Gene sequence analysis and prokaryotic expression of sigmaB protein of Muscovy duck reovirus YB strain / 病毒学报

Muscovy ducks reovirus (DRV) is an important pathogen with a high mortality rate in Muscovy ducks, the researches in the test and the immunity were useful for the prevention and control of DRV infection. In this study, the S3 genes of the three Fujian DRVs were cloned by RT-PCR and sequencing technology. It was found that DRV-YH and YJL were close to avian reovirus (ARV) in the genetic distance, with high identities ranged from 94. 6% to 98. 9%, however, the identities of DRV-YB strain and reference ARV strains in the S3 gene were only 60.6% - 61.7%. The expression vector pET-30a-S3 harboring DRV YB strain S3 gene was constructed and transformed into E. coli BL21, and then the fusion sigmaB protein expression was induced with IPTG. The SDS-PAGE of the expressed products indicated that the fusion protein of approximately 42ku in molecular weight was expressed highly in inclusion body, and made up 67. 7% of the total proteins. The most efficient concentration of IPTG and inducing time were 0. 1 mM and 5h respectively, while the best temperature for expression was 37 degrees C. After purification with the Ni2+ affinity chromatography, the fusion sigmaB protein was 93% of the total proteins, and the purified protein amounted to 0. 86g/L. The Western blot analysis showed that the fusion aB protein was recognized specifically by the antiserum against DRV, confirming that the recombinant fusion protein had good immunoreactivity.

The occurrence of orthoreovirus, rotavirus and chicken anemia virus in chickens of the poultry industry in Minas Gerais, Brazil / Ocorrência de orthoreovirus, rotavirus e vírus da anemia das galinhas em frangos de corte da indústria avícola de Minas Gerais

Fifty-four fecal samples taken from broiler chickens from 1 to 45 days of age, and of pullets from 10 to 13 weeks of age, original from eight different poultry regions in the state of Minas Gerais, Brazil, were collected from March 2008 to January 2010 for avian Orthoreovirus (ARV) and avian Rotavirus (AvRV) analyses. For the assay of ARV, RNA was immediately extracted (Trizolâ) and transcribed into cDNA for assaying in a nested-PCR with ARV-specific primers. For AvRV, polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) was performed with RNA extracts obtained by phenol-chloroform extraction. CAV was additionally investigated through a nested-PCR of thymus and spleen. Results found 5.55% positive for ARV and 9.25% for AvRV. Also, CAV and ARV genomes were detected in co-infection, in a highly prostrated and claudicating chicken flock. No ARV or AvRV infections were detected in pullets. Material of a clinically affected flock was inoculated into SPF embryos, resulting in embryonic hemorrhage, whitish foci in the chorio-allantoic membrane and death. Sequencing of ARV amplicons and isolate cDNA grouped local strains with the ARV S1133 strain, historically used in live vaccines, suggesting the continued circulation of this vaccine virus strain in intensive poultry regions. Detection rates for ARV and AvRV, as well as the presence of CAV, were additionally indicative of failing biosecurity strategies for the intensive poultry regions examined.

Avaliou-se a ocorrência de Orthoreovirus (ARV) e Rotavirus (AvRV) aviários na avicultura industrial de Minas Gerais. Foram colhidas cinquenta e quatro amostras de fezes de frangos de corte entre um e 45 dias e de frangas de postura de 10 a 13 semanas de idade. Para análise de ARV, o RNA foi imediatamente extraído (Trizol), transcrito em cDNA e avaliado em uma PCR com oligonucleotídeos iniciadores específicos para ARV. Para a investigação de AvRV, os extratos de RNA foram obtidos por fenol-clorofórmio e submetidos à eletroforese em gel de poliacrilamida. Todas as amostras foram também avaliadas para o DNA do vírus da anemia das galinhas (CAV) em uma nested-PCR específica. Em frangos de corte, a positividade encontrada para ARV foi de 5,55% e para AvRV de 9,25%. CAV foi detectado em coinfecção em um plantel com refugagem, claudicação e prostração. Nenhuma amostra de poedeiras foi positiva para ARV ou AvRV. Material de plantel com sinais clínicos foi purificado e inoculado em ovos SPF embrionados, sendo obtidas lesões hemorrágicas e focos brancos na membrana cório-alantóide. O sequenciamento dos produtos de PCR e de embrião agrupou os isolados de ARV com a estirpe S1133, historicamente usada como vacina viva. Os resultados sugerem a continuada circulação da infecção por estirpes assemelhadas a ARV S1133 nas regiões de avicultura industrial. Os índices de detecção de ARV, AvRV e CAV indicam que a intensificação nas regiões produtoras tem resultado em falhas de biosseguridade.

The isolation and identification of novel duck reovirus / 病毒学报

The virus strains were isolated from the liver and spleen of the dead young ducks characterized with symptoms of hemorrhagic-necrotic hepatitis. These isolates could cause the death of muscovy duck-embryo and chick-embryo. 1-day-old birds infected with these isolates had the same character with clinically dead birds and the virus could be isolated from artificially infected birds. These isolates could proliferate in MDEF and result in CPE. The virus could proliferate in the cytoplasm in order of crystals and arranged in the latlic-like. The viron was shown spherical, icosahedron, cubic symmetry, no-envelope, with double-layered capsid, about 70 nm in diameter by electron microscopy. The genome segments of the virus were consisted of L1-3, M1-3 and S1-4, which were similar to that of avian reovirus (ARV). Compared to 68.2%, 69.3% - 70.1%, respectively. The system evolution analysis showed that S3 gene coding sigmaB protein was placed in different branch of MDRV and ARV, indicating that S3 gene of the virus was different from ARV and MDRV. The main clinical symptoms and lesions of ducklings caused by the virus were different from the diseases caused by MDRV and ARV. It was concluded that the virus was a Novel duck reovirus belonging to Orthoreovirus genus of the Reoviridae family.

Expression and identification of sigmaC gene of avian reovirus by baculovirus expression system / 病毒学报

Recombinant baculovirus containing sigmaC gene of Avian reovirus was constructed using Bac-To-Bac Baculovirus expression system, and recombinant sigmaC protein was expressed by infecting the sf9 cell with recombinant baculovirus. Firstly, sigmaC gene of Avian reovirus was cloned and inserted into donor plasmid pFastBacHTA to obtain recombinant donor plasmid pFsigmaC. Plasmid pFsigmaC was transformed into E. coli DH10Bac for integration into bacmid vector and the recombinant bacmid plasmid BacmidsigmaC was obtained. Recombinant baculovirus rBacsigmaC was obtained by transfection of the sf9 cells with BacmidsigmaC. Western blot and indirect immunofluorescence assay (IFA) were carried and the results showed that the recombinant sigmaC protein with 37 kDa molecular weight was expressed successfully.

Anticorpos contra vírus em galinhas de terreiro do Estado do Rio Grande do Sul, Brasil / Antibodies against avian viruses in backyard poultry from the Rio Grande do Sul State, Brazil

No Brasil, a população de aves conhecida como galinhas de terreiro encontra-se fora do sistema de biosseguridade aplicada às criações comerciais. Para investigar a presença de anticorpos contra alguns vírus específicos nesta população, foram coletadas amostras de sangue de 867 aves não-vacinadas em 60 propriedades de 22 municípios do Estado do Rio Grande do Sul, Brasil. O soro foi testado para a presença de anticorpos contra o vírus da bronquite infecciosa das galinhas (IBV), reovírus aviário (ARV) e o vírus da doença infecciosa da bolsa (IBDV) pela técnica de soroneutralização. Anticorpos contra IBV foram detectados em 65 por cento (564/867) das amostras, contra ARV em 21,6 por cento (187/867) e contra IBDV em 80,2 por cento (695/867) das aves. Todas as propriedades avaliadas apresentavam uma ave positiva para anticorpos contra IBV e IBDV e 88,3 por cento delas eram positivas para ARV. Os resultados demonstram que esses vírus estão presentes em galinhas de terreiro nas criações avícolas não-industriais da região central do Estado. Os resultados indicam a necessidade de um programa de vigilância permanente nessa população e ainda indicam a necessidade de avaliar o impacto destas infecções nos próprios plantéis e o risco associado à transmissão destas às criações comerciais.

The backyard poultry are not included in the biosecurity system applied in commercial flocks in Brazil. To investigate the presence of antibodies to specific viral pathogens in this population, blood samples were collected from 867 non-vaccinated birds, from 60 flocks in 22 counties of the Rio Grande do Sul State, Brazil. The samples were tested to detect antibodies against infectious bronchitis virus (IBV), avian reovirus (ARV) and infectious bursal disease virus (IBDV), through the virus neutralization test. Antibodies to IBV were detected in 65 percent (564/867), against ARV in 21.6 percent (187/867), and against IBDV in 80.2 percent (695/867) of the samples. All the flocks had chickens positive to IBV and IBDV antibodies, and 88.3 percent of them harbored antibodies to ARV. The results show the presence of these viruses in backyard poultry from the central region of the State. It also indicates the need for additional studies aimed to evaluate the real importance of these infections for this type of flocks.

Segmented double-stranded genomic RNA viruses in fecal samples from broiler chicken

A técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida foi utilizada com o objetivo de identificar vírus com genoma contituído por RNA de fita dupla (dsRNA) segmentado, em material fecal de frangos de corte. Foram analisadas 378 amostras de fezes de aves, com idade entre a primeira e sétima semanas de vida, provenientes de granjas avícolas localizadas no Estado do Paraná, Brasil. dsRNA com perfil de migracão característico de rotavírus (AvRV), reovírus (ARV) ou picobirnavírus (PBV), foi identificado em 32 (8,5 per center), 7 (1,8 per center) e 13 (3,4 per center) amostras, respectivamente. AvRV e ARV ocorreram com maior freqüência em aves com até um mês de idade e estiveram diretamente relacionados a fezes diarréicas e pastosas, provenientes de aves com sinais clínicos de enterite. Considerando-se apenas as amostras de fezes colhidas em aves com diarréia, o AvRV foi detectado em 37,8 per center (14/37) e o ARV em 13,5 per center (5/37) da amostragem analisada. Em fezes com aspectos normais (controle) obtidas de aves clinicamente sadias, o AvRV foi identificado em apenas 1,5 per center (4/274) e o ARV não foi detectado. O ácido nucléico do PBV foi detectado com maior freqüência em fezes pastosas colhidas de aves com duas a sete semanas de vida. O AvRV apresentou grande variabilidade eletroforética dos segmentos de dsRNA, tendo sido identificados nove eletroferotipos distintos. Não foram observadas variacões no perfil genômico nas amostras de ARV e também de PBV.

Lesöes articulares em frangos de corte (Gallus gallus) na infecçäo experimental pelo reovírus aviário / Articular lesion in experimental infeccion with avian reovirus in broiler (Gallus gallus)

Este trabalho descreve as lesöes articulares induzidas pela inoculaçäo oral e podal de uma amostra de reovírus aviário (S-1133) em pintos de corte de um dia de idade. Realizou-se o exame histopatológico de fragmentos da articulaçäo tibiotársica utilizando-se cinco aves dos grupos inoculados e grupo controle nos períodos de 24, 48, 72 horas e semanalmente até a oitava semana após a inoculaçäo. A primeira alteraçäo observada foi um infiltrado inflamatório misto nas bainhas tendinosas uma semana após a inoculaçäo. Na segunda semana após a inoculaçäo, houve fibroplasia, formaçäo de folículos linfóides e hiperplasia das células da membrana sinovial, alteraçöes progressivas observadas até o final do período experimental. As lesöes articulares foram similares, ocorrendo simultaneamente nos dois grupos inoculados, contudo as alteraçöes foram mais severas no grupo inoculado no coxim plantar

Lesöes viscerais induzidas experimentalmente pela inoculaçäo de uma amostra artrotrópica de reovírus em frangos de corte (Gallus gallus) / Visceral lesion induced experimentally by an artrotropic strain of reovirus in broiler (Gallus gallus)

Este trabalho descreve as lesöes viscerais induzidas pela inoculaçäo oral e podal de uma amostra artrotrópica de reovírus aviário (S-1133) em pintos de corte de um dia de idade. Realizou-se o exame histopatológico de fragmentos da Bursa de Fabricius, intestinos, fígado, baço e miocárdio utilizando-se cinco aves dos grupos inoculados e do grupo controle, nos períodos de 24, 48, 72 horas e semanalmente até a oitava semana após a inoculaçäo. No miocárdio, observou-se miocardite intersticial 48 horas pós-inoculaçäo, miocardite necrótica e pericardite na primeira semana após a inoculaçäo. Houve no pericárdio, na segunda semana após a inoculaçäo, a formaçäo de folículos linfóides e seu espessamento fibroso em períodos subseqüentes até a oitava semana. No fígado, foi observado um infiltrado inflamatório misto 72 horas após a inoculaçäo e degeneraçäo vacuolar e necrose dos hepatócitos na primeira semana pós-inoculaçäo. Observou-se, ainda, a presença de tecido linfóide ativo e de infiltrado heterofílico na segunda semana após a inoculaçäo, persistindo até o final do experimento. Verificou-se necrose progressiva do tecido esplênico de 48 horas até a primeira semana após a inoculaçäo e a partir da segunda semana observou-se hiperplasia dos folículos linfóides esplênicos. Os demais órgäos examinados näo apresentaram alteraçöes. As lesöes viscerais foram similares ocorrendo simultaneamente nos dois grupos inoculados, contudo as alteraçöes foram mais severas no grupo inoculado no coxim plantar