Avaliação da participação de prion celular em fenômenos associados a tumorigênese e metástase experimentais / Evaluation of prion protein participation in experimental tumorigenesis and metastasis related processes

O prion celular (PrPc) exerce papel fundamental nas encefalopatias espongiformes. No entanto, suas funções fisiológicas ainda não foram totalmente compreendidas. Nosso grupo mostrou, previamente, que PrPc se liga a laminina (LN}, uma proteína da matriz extracelular, e que esta interação medeia adesão neuronal, formação e manutenção de neuritos (GRANER et ai. 2000a). Sabendo-se que a matriz extracelular e em particular, LN, pode influenciar os processos tumorais e metastáticos, decidimos investigar a possível participação de PrPc nestes eventos. Para tanto, células embrionárias mesenquimais (CEM) de camundongos tipo selvagem (Prnp+1 +) ou deficientes do gene de PrPc (Prnp010) foram transfectadas com um vetor que codifica a expressão dos oncogenes rase myc. Foram selecionados três clones transformados a partir de cada grupo de células: CEM Prnp+J+ raslmyc e Prnp010 ras/myc, que possuíam expressão similar de ambas as oncoproteínas. Os clones Prnp+l+ ras/myc e Prnp010 ras/myc apresentaram tempos de duplicação semelhantes in vitro, assim como exibiram doses tumorais mínimas semelhantes quando injetados por via subcutânea no dorso de camundongos tipo selvagem. Os clones Prnp+l+ ras/myc e Prnp010 ras/myc foram testados em modelo de metástase experimental (colonização pulmonar), injetando-se células na veia lateral da cauda de camundongos tipo selvagem. Após 21 dias, o número de colônias pulmonares presentes na superfície pleural foram quantificados. Os clones Prnp010 raslmyc produziram um número de colônias pulmonares estatisticamente superior ao dos clones Prnp +I+ raslmyc. Ensaios de esteróides multicelulares mostraram que os clones Prnp010 ras/myc apresentam uma maior adesão célula-célula do que aqueles Prnp+l+ raslmyc. Entretanto, nenhuma alteração na expressão de ICAM-1 (CD54) ou caderinas foi encontrada entre eles. Por outro lado, experimentos de imunofluorescência, mostraram que células dos clones Prnp010 raslmyc assim como sua parenta! CEM Prnp010 apresentam a integrina avf33 funcionalmente mais ativada do que seus equivalentes Prnp+1 +. Estes dados sugerem que a ausência de PrPc leva a uma regulação positiva na atividade de avf33 integrina. Por sua vez, sabe-se que o aumento da atividade desta integrina pode ser responsável pela maior adesão das células tumorais a vitronectina e componentes sanguíneos como as plaquetas, com conseqüente aumento na formação de êmbolos. Desta forma, variações na expressão de PrPc podem contribuir na sinalização celular, em particular naquela envolvida com a ativação da integrina avf33, que por sua vez participa na formação de êmbolos e conseqüente aumento na colonização de células tumorais (AU)

The cellular prion (PrPc) has a criticai role in spongiform encephalopathies. However, its physiological functions are not completely understood. We have reviously shown that PrPc binds the extracellular matrix protein, laminin (LN), and this interaction affects neuronal cell adhesion, neurite formation and maintenance (GRANER et ai. 2000a). The extracellular matrix and in particular, LN, can affect the tumoral and metastatic processes, therefore we decided to investigate a possible participation of PrPc in such processes. Thus, mesenchimal embryonic cells from wild-type (Prnp+1 +) or PrPc gene ablated mice (Prnp010) were transfected with a vector containing the expression sequences of ras and myc oncogenes. We isolated three transformed clones from each genotype (Prnp+l+ and Prnp010) with similar expression of both oncoproteins. Prnp+r+raslmyc or Prnp010ras/myc clones presented the same doubling time in vitro as well as similar minimum tumoral doses when injected subcutaneously in the dorsal region of wild type mice. In lung colonization assays, an experimental model of metastasis, Prnp+1 +ras/myc or Prnp010raslmyc clones were injected in the lateral tail vein of wild-type mice and the number of pulmonary colonies were counted after 21 days. Prnp010ras/myc clones exhibited a significant higher number of lung colonies than those presented by Prnp+1 +raslmyc ones. Multicellular spheroids from Prnp010ras/myc clones showed a higher cell-cell interaction and a lower cellular scattering when compared with the Prnp +I+ raslmyc ones.However, alterations in the expression of ICAM-1 (CD54) and cadherins were not found between the Prnp010ras/myc and Prnp+1 +raslmyc clones. On the other hand, immunofluoresce assays revealed that Prnp010 ras/myc clones and the mesenchimal embryonic Prnp010 parenta! cells presented a higher avf33 activity when compared to the Prnp +I+ ones. These data suggest that the PrPc depletion leads to a positive regulation of avJ33 integrin activity. lt is well known that tumoral cell adhesion mediated by avJ33, can mediate tumoral cell adhesion to vitronectin and other blood components, such platelets, increasing embolization capacity. Thus, alterations on PrPc expression can regulate cellular signaling, particularly, that involved in av~3 integrin activation which participates on cellular embolization and consequently elevation on pulmonar colonization (AU)

Priones: agentes patógenos novedosos / Prions: new pathogenic agents

Hace dos décadas Stanley Prusiner un neurólogo norteaméricano propuso un nuevo tipo de agentes infecciosos que denominó Priones. Estos nuevos patógenos consiten principalmente en proteína y carecen de ácido nucleico. Muchas enfermedades neurodegenerativas conocidas como encefalopatías espóngiformes tales como la enfermedad de Creutzfeld-Jakob, pueden ser explicadas a través de estas novedosas partículas. En esta revisión se explican algunos aspectos históricos, biológicos y clínicos de los priones