Acción virucida directa sobre el virus influenza de un extracto de Punica granatum L (granada) / Direct virucidal action against influenza virus of an extract of Punica granatum L (granada)

INTRODUCCIÓN: la especie vegetal Punica granatum L. se conoce en Cuba como granada. A esta planta se le atribuye acción anticatarral en la medicina tradicional, entre otras propiedades. En estudios previos realizados al extracto hidroalcohólico liofilizado preparado con el fruto de esta planta, se informaron la presencia de numerosos componentes químicos, la mayoría flavonoides. Estos compuestos, unidos a la variedad de metabolitos secundarios detectados, le confieren a este liofilizado la posibilidad de poseer acción antiinfluenza, tal como ha sido demostrado en estudios previos del mismo. OBJETIVO: evaluar la acción virucida directa del extracto hidroalcohólico liofilizado de P. granatum frente a la cepa Influenza A/Mississippi/1/85 (H3N2), con diferentes variantes de tratamiento. MÉTODOS: las variantes de tratamiento directo se realizaron en 27 combinaciones de las variables; tiempo de contacto de: 60, 30 y 15 minutos; concentración del extracto de: 1000, 200 y 125 µg/mL y temperatura de incubación de la mezcla extracto-virus: 4, 25 y 37 0C. La presencia o no de la hemaglutinina del virus influenza en cada una de las muestras tratadas, se midió por la titulación de la Inhibición de la Hemaglutinación (IHA) y el título infectivo viral (DIE50). RESULTADOS: la concentración mínima efectiva para ejercer el extracto liofilizado, la acción virucida directa, in vitro, fue 125 µg/mL, a los 15 minutos. La acción virucida directa de éste extracto estuvo siempre presente en las diferentes temperaturas y tiempos de exposición ensayados. CONCLUSIONES: la variante de ensayo que utilizó 125 µg/mL, con independencia del tiempo y la temperatura de tratamiento, resultó suficiente efectiva para reducir la presencia de hemaglutinina del virus influenza.

INTRODUCTION: Punica granatum L. is known in Cuba as grenade. In traditional medicine, among other properties, antiflu action is attributed to this plant. In previous studies with the hydroalcoholic lyophilized extract, prepared with the fruit of this specie, several chemical compounds were reported, specially the presence of flavonoids. The variety of secondary metabolites detected for this lyophilized extract, added to a flavonoid fraction confers a high possibility of anti-influenza activity, as has been demonstrated in previous studies. OBJECTIVE: to evaluate the virucidal activity of the hydroalcoholic lyophilized extract of P. granatum against Influenza A/Mississippi/1/85 (H3N2), with different schemes of treatments. METHODS: the different schemes of treatments included 27 variants of the variables such as contact time of 60, 30 and 15 minutes; extract concentration of 1000, 200 and 125 µg/mL; an incubation temperature of the mix extract-virus of 4, 25 and 37 0C; and the corresponding replicas. The presence or not of hemaglutinin of influenza virus in each one of the treated samples, was measured by titration of Hemaglutination Inhibition (HAI) and the Embryo Infection Doses (EID50). RESULTS: the minimal effective concentration to show in the hydroalcoholic lyophilized extract the direct virucidal action in vitro was 125 µg/mL, in 15 minutes of contact. This virucidal action was always present in the different assessed temperature and time exposures. CONCLUSIONS: the treatment of 125 µg/mL, regardless of time and temperature of treatment, was effective enough to reduce the presence of hemaglutinin of the influenza virus.

Atividade antibacteriana do extrato hidroalcoólico de Punica granatum Linn. sobre Staphylococcus spp. isolados de leite bovino / Antibacterial activity of the hydroalcoholic extract of Punica granatum Linn. on Staphylococcus spp. isolated from bovine milk

Mastite bovina é caraterizada por inflamação da glândula mamária, geralmente em resposta à infecção bacteriana, compromete quali-quantitativamente a produção leiteira. Este estudo objetivou verificar a atividade antibacteriana in vitro do extrato hidroalcoólico da casca da romã sobre bactérias isoladas de leite bovino. As colônias de Staphylococcus spp. foram ressuspendidas a escala 6 de MacFarland e ajustada a sua concentração por espectrofotometria UV visível na concentração de 10 mL-1. Os extratos foram avaliados em quintuplicata, em sete concentrações: de 4mg mL-1 até 0,0625 mg.mL-1. A sensibilidade dos isolados microbianos foi determinada utilizando o teste de difusão em disco e os resultados que apresentaram zonas de inibição correspondentes a valores a partir de 15 mm, foram considerados sensíveis. Os resultados foram avaliados pelo método ANOVA, teste de Tukey 5 por cento, utilizando o SISVAR 5.3 -DEX/UFLA. Adicionalmente o extrato foi avaliado quanto à atividade antioxidante, teores de fenóis e flavonoides totais. Para tanto o extrato foi diluído em sete concentrações: de 25 a 1000µg.mL-1, e avaliado em triplicata. O crescimento bacteriano foi inibido a partir da concentração de 4mg.mL-1 e a ação antioxidante foi verificada a partir de 50µg.mL-1, com valores correspondentes a 4.62 por cento, atingindo platô de 64,90 por cento na concentração de 500µg.mL-1. Na avaliação da atividade captadora de radicais, empregando o radical livre DPPH, o extrato demonstrou atividade antioxidante (IC50 por cento= 378,80µg/mL). Porém, não foi possível correlacionar a atividade antioxidante aos teores de fenóis e flavonoides. Talvez a presença de outras substâncias alcaloides e taninos presentes no extrato, possam ter sido as responsáveis pela atividade antioxidante encontrada. Conclui-se que o extrato hidroalcoólico de Punica granatum Linn. apresenta atividade antimicrobiana contra Staphylococcus spp., demonstrando potencial benefício para o controle da mastite bovina.

Bovine mastitis is characterized by inflammation of the mammary gland, usually in response to bacterial infection, affecting qualitatively and quantitatively milk production. This study aimed to determine the antibacterial activity in vitro of the hydroalcoholic extract of the bark of the pomegranate on bacteria isolated from bovine milk. The colonies of Staphylococcus spp. were resuspended in 6 MacFarland scale and adjusted its concentration by UV visible spectrophotometry at a concentration of 10(6)ml-1. The extracts were evaluated in quintuplicate in seven concentrations: from 4 up to 0.0625mg.mL-1. The sensitivity of microbial isolates was determined using the disk diffusion and the results that showed inhibition halos corresponding to values from 15mm were considered susceptible. The results were evaluated by ANOVA, Tukey test 5 percent using the SISVAR 5.3-DEX/UFLA. Additionally the extract was assessed as for the antioxidant activity, content of phenols and total flavonoids. The extract was diluted into seven concentrations: 25-1.000µg.mL-1, and evaluated in triplicate. The bacterial growth was inhibited starting from the concentration of 4 mg.mL-1 and antioxidant activity was observed from 50µg.mL-1, with values corresponding to 4.62 percent reaching the plateau of 64.90 percent at a concentration of 500µg.mL-1. In evaluating the radical scavenging activity, using the free radical DPPH, the extract demonstrated antioxidant activity (IC50 percent= 378.80µg/mL). However it has not been possible to correlate the antioxidant activity with the levels of phenols and flavonoids. Perhaps the presence of other substances alkaloids and tannins present in the extracts may have been responsible for the antioxidant activity found. It was concluded that the hydroalcoholic extract of Punica granatum Linn. has antimicrobial activity against Staphylococcus spp., demonstrating potential benefit for the control of bovine mastitis.

Efeito do extrato do romã (Punica granatum) sobre bactérias cariogênicas: estudo in vitro e in vivo / Effect of pomegranate extract (Punica granatum) on cariogenic bacteria: in vitro and in vivo study

Objetivo: O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito inibitório de extratos de plantas sobre cepas de Streptococcus mutans in vitro e avaliar in vivo o potencial inibitório de dentifrício incorporado com o extrato de maior potencial sobre estreptococos do grupo mutans e sobre o índice de biofilme. Materiais e Métodos: Em meio de cultura inoculado com S. mutans (ATCC25175), depositaram-se extratos etanólicosde 32 plantas. Posteriormente, avaliaram-se os halos de inibição. As capacidades inibitórias foram: Ocimumgratissimum (flor) com 08 mm; Moringa oleífera (folha) 10 mm; Copaífera langsdorffi (folha) 16 mm e Punicagranatum (pericarpo desidratado) com 18 mm. Uma vez que este último extrato apresentou o maior halo de inibição, foi utilizado na fase seguinte. O extrato de romã (Punica granatum) foi incorporado em dentifrício, nas concentrações de 1% e 3% após determinação da concentração inibitória mínima. Estes foram testados em 30 voluntários divididos em 3 grupos (um para cada extrato e um grupo controle). Os voluntários fizeram uso dos dentifrícios durante 08 dias. A atividade antimicrobiana foi avaliada através da determinação do índice de biofilme e contagem de estreptococos do grupo mutans (UFC/ml). Resultados: Houve redução (p < 0,05) no índice de biofilme para o extrato a 3%, porém não houve diferença na contagem de microrganismos (p > 0,05). Conclusão: Conclui-se que a Punica granatum L. foi o extrato que apresentou maior atividade inibitória in vitro contra S. mutans. A formulação do dentifrício mostrou eficiência após oito dias de uso diminuindo significativamente o índice de biofilme, porém, não apresentou redução do número de estreptococos do grupo mutans.

Effects of Punica granatum on milk-induced leucocytosis and eosinophilia in mice / Efecto de Punica granatum en ratas con leucocitosis y eosinofilia inducida por leche

Punica granatum Linn. (Punicaceae) commonly known as Pomegranate is a dark greenish large deciduous shrub or small tree, about 5-10 m height. Flower buds are traditionally used in the treatment of asthma and allergy. The aim of this study was to validate the traditional antiallergic property using milk-induced leucocytosis and milk-induced eosinophilia in rats. Flower buds of the plant were extracted successively using various solvents to obtain the respective extracts. These extracts were administered to mice at the dose of 50 and 100 mg/kg, orally. Only the ethanol extract showed significant reduction in leukocyte and eosinophil count, these results are a validation of the use of the extract of polar compounds of P. granatum flower buds as an antiallergic agent.

Punica granatum Linn. (Punicaceae) comúnmente conocida como granada es un pequeño árbol o arbusto grande de hoja caduca, de unos 50-10 m de altura y de color verde oscuro. Los botones florales se utilizan tradicionalmente en el tratamiento del asma y la alergia. El objetivo de este estudio fue validar la propiedad tradicional antialérgica utilizando ratas con leucocitosis y eosinofilia inducida por leche. Los botones florales de la planta se extrajeron sucesivamente con varios solventes para obtener los extractos respectivos. Estos extractos se administraron a los ratones a dosis de 50 y 100 mg / kg, por vía oral. Sólo el extracto obtenido con etanol mostró una reducción significativa en el recuento de leucocitos y eosinófilos, estos resultados son una validación del uso del extracto de compuestos polares de los botones florales de P. granatum como un agente antialérgico.

Atividade antimicrobiana "in vitro" do extrato etanólico de Punica granatum linn (romã) sobre isolados ambulatoriais de Staphylococcus aureus / Antimicrobial activity in vitro of the ethanol extract Punica granatum against of Staphylococcus aurus strains

A utilização de plantas medicinais com indicação para processos infecciosos, respaldada por pesquisas etnofarmacobotânicas, impulsionam vários estudos farmacológicos. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana “in vitro” do extato etanólico de Punica granatum (romã) e determinar sua concentração inibitória mínima (CIM) sobre amostras de Staphylococcus aureus de origem humana ambulatorial, avaliando-se o perfil de sensibilidade dessas cepas, frente aos antimicrobianos usados rotineiramente na clínica médica, como também, a detecção da produção de alguns fatores de virulência (coagulase, hemolisina e lípase). Determinou-se a CIM pelo método da diluição em placas e o antibiograma por disco-difusão, seguindo-se as recomendações do NCCLS (2002). Todas as cepas de S.aureus eram fermentadoras do manitol e hemolíticas, sendo que 10 (58,8%) apresentaram atividade lipolítica no Agar tween-cálcio. Todas as cepas mostraram-se sensíveis à vancomicina, tetraciclina e oxacilina. Enquanto que 11 (64,7%) apresentaram resistência à penicilina e à ampicilina. Observou-se também sensibilidade diminuída à clindamicina e à eritromicina em 10 (58,8%) das cepas. Concluiu-se que a CIM do extrato etanólico de P.granatum foi obtida na concentração de 10%, a qual, foi capaz de inibir 100% das cepas analisadas.

The use of medical plants with the indication to the infectious process, supported by etnopharmacobotanic researches, impel various pharmacological studies. The purpose of this study was to evaluate the antibacterial ‘in vitro’ of the ethanol extract of Punica granatum (pomegranate) and to determine its minimum inhibit concentration (MIC) on strains of Staphylococcus aureus of human origin ambulatory evaluating also the sensibility profile of these strains, against the antimicrobial substance usually used in medicine after the verification of some virulence factor such as (coagulation, hemolysis e lipase). It was determined that a MIC by the method of dilution in plates and the antibiogram by disc diffusion, following the NCCLS (2002) recommendation. All the Staphylococcus aureus were mannitol and haemolytic producers, 10 (58,8%) presented lipolitic activity in the calcium Tween agar. All of the stains has shown to be sensitive to vancomicin, tetracycline and oxacillin. While 11 (64,7%) has presented resistance to penicillin and ampicillin . It has also been observed that diminished sensibility to clindamicin and to eritromicin in 10 (58,8%) of the samples. Concluding therefore, that a MIC of the ethanol extract of Punica granatum was taken in 10% concentration, which was able to inhibit in 100% of the strains analysed.