Protein profile analysis of Malaysian snake venoms by two-dimensional gel electrophoresis

Snake venoms comprise a highly complex mixture of proteins, which requires for their characterization the use of versatile two-dimensional electrophoresis techniques. In the present study, venoms obtained from eight snakes (Ophiophagus hannah, Naja kaouthia, Naja sumatrana, Bungarus fasciatus, Trimeresurus sumatranus, Tropidolaemus wagleri, Enhydrina schistosa and Calloselasma rhodostoma) commonly found in Malaysia were separated based on two independent properties, isoelectric point (pI) and molecular weight (MW). Many differences in snake venoms at the inter-family, inter-subfamily, inter-genus and inter-species levels were revealed. Notably, proteins from individuals of the Viperidae family – Trimeresurus sumatranus, Tropidolaemus wagleri and Calloselasma rhodostoma – were found to be numerous and scattered by the two-dimensional gel electrophoresis (2DE) specifically in regions between 37 and 100 kDa compared to the Elapidae venom proteins. The latter were clustered at the basic and lower molecular mass region (less than 20 kDa). Trains of spots were commonly observed, indicating that these proteins may be derived from post-translational modifications. Ophiophagus hannah (Elapidae) revealed a great amount of protein spots in the higher molecular mass range when compared to Enhydrina schistosa, Naja kaouthia, Naja sumatrana and Bungarus fasciatus. Overall 2DE showed large differences in the venom profile of each species, which might be employed as an ancillary tool to the identification of venomous snake species.

Estudio teratogénico de Spirulina en ratón / Teratogenic study of Spirulina in mice

Se investigó el potencial embriotóxico y fetotóxico de Spirulina en ratón. El alga fue administrada a animales gestantes a concentraciones de 0, 10, 20 y 30 g/100 en la dieta, durante los días 7-13, 1-13 y 1-19 de la gestación. El día 19 se sacrificaron las madres y se examinaron los cuernos uterinos para contar los fetos vivos, muertos y reabsorbidos. Los fetos vivos se pesaron, analizándose las malformaciones externas, esqueléticas y viscerales. No se encontró diferencia significativa entre los lotes en cuanto al número de reabsorciones o de fetos afectados, ya fuese considerando la camada como unidad de análisis, o tomando en cuenta el número total de fetos afectados. Estos resultados indican que la alimentación de ratones gestantes hasta con una concentración de 30 g/100 del alga, no provoca efectos embriotóxicos ni teratogénicos. La cantidad de alimento ingerida por los animales a esa concentración, es exageradamente superior al posible consumo humano

Efeito de canatoxina sobre células em cultura

Devido a importância do papel exercido por carboidratos presentes na superfície celular em processos de reconhecimento adesão e mitogêneses cresceu paralelamente o interesse de estudar proteínas capazes de interagir com esses glicoconjugados, mais especificamente: as lectinas. Na presente tese, foram avaliadas três lectinas de origem vegetal cujo efeito in vitro na divisão celular era desconhecido. As lectinas Mangalô, extraída da semente de Dioclea Lablab, e PIII, extraída da semente de Dioclea grandiflora, mostraram ser mitogênicas para linfócitos normais em cultura. A hemilectina canatoxina, isolada de Canavalia ensiformes, não só não induziu a proliferação celular como foi capaz de inibi-la, tanto em células normais como em células de diversas linhagens tumorais. Além da propriedade citostática, canatoxina exerceu in vitro uma ação citolítica. Foi possível verificar utilizando-se técnicas de imunofluorescência, que canatoxina pode ligar-se em poucos minutos à membrana celular não sendo deslocadas por lavagens sucessivas, mantendo-se irreversível o efeito inibitório na síntese de DNA mesmo após a remoção total da toxina do meio extracelular. O efeito citostático não pode ser modificado por drogas como trifluoperazina e indometacina e os efeitos tóxicos não parecem resultar da produção de radicais livres ou autólise por liberação de enzimas lisossomais. Canatoxina não apresentou nenhuma seletividade para um determinado tipo celular, e tanto células normais quanto células transformadas são afetadas pela toxina. Finalmente, o uso de um sistema in vitro com células isoladas e cultura, deverá ajudar a permitir o esclarecimento do modo de ação de canatoxina

As a result of the importance of the role played by carbohydrates present at the cell surface on processes involving cell to cell recognition, adhesion and mitogenesis, there was, in parallel, a growth of interest in the study of proteins capable of interacting with glycoconjugates, more specifically: lectins. Three lectins of plant origin were assessed in this thesis for their in vitro effect on cell division. The lectins Mangalô extracted from the seeds of Dolichos lablab, and PIII, extracted from the seeds of Dioclea grandiflora were mitogenic for normal lymphocytes in culture. The hemilectin canatoxin, isolated from Canavalia ensiformis, not only did not induce proliferation, but was capable of inhibiting cell division, both in normal cells and in various cell lines. Canatoxin, above being cytostatic, could have in vitro a cytolytic action as well. It was possible to verify using ummunoflorescence techniques, binding of canatoxin to the cell surface within a few minutes of exposure. This binding was irreversible and so was the inhibitory effect on DNA synthesis. The cytostatic effect was not modified by drugs such as trifluoperazine and indomethacin, and the toxic effects did not seem to depend on the production of free radicals or autolysis by lysossomal enzymes.Canatoxin did not present selectivity for a given cellular type ands both normal and transformed cells were affected by the toxin. Finally, the use of an in vitro system using isolated cells in culture may allow for a better insight in the mode of action of canatoxin