Avaliação do papel de HSPB1 na modulação da autofagia induzida por PRL em células-beta / Unveiling the role of HSPB1 in PRL-induced autophagy modulation in beta-cells

O diabetes mellitus tipo 1 é uma doença metabólica, caracterizada pela desregulação glicêmica, que ocorre devido a um ataque autoimune. A insulinoterapia é o tratamento clássico para o DM1. Contudo, alguns pacientes que apresentam essa doença não respondem de forma eficiente a este tratamento e apresentam episódios frequentes de hipoglicemia severa e despercebida (pacientes hiperlábeis). Essas complicações comprometem de forma significativa a qualidade de vida dessas pessoas. O transplante de ilhotas é uma importante alternativa para o tratamento de pacientes hiperlábeis com DM1. No entanto, essa terapia apresenta restrições como a necessidade de mais de um doador por transplante e significativa morte das ilhotas devido ao estresse provocado pelo procedimento de isolamento, além da morte promovida pelo sistema imune do paciente nos primeiros momentos pós-transplante. A autofagia é um mecanismo de reciclagem de componentes citoplasmáticos que é fundamental para a homeostase celular. Em condições de estresse, este mecanismo é ativado acima do seu nível basal, promovendo a degradação de agregados proteicos e organelas defeituosas, evitando assim, danos celulares que comprometam a viabilidade da célula. Trabalhos realizados por nosso grupo têm mostrado a citoproteção que PRL promove em células-beta, reduzindo a apoptose induzida por citocinas pró-inflamatórias. Também demonstramos o papel essencial de HSPB1 na inibição de apoptose induzida por PRL após o tratamento com citocinas. Além disso, resultados recentes de nosso laboratório mostraram um aumento nos níveis de autofagia em células-beta após sua exposição a citocinas, bem como uma restauração a níveis normais na presença de PRL. Visando um melhor entendimento do papel da PRL na modulação da autofagia em células-beta, o objetivo desse projeto foi estudar se HSPB1 também é essencial no mecanismo de regulação da autofagia induzido por PRL.Para tal, fizemos experimentos em modelos de células-beta MIN6, MIN6 silenciadas para HSPB1 (MIN6-shHSPB1) e MIN6 com sequencia short hairpin aleatória (MIN6- SsC), medindo a morte celular através de ensaios de viabilidade, e ensaios de western blot para avaliar os níveis de marcadores de autofagia e fluxo autofágico (degradação de autofagossomos), tratando as células com citocinas, prolactina e indutores ou inibidores de autofagia. Os resultados mostraram que a modulação da autofagia ocasionada pela prolactina em células-beta se dá, em parte, através de HSPB1. O tratamento com prolactina foi capaz de inibir a morte celular induzida por citocinas, mesmo na presença de cloroquina, um bloqueador de autofagia, o que nos levou a concluir que a autofagia não é uma via envolvida na citoproteção de células beta induzida por PRL. Os resultados gerados nesse estudo contribuíram para uma melhor compreensão dos eventos moleculares induzidos por PRL em células-beta, e poderão permitir a inferência de novas abordagens que melhorem a citoproteção, cultura e transplante dessas células em pacientes com diabetes tipo 1

Type 1 diabetes mellitus is a metabolic disease characterized by glycemic dysregulation, which occurs due to an autoimmune destruction of beta-cells. Insulin therapy is the gold standard treatment for DM1. However, some DM1 patients do not respond efficiently to this treatment and suffer frequent episodes of severe hypoglycemia unawareness. Since this complication jeopardizes the quality of life of these people, Islet transplantation is a therapeutic alternative indicated to treat these patients. However, besides the lack of enough organ donors, the loss of beta cells during both the isolation as well as the infusion of islets into the recipient induce a great estresse and thus a significant cell death is one of the drawbacks of this procedure. Autophagy is a mechanism of recycling cytoplasmic components and is essential for cellular homeostasis. Under estresse conditions, this mechanism is activated above basal levels, promoting the degradation of protein aggregates and defective organelles, thus avoiding cell damage that could compromise cell viability. Studies carried out by our group have shown not only that PRL promotes cytoprotection in beta-cells, reducing pro-inflammatory cytokines-induced apoptosis, but also that HSPB1 plays an essential role in this inhibition of apoptosis mediated by PRL after treatment with cytokines. Moreover, recent results from our laboratory showed an increase in autophagy levels in beta-cells after exposure to cytokines, as well as a restauration to normal levels in the presence of PRL. In order to better understand the role of PRL in the modulation of autophagy in these cells, the aim of this project is to study whether HSPB1 is also essential in the mechanism of autophagy regulation induced by PRL. Using MIN6 beta cell models where HSPB1 was silenced (MIN6-shHSPB1) or not (MIN6-SsC), we studied cell death by viability assays. Moreover, western blot assays were performed in order to assess levels of autophagy and autophagic flux markers in the cells.Our results showed that HSPB1 in one of the mediators of PRL-induced modulation of autophagy. Nevertheless, since hormonal treatment was still able to inhibit cytokinesinduced cell death even in the presence of chloroquin, an autophagy blocker, we conclude that autophagy is not a signaling pathway involved in PRl-induced beta-cell cytoprotection. Altogether, the results shown in this study may help to increase the knowledge of the molecular events induced by PRL in beta-cells, and may allow to infer new approaches to improve cytoprotection, culture and transplantation of these cells into type 1 diabetic patients

The role of prolactin in prostatic inflammation / O papel da prolactina na inflamação prostática

Several reports have shown that prolactin (PRL) plays a role in prostatic growth, but few studies considered the role of PRL in the process of prostatic inflammation. Young (45 ± 5 days old) and adult (75 ± 5 days old) male Wistar rats were subcutaneously injected daily with domperidone (4.0 mg.kg-1) to maintain high serum PRL levels. The animals were treated for 15, 30, 45 or 60 days. Blood and prostate samples were collected at the end of each treatment for PRL dosage and histological analysis, respectively. Only young animals treated with DOMP for 15 and 30 days displayed inflammatory infiltrate in the prostate. These results confirm literature data in regards to PRL involvement in inducing prostate inflammation. Moreover, it was concluded that young animals are more susceptible then adults to the PRL action concerning prostate inflammation...

A prolactina (PRL) influencia o crescimento prostático, entretanto poucos estudos investigaram o papel da PRL na inflamação prostática. Ratos Wistar jovens (45 ± 5 dias de idade) e adultos (75 ± 5 dias de idade) receberam injeções subcutâneas diárias de domperidona (4,0 mg.kg-1) para manter níveis séricos altos de PRL. Os animais foram tratados por 15, 30, 45 ou 60 dias. Amostras de sangue e próstata foram coletadas ao final dos tratamentos para dosagem de PRL e análise histológica, respectivamente. Apenas os animais jovens tratados com domperidona por 15 e 30 dias apresentaram infiltrado inflamatório na próstata. Esses resultados confirmaram a participação da PRL na indução da inflamação prostática. A conclusão obtida foi que animais jovens são mais susceptíveis à ação da PRL na inflamação da próstata que os adultos...

Influência do uso continuado de fluoxetina nas dosagens séricas de prolactina em mulheres / Influence of the continous use of fluoxetin in the measurement of serum prolactin in women

A importância da dosagem de prolactina reside principalmente no fato de sua utilização diagnóstica em alterações da hipófise anterior. Alguns medicamentos, como a fluoxetina, podem alterar a secreção da prolactina. Assim, o foco deste trabalho foi ode avaliar a real importância de se considerar o uso da fluoxetina, um inibidor seletivo da recaptação da serotonina (ISRS), como um interferente na interpretação dos valores de dosagens laboratoriais da prolactina em mulheres. Foram analisados dados de 95 mulheres, com idade entre 15 e 70 anos, que realizaram dosagens séricas de prolactina. As mulheres em tratamento com a fluoxetina apresentaram um aumento significativo de prolactina. Este aumento foi maior em mulheres com até 29 anos, onde chegou a níveis considerados patológicos, diminuindo de uma maneira inversamente proporcional com o aumento da faixa etária. Acima dos 45 anos, onde a maioria das mulheres encontra-se na menopausa, os valores de prolactina não se alteram com o uso da fluoxetina.

Role of thyroxine and prolactin in the testicular status of spotted munia (Lonchura punctulata).

A long term investigation was made on the importance of thyroxine and prolactin in the reproduction of a tropical wild bird, spotted munia, Lonchura punctulata. Different doses of thyroxine i.m. (0.5, 1.0 and 2.0 microg; 0.56, 1.12 and 2.24 n mol Sodium salt, Sigma) per day/bird were administered in 0.1 ml of 0.9% alkaline NaCl per day per bird. Similarly various doses of prolactin (1.0, 2.0,. and 4.0 i.u.) were given per day/bird in 0.1 ml of 0.9% alkaline NaCl.Almost normal testicular cycle was observed in vehicle treated birds. All three doses of thyroxine suppressed the cycle almost completely indicating a gonado- inhibitory nature of the hormone. Testicular development in all three prolactin treated groups was also inhibited in peak breeding time which indicates the antigonadal nature of this hormone in the reproduction of this bird.

Endocrinologia do puerperio e infertilidade / Puerperium endocrinology and infertility

A prolactina e um hormonio sintetizado na adenoipofise, na hipofise fetal e pelas celulas deciduais, apresentando açäo sobre as mamas, o eixo hipotalamo-hipofise-ovario, na maturidade fetal e osmoreguladora no volume de liquido amniotico. Os autores analisam os mecanismos reguladores da secreçäo da prolactina e seus efeitos biológicos relacionados a reproduçäo

Prolactina en pacientes con trastornos endocrinos y de fertilidad

Se analizan 926 historias clínicas de la consulta externa de las de endocrinología ginecológica e infertilidad para conocer la frecuencia en los niveles de prolactina (PRL) en las pacientes que asistieron al Instituto Materno Infantil de Bogotá en el período del 1§ de enero de 1984 al 31 de marzo de 1989. De los 926 casos se les solicitó PRL a 210 (22.6 por ciento), de estos, 152(72.4 por ciento) reportó niveles normales y elevada mayor de 20 ng/ml en 58 pacientes(27.6 por ciento), distribuidos así; oligomenorrea 16(27.5 por ciento),Amenorrea 2 RIA 11(18.9 por ciento),galactorrea 9 (15.5 por ciento), polimenorrea 8 (13.8 por ciento), amenorrea-galactorrea 4 e infertilidad 4 para (6.8 por ciento). Los niveles de PRL de acuerdo al motivo de consulta presentó los siguientes niveles: amenorrea-galactorrea 225.3 ng/ml, amenorrea IRIA 128.0 ng/ml, oligomenorrea 58.14 ng&ml, galactorrea 53.5ng/ml , polimenorrea 37.5 ng/ml. En los casos de hiperprolactinemia de 21 sillas turcas analizadas 9 (19.3 por ciento) fueron anormales, de 15 campimetrías 4 (26.7 por ciento) presentaron alteraciones y de 9 TAC 3 resultaron con alteración a nivel hipofisiario. La etiología no fue posible determinarla en 39 casos (53.5 por ciento), debida a hipotiroidismo 5 (8.6 por ciento), microadenoma 4 (6.9 por ciento), de origen farmacológico 4 (6.9 por ciento), síndrome de ovario poliquístico 3 (5.2 por ciento),macroadenoma 1 (1.7 por ciento). Recibieron inductores de ovulación. El seguimeinto promedio de las pacientes con tratamiento farmacológico fue de 19.1 meses dismunuyendo los niveles de PRL y mejoría de su disfunción ovárica. Estos resultados confirman que en pacientes con alteraciones del ciclo e infertilidad debe descartarse una hiperprolactinemia

Improved prolactin crop-sac bioassay applying a morphometric approach

A pigeon crop-sac bioassay for prolactin was developed applying a morphometric approach for quantification of the epithelial cell proliferation induced by the hormone. A small male dove, indigenous from South America (Zenaida auriculata) previously castrated was used as experimental animal. The total dose of prolactin was divided into 4 daily injections administered systemically into the pectoral muscles. The number of the proliferated cell layers ysed as the bioassay end point was analyzedstatistically. This procedure yields a highly sensitive bioassay with an excellent precision index, particularly well suited for quantification of the different molecular forms of pituitary PRL