ABSTRACT
We have developed a system with two epi-illumination sources, a DC-regulated lamp for transillumination and mechanical switches for rapid shift of illumination and detection of defined areas (250-750 æm²) by fluorescence and phosphorescence videomicroscopy. The system permits investigation of standard microvascular parameters, vascular permeability as well as intra- and extravascular PO2 by phosphorescence quenching of Pd-meso-tetra (4-carboxyphenyl) porphine (PORPH). A Pechan prism was used to position a defined region over the photomultiplier and TV camera. In order to validate the system for in vivo use, in vitro tests were performed with probes at concentrations that can be found in microvascular studies. Extensive in vitro evaluations were performed by filling glass capillaries with solutions of various concentrations of FITC-dextran (diluted in blood and in saline) mixed with different amounts of PORPH. Fluorescence intensity and phosphorescence decay were determined for each mixture. FITC-dextran solutions without PORPH and PORPH solutions without FITC-dextran were used as references. Phosphorescence decay curves were relatively unaffected by the presence of FITC-dextran at all concentrations tested (0.1 æg/ml to 5 mg/ml). Likewise, fluorescence determinations were performed in the presence of PORPH (0.05 to 0.5 mg/ml). The system was successfully used to study macromolecular extravasation and PO2 in the rat mesentery circulation under controlled conditions and during ischemia-reperfusion
Subject(s)
Animals , Male , Rats , Capillary Permeability , Image Processing, Computer-Assisted/methods , Mesenteric Arteries/metabolism , Mesentery/blood supply , Oxygen/pharmacokinetics , Anticoagulants/pharmacology , Dextrans/pharmacology , Fluorescein-5-isothiocyanate/pharmacology , Fluorescent Dyes/pharmacology , Luminescence , Microcirculation/metabolism , Microscopy, Fluorescence/methods , Microscopy, Video/methods , Porphyrins/pharmacology , Rats, WistarABSTRACT
La Oxigenación Hiperbárica (OHB) es definida como la terapia en que se respira oxigeno al 100 por ciento en un ambiente presurizado a por lo menos 1.4 atmósferas absolutas. Sus inicios se remontan al S.XV cuando se utilizó para tratar enfermedades respiratorias. Durante algún tiempo sus aplicaciones carecieron de bases científicas hasta mediados de este siglo en que se realizan trabajos apegados a la metodología actual demostrando su aplicación en patologías que tienen de base tienen hipoxia/isquemia.Esta modalidad de tratamiento se fundamenta principalmente en tres leyes de los gases: Ley de Henry, Ley de Dalton y Ley de Boyle. Los beneficios en el organismo, como promoción del proceso de cicatrización, aumento de la capacidad bactericida del neutrófilo, efecto tóxico directo sobre algunos microorganismos, vasoconstricción arteriolar con la consecuente reducción del edema y disminución de la lesión por isquemia reperfusión, entre otros, son como resultado de la presión ambiental aumentada y la hiperoxigenación de los tejidos en el organismo. Actualmente existen 13 condiciones aceptadas por la UHMS para ser tratadas con OHB y varias mas se encuentran en investigación. Siguiendo los protocolos de tratamiento indicados por la UHMS, las complicaciones y/o efectos adversos son escasos.