experimento. Por outro lado, em algumas regiões do ceco, os neurônios tiveram redução da área nuclear, com conseqüente redução da área do pericário

The chronicle effects of a severe hypoproteic diet on quantitative and morphometric aspects of NADPHdiaphorase-positive myenteric neurons from the cecum of young rats were assessed. Eight rats were divided into two groups. One group (control) was fed with 26%-protein chow and the other with 4%-protein chow during 12 weeks. The vitamin and mineral balance was kept. After euthanasia, the cecum of each animal was collected and dissected for the whole-mount preparation, which were submitted to NAPDH-diaphorase. The cecum was divided into four regions for counting and measurement of neurons: apical mesenteric, antimesenteric apical, basal antimesenteric, and next to the cecal ampulla. Significant alterations were not noted with respect to the weight of the animals, cecum area, and population density of myenteric neurons at the end of the experiment. On the other hand, in some regions of the cecum, the neurons presented a reduction of the nuclear area with resulting reduction of the soma area

Se evaluaron los efectos crónicos de una dieta severamente hipoprotéica, sobre aspectos cuantitativos y morfométricos de neuronas mientéricos, NADPH-diaforase positivos del ceco de ratas jóvenes. Ocho ratas fueron divididas en dos grupos, siendo que para uno de los grupos fue ofrecida ración con tenor proteico de 26% (control) y, para el otro, ración con el tenor proteico de 4%, manteniéndose el balance vitamínico y mineral durante 12 semanas. Tras eutanasia, El ceco de cada animal fue recolectado y disecado para confección de preparados de membrana, los cuales fueron sometidos a la técnica de la NADPH-diaforase. Para recuento y mensuración de estas neuronas, el ceco fue dividido en cuatro regiones: apical mesentérica, apical antimesentérica, basal antimesentérica y próxima a la ampolla cecal. No se observó alteración significativa en el peso de los animales, área del ceco y densidad poblacional de las neuronas mientéricas al final Del experimento. Por otro lado, en algunas regiones del ceco las neuronas tuvieron reducción del área nuclear, con consecuente reducción del área del pericario

The effect of both protein and vitamin b complex deficiency on the morphoquantitative features of the myenteric plexus of the ascending colon of adult rats / Efeito da carência de proteínas e vitaminas do complexo b sobre aspectos morfoquantitativos do plexo mioentérico do colo ascendente de ratos adultos / Efecto de la carencia de proteínas y vitaminas del complejo b sobre aspectos morfo-cuantitativos del plexo mioentérico del regazo ascendiente en ratones adultos

O objetivo deste estudo foi estudar os efeitos da desnutrição protéica e da carência de vitaminas do complexo B sobre o plexo mioentérico do colo ascendente de Rattus norvegicus. Vinte ratos foram divididos em dois grupos, sendo que, para um dos grupos foi oferecida ração com teor protéico de 22% (controle) e, para outro, ração com teor protéico de 8% com menor teor de vitaminas do complexo B, durante 120 dias. Coramos os preparados de membrana do colo ascendente pelo método de Giemsa e pela técnica da NADH-diaforase. Os ratos desnutridos apresentaram peso corporal 14,8% menor que o grupo controle, média da área do colo 54,2% menor, e a média da densidade neuronal foi 26,7% maior com a técnica de Giemsa e 27% com a técnica da NADH-diaforase. Como a redução da área não foi acompanhada por um aumento inversamente proporcional na densidade de neurônios, sugere-se que a condição imposta causou perda de neurônios mioentéricos.

This study was performed in order to study the effects of protein desnutrition and vitamin B complex deficiency on the myenteric plexus of the ascending colon of Rattus norvegicus. Twenty rats were divided into two groups; one had been fed with a 22%-protein-level ration, and the other with a 8%-protein-level without vitamin-B-complex supplementation, for 120 days. The whole-amounts of the ascending colon were stained with either Giemsa or NADH-diaphorase technique. The disnurtured rats showed a 14.8% smaller body weight than the control group, and the area of colon of the sample group was 54.2% smaller. The average neuronal density was 26.7% greater with the Giemsa technique and 27% greater with the NADH-diaphorase technique. As the decrease in area was not accompanied by an inversely proportional increase in neuronal density, it is suggested that the experimental condition led to a myenteric neuron loss.

El objetivo de este estudio fue analisar los efectos de la desnutrición proteica y de la carencia de vitaminas del complejo B sobre el plexo mioentérico del regazo ascendiente de Rattus norvegicus. Veinte ratones fueron divididos en dos grupos, siendo que, para uno de los grupos se ofreció ración con contenido proteico de 22% (control) y, para el otro, ración con contenido proteico de 8% con menor contenido de vitaminas del complejo B, durante 120 días. Coloreamos los preparados de membrana del regazo ascendiente por el método de Giemsa y por la técnica de la NADH-diaforasis. Los ratones desnutridos presentaron peso corporal 14,8% menor que el grupo control, promedio del área del regazo de 54,2% menor, y el promedio de la densidad neuronal fue 26,7% mayor con la técnica de Giemsa y 27% con la técnica de la NADH-diaforasis. Como la reducción del área no fue acompañada por un aumento inversamente proporcional en la densidad de neuronas, se cree que la condición impuesta causó pérdida de neuronas mioentéricos.

Morphological and quantitative analyses of the NADH-d myenteric neurons of the jejunum of rats submitted to experimental chronic alcoholism / Análisis Morfológico y Cuantitativo de de Neuronas Mientéricas NADH-d del Yeyuno de Ratas Sometidas a Alcoholismo Crónico Experimental

El objetivo del trabajo fue verificar, durante un período experimental de 210 días, los posibles efectos del etanol sobre la morfología y densidad de las neuronas mientéricas NADH-diaforasa, en el yeyuno de ratas alcohólicas. Utilizamos 10 animales (Rattus norvegicus) separadas en dos grupos: el control (n=5) que recibió una dieta proteica normal (22 por ciento) y agua ad libitum; el otro, alcohólico, que recibió dieta proteica normal NUVILAB (22 por ciento) y brandy de azúcar de caña diluido a 30 Gay Lussac (30 v/v). El segmento de yeyuno fue obtenido y sometido a técnicas histoquímicas para teñir las células nerviosas. La observación a través de microscopía de luz mostró que no hubo diferencias morfológicas de importancia entre las neuronas del grupo control y el sometido a alcoholismo. El recuento neuronal en el grupo control, llevado a cabo en 40 campos microscópicos (8,96 µm2), de las regiones mesentérica y antimesentérica, determinó 1.131 y 693 neuronas, respectivamente, mientras que en el grupo alcohólico se encontraron 1.229 y 860 neuronas, respectivamente. El incremento significativo en el número de neuronas en la región mesentérica, en el grupo de las ratas alcohólicas, es debido a un crecimiento físico menor de esos animales comparados con el grupo control. El etanol causó malnutrición y consecuentemente, las ratas alcohólicas mostraron una densidad neuronal más amplia debido a una dispersión menor.

The objective of our work was to verify, during an experimental period of 210 days, the possible effects of the ethanol on the morphology and density of the NADH-diaforase myenteric neurons in the jejunum of alcoholic rats. We used 10 animals (Rattus norvegicus) separated in 2 groups: the controls (n=5), that received a normal proteic diet (22%) and water ad libitum; the alcoholic, that received NUVILAB normal proteic chow (22%) and sugar cane brandy diluted at 30 Gay Lussac (30 v/v). The jejunum segment was collected and submitted to the histochemical technique to stain the nervous cells and, then, to the elaboration of membrane whole mounts. The observation through light microscopy showed that there are no expressive morphologic differences between the ganglia of neurons of the control and alcoholic rats. The counting of neurons, carried out in 40 microscopic fields (8.96µm2) in the control group, at the mesenteric and antimesenteric regions, found 1,131 and 693 neurons respectively, while, the alcoholic group found 1,229 and 860 neurons. The significant increase in the number of neurons in the mesenteric region, in the alcoholic rats, is due to the smaller physical growth of those animals when compared to the controls. The ethanol caused malnutrition and consequently the alcoholic rats showed a larger neuronal density due to its smaller dispersion.

Profile of the cell body of nadh-diaphorase positive myenteric neurons from the stomach of rats (Rattus norvegicus) subjected to chronic alcoholism

O objetivo do trabalho foi comparar o perfil dos corpos celulares dos neurônios mioentéricos NADH-diaforase positivos do estômago de ratos. Utilizou-se 10 animais (Rattus norvegicus), provenientes dos grupos: a) controle (n=5), que durante 210 dias receberam, ad libitum, dieta com teor protéico normal (22 por cento) e água; e b) experimental (n=5), que durante 210 dias receberam, ad libitum, ração com teor protéico normal (22 por cento) e aguardente-de-cana diluída a 30 Gay Lussac (30º v/v). Os estômagos coletados foram submetidos à técnica de evidenciação neuronal. A mensuração do perfil dos corpos celulares dos neurônios (n=1.000) foi através de um Sistema Computadorizado de Análise de Imagem. O perfil dos corpos celulares dos neurônios do grupo controle ficou entre 60,16 a 638,64 m2. No grupo experimental variou de 40,84 a 599,15 µm2. Constatamos redução significante no tamanho do corpo celular, aumento de neurônios pequenos e diminuição de neurônios grandes

Avaliação quantitativa e mofométrica dos neurônios mioentéricos da região agrandular do estômago de ratos com Diabetes Mellitus induzido por estreptozootocina e suplementados com ácido ascórbico / Quantitative and morphometric evaluation of myenteric neurons of the forestomach of streptozotocin-induced diabetic rats supplemented with ascorbic acid

O presente trabalho teve como objetivos investigar possíveis alterações no número e a área do corpo celular dos neurônios mioentéricos NADH-diaforase reativos (NADH-dr) da região aglandular do estômago de ratos diabéticos e o efeito da suplementação com AA (1g/L de água) nos referidos parâmetros. Para tanto, 15 ratos (Rattus norvegicus) foram separados em três grupos (n = 5): controle (C); diabético (D); e diabético suplementado com AA (DS). O DM foi induzido por estreptozootocina (35 mg/kg de peso corporal). Após 120 dias de experimento, os animais foram anestesiados para obtenção do estômago. Os neurônios mioentéricos foram evidenciados pelo método da NADH-diaforase. Por meio de microscópio de luz foram contados os neurônios NADH-dr e, pelo programa computadorizado para análise de imagens, foi mensurado o perfil do corpo celular (PCC) desses neurônios. O número de neurônios NADH-dr não variou significativamente entre os três grupos estutados (P>0,05). A média dos PCCs foi maior (P<0,05) para os neurônios dos grupos D e DS do que para o grupo C. Ocorreu aumento na incidência de neurônios com PCC superior a 200 µm2 no grupo D quando comparada aos grupos DS e C. Os resultados sugerem que a suplementação com AA teve efeito neuroprotetor sobre os neurônios mioentéricos NADH-dr representado pela diminuição da freqüência de neurônios grandes na região aglandular A e B do grupo DS

Resposta dos neurônios mioentéricos do duodeno de ratos ao diabetes de curto prazo / Response of the myenteric neurons of the rat duodenal to short-term diabetes

Foram avaliados os neurônios mioentéricos do duodeno de ratos com diabetes de curto prazo induzido por estreptozootocina com e sem tratamento com insulina. A densidade de neurônios NADH diaforase positivos no duodeno dos ratos diabéticos aumentou em relação aos controles, indicando uma resposta neuronal precoce ao estado diabético. Por outro lado, a sub-população neuronal NADPH diaforase positiva não mostrou alterações significativas de densidade quando os grupos controle diabético não tratado e diabético tratado com insulina foram comparados, indicando que esses neurônios são resistentes ao diabetes de curto prazo. O tratamento com insulina melhorou a condição fisiológica dos ratos diabéticos tratados em comparação com o grupo diabético não tratado, mas não evitou o aumento na densidade neuronal, avaliada pela coloração com a NADH diaforase, no duodeno dos ratos diabéticos tratados comparados com os não tratados

Estudo morfoquantitativo do plexo mioentérico do duodeno de ratos submetidos a carência de proteínas e vitaminas do complexo B / Morphoquantitative study of the duodenum myenteric plexus from rats subjected to lack of proteic and complex B vitamins

Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos das carências protéica e vitamínica sobre os neurônios do plexo mioentérico do duodeno de ratos. 24 animais, aos 90 dias de idade, foram divididos em dois grupos: controle (n=12) e experimental (n=12). Durante 120 dias, o grupo controle recebeu ração com teor protéico de 22 por cento, vitaminas e minerais; o grupo experimental, 8 por cento, sem suplementação de vitaminas. Após período experimental, coletou-se o sangue dos animais e retirou-se o duodeno para análise ultraestrutural e morfoquantitativa (NADH-d; NADPH-d). O grupo experimental apresentou proteínas totais e albumina plasmática reduzidas e peso inferior aos do grupo controle. A densidade (NADPH-d) foi maior e significante para o grupo experimental; na técnica da NADH-d, o perfil neuronal diferiu entre os grupos. Os aspectos ultraestruturais mostraram-se semelhantes entre os grupos. Os resultados permitem concluir que a dieta imposta promoveu um quadro moderado de desnutrição, não provocando alterações quantitativas, porém levou a alterações no perfil neuronal

Density and morphometry of myenteric neurons of the ileum of rats subjected to chronic alcoholism

This work verified the changes caused by ethanol ingestion on the myenteric neurons of the ileum of rats subjected to chronic alcoholism. Twenty rats (Rattus norvegicus) were divided in control (GC) and alcoholic (GA) groups during 210 days. The animals from group GA received sugar-cane brandy diluted to 30 GL and those from group GC received water. Both groups were fed with rodent chow ad libitum. The ileum was prepared as whole-mounts for neuronal staining according to Barbosa (1978) and Gabella (1979). The neurons were counted and the cell bodies were measured. The statistical analysis revealed a significant decrease in the number of large neurons in GA compared with GC, while there was a significant increase in the number of small neurons in GA. There was a smaller body growth in GA, thus causing a smaller spread of the nerve cells and a larger number of neurons evidenced by the techniques of Giemsa and NADH-diaphorase in the alcoholic animals than in the controls, and a decrease in the size of the cell bodies, evidenced by the increase in the proportion of small neurons and decrease in the proportion of large nerve cells.

Morphometry and quantification of the myenteric neurons of the duodenum of adult rats fed with hypoproteic c how

Morphometric and quantitative analyses were carried out on the myenteric neurons of the duodenum, to study possible alterations resulting from a supply of low-protein level chow to adult Wistar rats. The animals were divided in two groups: nourished (N) fed with ration containing 22 per cent protein for 210 days and the undernourished (D) fed with ration containing 8 per cent protein from the 90th day of age on and during the next 120 days. Whole-mounts were stainedby the method of Giemsa and the histochemical reaction of NADH-diaphorase enzyme, to estimate the neuronal population, which revealed a greater neuronal density in undernourished rats, regardless of the technique employed. The morphometric studies of the cell body profiles of 500 neurons of each group indicated a reduction on the cell body size and an increase on the proportion of small neurons on the rats subjected to the hypoproteic chow.

Morphoquantitative study of aging of the guinea pig´s myenteric plexus collum

Applying the NADH technique in the myenteric plexus' collum of young and aged guinea pigs, we have studied the morphology of ganglions and neurons, the number and arrangment of neurons and the profile area of neuronal bodies. Ganglions preferentialy elongated or without a defined morphology were observed in five collum segments (proximal, intermediate proximal, medial, intermediate distal and distal). There were no important differences in this aspect from one segment to another, whether in the same age group or between the two studied groups. It has also been observed the presence of relatively small ganglions containing a reduced number of neurons and big ganglions containing a high number of these cells. The neurons were more compacted in the ganglions of the individuals from the younger group, while the majority of ganglions from the individuals of the aged group were more equally divided. Neurons mainly roundish and oval were found in both groups, neurons with the cytoplasmic contour greatly altered could be observed in various ganglions of aged animals. Concerning the area of cellular profile, the majority of neurons of both groups were found in the interval between 101 and 300 µm2. Based on the determination of the fragment's area of each collum division, the density of neurons for cm2 was estimated, as well as the total neuronal density, in which the individuals of the aged group was aproximately 46 percent smaller than that of the individuals from the younger group.

Avaliação morfométrica de neurônios mioentéricos do duodeno de ratos (rattus norvegicus) adultos normais e com diabetes experimental / Morphometric evaluation of myenteric neurons of the duodenum of normal and experimentally diabetic adult rats (rattus norvegicus)

O diabetes mellitus é uma doença que reduz a expectativa e a qualidade de vida do indivíduo portador. Várias alterações ocorrem nos diversos órgãos do organismo, inclusive no sistema digestório. Os neurônios entéricos, responsáveis pela manutenção e coordenação das funções digestivas, também são afetados pela doença. O presente estudo analisa as alterações morfométricas dos neurônios mioentéricos duodenais de ratos com diabetes agudo induzido por estreptozootocina em comparação com ratos controles, criados sob as mesmas condições ambientais. As análises morfométricas foram feitas com equipamento computadorizado a partir de preparados de membrana corados pela técnica da NADH-diaforase. Os animais diabéticos apresentaram, de um modo geral, uma população neuronal mioentérica de menor tamanho em relação aos controles, especialmente na região antimesentérica da circunferência duodenal. Neurônios pequenos foram menos abundantes no duodeno dos animais controles, indicando possivelmente uma desidratação neuronal nos animais diabéticos, decorrente do quadro experimental

Densidade dos neurônios mioentéricos nadh-diaforase positivos do jejuno de ratos (rattus norvegicus) / Density of nadh-diaphorase positive myenteric neurons in the rat jejunum

Considerando a importância do conhecimento de particularidades do plexo mioentérico em cada segmento intestinal para subsidiar estudos anatômicos, fisiológicos e condições experimentais, realizamos a presente pesquisa como o objetivo de estudar a densidade de neurônios mioentéricos NADH-diaforase positivos nas regiões mesentérica e antimesentérica do jejuno de ratos. Cinco ratos adultos com 120 dias de idade (± 394,4 g) foram sacrificados através de inalação de éter etílico. Segmentos do jejuno foram submetidos a técnica histoquímica de evidenciação de células nervosas através da atividade da enzima NADH-diaforase (GABELLA, 1969), para verificar a disposição, formato dos gânglios e contagem dos neurônios. Para a quantificação dos neurônios mioentéricos, os preparados de membrana foram divididos em 2 regiões: mesentérica e antimesentérica. Em cada região considerada, contou-se os neurônios presentes em 40 campos (6,64mm2), através de microscópio com objetiva de 40 X. Amostras do jejuno de 5 animais foram fixadas em formol a 10 por cento e submetidas à rotina histológica e corados com hematoxilina-eosina. Os gânglios são, na maioria, paralelos entre si e orientados transversalmente em relação ao maior eixo do intestino em ambas regiões estudadas, porém na região mesentérica os gânglios são mais numerosos. Verificou-se em média 265,8 e 408,8 neurônios/6,64mm2 nas regiões antimesentérica e mesentérica, respectivamente. Constatou-se que a densidade dos neurônios é heterogênea, variando conforme o local da circunferência intestinal considerada, próximo à inserção do mesentério observa-se maior densidade neuronal em relação à região antimesentérica

Localização dos neurônios mientéricos no estômago aglandular e glandular de ratos (rattus norvegicus) / Localization of the myenteric neurons in the aglandular and glandular stomach rats (rattus norvegicus)

O sistema nervoso entérico tem dentre suas funções, o papel de controlar a motricidade intestinal. É formado por gânglios intercalados à uma rede de fibras nervosas dispostas entre os estratos musculares circular e longitudinal do tracto gastrointestinal. Dependendo da espécie animal e da parte do tracto gastrointestinal analisado, a literatura revela diferenças morfológicas em relação à localização do plexo mientérico. O objetivo deste trabalho foi analisar a localização dos neurônios mientéricos nas diferentes regiões do estômago de ratos: estômago aglandular e glandular. Do estômago de 5 ratos (Rattus norvegicus) foram retirados fragmentos e realizados cortes longitudinais de 7 e 10 µm de espessura e corados por Hematoxilina-Eosina, Verhoeff-Van Gieson, Azan, Tricrômico de Picrosírius-Hematoxilina. Os neurônios do plexo mientérico encontram-se geralmente agrupados em gânglios. Os gânglios são envoltos por tecido conjuntivo rico em fibras colágenas e escassas fibras elásticas. Estão contidos na túnica muscular, porém com diferentes localizações. Na região aglandular estão entre os estratos longitudinal e circular da túnica muscular; já, na região glandular são observados também no interior do estrato longitudinal. Verificamos, portanto, que o plexo mientérico não apresenta o mesmo padrão de localização dos seus gânglios quando se analisa as diferentes regiões que formam o estômago do rato.