Evaluating mmp-2 and tgfß-ri expression in circulating tumor cells of pancreatic cancer patients and their correlation with clinical evolution / Avaliação da expressão de mmp-2 e tgfß-ri em células tumorais circulantes de pacientes com câncer de pâncreas e sua correlação com evolução clínica

ABSTRACT Background: Metastasis is common in the diagnosis of pancreatic cancer, and the presence of epithelial-mesenchymal transition markers in circulating tumor cells may suggest worse prognosis. Aim: To correlate the number of circulating tumor cells (CTCs) in the peripheral blood of patients with a locally advanced or metastatic pancreatic tumor and the protein expression involved in epithelial-mesenchymal transition (EMT) in CTCs with clinical characteristics, progression-free survival (PFS) and overall survival (OS). Method: This was a prospective study conducted using peripheral blood samples collected at three different times. CTCs were quantified by the ISET test and analyzed by immunocytochemistry. Proteins involved in EMT (vimentin, TGFß-RI and MMP2) were analyzed in all CTCs. Results: Twenty-one patients were included. Median CTCs detected were 22, 20 and 8 CTCs/8 ml blood at baseline, first and second follow-up, respectively. No statistically significant correlation was found in correlating the number of CTCs and the evaluated clinical characteristics, PFS, or OS. There was no difference in PFS and OS among the EMT markers in the groups with and without markers. Conclusion: CTC analysis was not relevant in this sample for comparing clinical findings, PFS and OS in patients with pancreatic cancer. However, marker analysis in CTCs could be useful for the MMP-2 and/or TGFß-RI expression, as observed by the separate PFS curve.

RESUMO Racional: A metástase é comum no diagnóstico de câncer de pâncreas; presença de marcadores de transição epitélio-mesenquimal nas células tumorais circulantes (CTCs) podem sugerir pior prognóstico. Objetivo: Correlacionar o número de CTCs no sangue periférico de pacientes com tumor de pâncreas localmente avançado ou metastático e expressão de proteínas envolvidas na transição epitélio-mesenquimal (TEM) nas CTCs com características clínicas, sobrevida livre de progressão (SLP) e global (SG). Método: Estudo prospectivo realizado por meio de coletas de sangue periférico em três tempos distintos. As CTCs foram quantificadas pelo sistema ISET e analisadas por imunocitoquímica. Proteínas envolvidas na TEM (vimentina, TGFß-RI e MMP2) foram analisadas em todas as CTCs. Resultados: Foram incluídos 21 pacientes. A mediana de CTCs detectadas foi de 22, 20 e 8 CTCs/8 ml de sangue no baseline, primeiro e segundo seguimentos, respectivamente. Na correlação entre número de CTCs e as características clínicas levantadas, SLP, SG não houve correlação estatisticamente significante. Nos marcadores de TEM não houve diferença de SLP e SG entre os grupos que apresentaram e não apresentaram marcação. Conclusão: As CTCs não se mostraram relevantes na comparação dos achados clínicos, SLP e SG em pacientes com câncer de pâncreas. No entretanto, pode ser que para a análise de marcador seja útil, como observado pelas curvas separadas de expressão de MMP-2 e TGFß-RI nas CTCs.

Pesquisa de células malignas circulantes em pacientes com melanoma maligno de coróide / Detection of circulating malignant cells in patients with uveal melanoma

OBJETIVO: Avaliar a possibilidade de identificação de células malignas circulantes nas amostras de sangue periférico de pacientes brasileiros com melanoma maligno de coróide enviadas para análise no exterior. MÉTODOS: Os marcadores melan-A e tirosinase foram usados para detectar a presença de células malignas circulantes, pela transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase e análise seqüencial de DNA (RT-nested-PCR), em seis pacientes com melanoma maligno de coróide, diagnosticados no Brasil. RESULTADOS: Cinco pacientes deste grupo (83,33 por cento) foram considerados positivos. A reação de RT-nested-PCR foi positiva para melan-A em quatro (66,7 por cento) e positiva para tirosinase em quatro (66,7 por cento) dos seis pacientes testados. Três (50 por cento) pacientes foram positivos para os dois marcadores. Um (16,7 por cento) paciente foi negativo para ambos marcadores. CONCLUSÃO: A pesquisa de células malignas circulantes usando RT-nested-PCR, foi positiva na maioria dos pacientes estudados. A qualidade das amostras de sangue periférico dos pacientes brasileiros foi mantida no material preservado mesmo após ter sido enviado ao exterior.

PURPOSE: The purpose of our study was to detect circulating malignant cells (CMCs) in oversea-shipped blood samples of patients with uveal melanoma diagnosed in Brazil. METHODOS: Melan-A and tyrosinase were the two markers used for the detection of CMCs, using reverse transcriptase nested polymerase chain reaction (RT-nested-PCR) in 6 patients with uveal melanoma. The expression of beta-actin and GAPDH were used to assess the quality of the material. RESULTS: Five patients (83.33 percent) tested positive for the presence of CMCs. The RT-nested-PCR was positive for melan-A in 4 patients (66.7 percent) and positive for tyrosinase in 4 (66.7 percent) of the 6 patients. Three (50 percent) patients were positive for both markers. One (16.7 percent) patient was negative for both markers. All negative controls were negative. CONCLUSION: The quality of the blood samples shipped overseas, from patients with uveal melanoma, was preserved. The detection of CMCs using RT-nested-PCR was positive in the majority of the patients.

Análisis citoquímico de células neoplásicas mediante lectinas conjugadas con peroxidasa de rábano / Cytochemical analysis of neoplastic cells by conjugated lectins with horseradish peroxidase

Se acepta que los receptores de adhesión: MAC, cadherinas, integrinas y selectinas intervendrían en el destino de células inmunes. Además, controlarían la diseminación de tumores sólidos. Mediante técnicas ad hoc es posible aisla células cancerosas y traspasarlas a receptores. Una herramienta impostante en oncología experimental es la identificación de residuos glicosídicos mediante lectinas. En este trabajo estudiamos el pérfil glicosídico de céluas de un tumos ascítico experimental, mediante lectinas conjugadas con peroxidasa de rábano (lectina-HRP). Utilizamos ratones AJ portadores de las líneas tumorales TA3MTXR (resistente a metotrexato) y TA3 de menor malignidad. Las células fueron inoculadas por vía intramuscular, en ratones sanos. Se obtuvieron biopsias de nódulos primarios a los 7 y 21 días y nódulos metastásicos en corazón y pulmón a los 21 días. Los cortes fueron fijados e incubados en Con A, DBA, PNA, WGA y RCA. Como controles utilizamos azúcares inhibitorios específicos. La mayor intensidad correspondió a PNA en tumores primarios y metastásicos. Con A, WGA y DBA reaccionaron con intensidad menor. Se registraron diferencias entre metástasis cardíacas y pulmonares, en relación a Con A. No hubo reacción frente a RCA. Estos resultados muestran algunas diferencias entre residuos glicosídicos presentes a metastásis cardíacas y pulmonares, específicamente con respecto a manosa y glucosa. Aparentemente, no existirían mayores diferencias entre tumores primarios y metastásicos, con respecto a galactosa, N-acetil glucosamina y ácido siálico