Extraction, Purification and Identification of a Dexamethasone-degrading Enzymes Generated by Pseudomonas Alcaligenes / 生物医学工程学杂志

In this research a strain of isolated Pseudomonas alcaligenes which causes degradation of dexamethasone was acclimated further and its proteins of every position in the bacterium were separated by the osmotic shock method. The separated intracellular proteins which had the highest enzyme activity were extracted by the salting out with ammonium sulfate and were purified with the cation exchange chromatography and gel chromatography. The purified proteins which was active to cause degradation of dexamethasone had been detected were cut with enzyme and were analyzed with mass spectrometry. The results showed that the degradation rate to dexamethasone by acclimated Pseudomonas alcaligenes were increased from 23.63% to 52.84%. The degrading enzymes were located mainly in the intracellular of the bacteria and its molecular weight was about 41 kD. The specific activity of the purified degrading enzymes were achieved to 1.02 U x mg(-1). Its 5-peptide amino acid sequences were consistent with some sequences of the isovaleryl-CoA dehydrogenase. The protein enzyme may be a new kind degrading enzyme of steroidal compounds. Our experimental results provided new strategies for cleanup of dexamethasone in water environment with microbial bioremediation technique.

Selection of microorganisms degrading S-Metolachlor herbicide

The aim of this work was to study herbicide degradation through selected microorganisms from humus and soil subjected to different plantation systems. The following bacterial species were identified: Klebsiella pneumoniae pneumoniae GC s.B strain 1, Pseudomonas alcaligenes, Enterobacter aerogenes GC s.A and Klebsiella pneumoniae pneumoniae GC s.B strain 2. Growth studies yet suggested the possibility of a very long lag phase. Although, culture with the herbicide presented biofilm formation and there were color changes in the herbicide that could have interfered with the espectrophotometry readings. After 5 days of incubation at 35°C, the difference in the concentration of herbicide was 14.42 percent on average and after 10 days, 35.01 percent.

Os herbicidas representam 65 por cento do consumo geral, sendo que o S-Metolachlor é um dos mais utilizados e está trazendo preocupações ambientais. Objetivamos detectar a degradação do S-Metolachlor por microorganismos de solos sob plantio. Foram identificadas as espécies bacterianas: Klebsiella pneumoniae pneumoniae GC s.B linhagem 1, Pseudomonas alcaligenes, Enterobacter aerogenes GC s.A e Klebsiella pneumoniae pneumoniae GC s.B linhagem 2. Resultados da curva de crescimento por espectrofotometria não permitiram definir diferentes fases, levando a pensar em uma fase Lag longa. Frascos de cultura demonstraram a formação de biofilme, provocando mudança na cor do herbicida, interferindo na leitura do crescimento. É possível a existência de fase Log, mas não detectável pelo método. Após 5 dias de incubação a 35°C, a diferença média de concentração do S-Metolachlor foi de 14.42 por cento, e em 10 dias, 35.01 por cento. Observou-se o aparecimento de um halo em volta das colônias, o que corrobora a hipótese de degradação microbiana do herbicida.

Aderência in vitro do Staphylococcus epidermidis e da Pseudomonas alcaligenes em lentes intra-oculares / In vitro adherence of Staphylococcus epidermidis and Pseudomonas alcaligenes to intraocular lenses

OBJETIVO: Quantificar e comparar a aderência in vitro das bactérias Staphylococcus epidermidis e Pseudomonas alcaligenes em diferentes tipos de lentes intra-oculares (LIOs). MÉTODOS: Quatorze lentes intra-oculares foram usadas no experimento. Quatro de polimetilmetacrilato (PMMA), quatro de silicone, quatro de hidrogel e duas de acrílico. Oito lentes intra-oculares foram colocadas em oito tubos de ensaio contendo 4 ml de suspensão de Pseudomonas alcaligenes, e seis lentes intra-oculares foram colocadas em seis tubos de ensaio contendo 4 ml de suspensão de Staphylococcus epidermidis. A concentração do caldo utilizada para o teste de aderência foi de 10(8) unidades formadoras de colônias por mililitro (CFU/mL) que corresponde a 0,5 na escala de McFarland. As lentes foram incubadas a 37° por duas horas. Após, foram removidas dos caldos e enxaguadas em água destilada estéril por duas vezes. As lentes foram cultivadas em placas de ágar-sangue a 35-37° e evaliadas a cada 24h por um período de 72h. Nas amostras que tiveram crescimento bacteriano, foram contadas as colônias utilizando os métodos convencionais de laboratório. Todos os ensaios foram executados em duplicata. RESULTADOS: A aderência do Staphylococcus epidermidis nas lentes de PMMA foi menor se comparada com as de silicone e de hidrogel. A aderência daPseudomonas alcaligenes nas lentes de hidrogel foi menor se comparada com as de silicone, PMMA e acrílico. CONCLUSÃO: Os resultados sugerem que a aderência do Staphylococcus epidermidis e da Pseudomonas alcaligenes nas lentes intra-oculares é influenciada pelo tipo de material da lente e pela espécie do microorganismo. A aderência bacteriana pode ter papel importante na patogenicidade da endoftalmite pós-cirurgia de catarata.