Use of aglepristone for the treatment of P4 induced insulin resistance in dogs

Insulin resistance (IR) in dogs is suspected when hyperglycemia is present despite administration of insulin doses greater than 1.0 to 1.5 UI/kg. IR is caused by increases in counter regulatory hormones concentrations (glucagon, glucocorticoids, catecholamines and growth hormone). This study was conducted to investigate the use of aglepristone (RU 46534), a P4 receptor antagonist, for the treatment of IR diabetes mellitus in bitches during the luteal phase. All animals were treated with porcine insulin zinc suspension (Caninsulin) and aglepristone (Alizin) 10 mg/kg subcutaneously at day 1, 2, 9 and 17 from diagnosis. At day 5, no significant variation in glycemia was shown. At day 12 and 20, serum glucose concentrations were significant lower (p < 0.05). From day 12 the insulin dose was reduced to 0.8 IU BID. Insulin was reduced in the following weeks and glycemia was controlled.

Validação de um radioimunoensaio para a quantificação de metabólitos fecais de testosterona em hamster Sírio (Mesocricetus auratus) / Validation of a radioimmunoassay for the quantification of fecal testosterone metabolites in the Syrian hamster (Mesocricetus auratus)

Modelo para o estudo de diversas doenças humanas, o hamster tem sido objeto de numerosos estudos comportamentais e envolvendo estresse e/ou comportamento agonístico que supõem, muitas vezes, o monitoramento das flutuações hormonais nos indivíduos envolvidos. O objetivo do presente trabalho foi confirmar a adequação de um conjunto comercial para dosagem de testosterona em sangue humano para a quantificação de metabólitos fecais de testosterona (MFT) em hamsters Sírios machos e fêmeas. Dez machos foram submetidos a um desafio com um agonista de GnRH para estimular a atividade testicular, elevando os níveis circulantes de testosterona. Cinco fêmeas receberam uma injeção de testosterona enquanto cinco outras receberam uma injeção de solução salina. Amostras de fezes coletadas antes e depois dos procedimentos, assim como amostras fecais de 20 fêmeas gestantes coletadas ao longo da gestação foram analisadas com um conjunto comercial para radioimunoensaio. Um pico de MFT 12h após a injeção seguido de uma queda abaixo do nível basal comprovou que, nos machos, as alterações nos níveis de MFT refletem as alterações da concentração de testosterona no sangue. Nestes observou-se um ciclo circadiano das concentrações de MFT com acrofase no início do período claro correspondendo ao ciclo descrito para as concentrações sanguíneas na literatura. Nas fêmeas a administração de testosterona exógena provocou uma elevação importante dos níveis de MFT, mas as concentrações medidas ao longo da gestação não refletiram o padrão dos níveis sanguíneos do hormônio endógeno. O conjunto para radioimunoensaio para testosterona em sangue humano mostrou-se adequado para o monitoramento da função testicular no hamster macho, mas um ensaio mais específico seria necessário para as fêmeas.

Besides being models for a variety of human diseases, hamsters have been object of numerous behavioral studies about stress and agonistic behavior. Such studies usually involve hormone change monitoring. The aim of the present study was to confirm the suitability of a commercial kit for human serum testosterone analysis to quantify testosterone metabolites in the feces (MFT) of male and female Syrian hamsters. Ten males were submitted to a GnRH challenge test to stimulate testicular activity and increase circulating testosterone levels. Five females received a testosterone injection and five other females were given a saline injection. Fecal samples collected before and after the procedures, and fecal samples collected from 20 pregnant females through gestation were analyzed for MFT with a commercial radioimmunoassay. The detection of a MFT peak 12 h after GnRH administration followed by a decrease under baseline showed that, in males, changes in the levels of MFT are related to respective changes of testosterone concentrations in the blood. Again in males a circadian cycle of MFT similar to the circadian rhythm described in literature for blood concentrations was detected. The administration of exogenous testosterone caused in females a dramatic peak of MFT. However, the concentrations measured through gestation did not reflect the pattern of endogenous testosterone blood levels as described in the literature. Therefore, the use of a radioimmunoassay for human blood testosterone was validated in male Syrian hamster, but a more specific assay would be necessary for female hamsters.

Validação de radioimunoensaio para quantificação de leptina plasmática bovina / Imunoradioassay validation to plasmatic bovine leptin quantification

Devido à necessidade de compreender melhor as interações entre leptina e reprodução, um ria específico para a leptina bovina foi validado. Primeiro, um protocolo para produção de anticorpos foi desenvolvido por meio da inoculação de leptina recombinante equina em um coelho, que resultou em 28,05% de ligação máxima (MB) 105 dias após o inicio do protocolo. Os testes de validação verificaram paralelismo entre a curva padrão e as diluições dos controles alto e baixo (p<0,01). O anticorpo contra leptina equina mostrou especificidade para a leptina bovina (p<0,01). A taxa de recuperação da leptina bovina pelo anticorpo contra leptina recombinante equina foi de 98,4 a 101,6% (p < 0, 01). Quando as amostras foram armazenadas em temperatura ambiente ou refrigeradas à 4°c, foi verificado estabilidade de ligação (p > 0,2), no entanto temperaturas acima de 37°C interferiram negativamente na recuperação da leptina bovina. O uso do tampão de ensaio com ou sem a adição de plasma não apresentou diferenças (p > 0,3). Esses resultados demonstraram que o anticorpo produzido em coelho contra leptina equina foi capaz de detectar a leptina plasmática bovina, e que o ria para a quantificação da leptina bovina apresentou características adequadas para o desenvolvimento de um ensaio válido.

Due necessity of better understanding leptin and reproduction relations, a specific radioimmunoassay (RIA) to bovine leptin was validated. First, an antibody production protocol was developed using recombinant equine leptin inoculated in a rabbit, that results in 28,05% of maximum binding (MB) 105 days after the protocol beginning. The tests of validations verified parallelism between standard curve and dilutions of high and low controls (P < 0,01). Antibody against equine leptin showed specificity to bovine leptin (P < 0,01). The recuperation tax of bovine leptin by antibody against recombinant equine leptin was from 98,4 to 101,6% (P < 0, 01). When the samples were stored in ambient temperature or refrigerated to 4°C, ligation stability was verified (P > 0,2), howether, temperatures above 37°C impaired the bovine leptin recuperation. The use of assay buffer with or without bovine plasma did not show difference (P > 0,3). These results showed that the antibody produced in rabbit against equine leptin were able to detect plasmatic bovine leptin, and that the RIA to bovine leptin quantification had adequate characteristics to the development of a valid assay.

Estandarización de un radioinmunoanálisis (RIA) para hormona de crecimiento bovina (bGH) y validación en plasma de vacas Holstein / A radioimmunoassay (RIA) standardization for bovine growth hormone (bGH) and their validation in plasma of Holstein cows

La hormona de crecimiento (GH) purificada a partir de adenohipófisis bovinas (bGH) y su antisuero obtenido en conejos, se utilizaron para desarrollar un radioinmunoanálisis (RIA) homólogo y específico. El antisuero como segundo anticuerpo. La bGH se iodizó por el método de la Cloramina T con una actividad específica de 93 µCi/µg. Cantidades crecientes de plasma bovino desplazaron paralelamente a la curva patrón cuya linearidad estuvo entre 1.31 y 39.4 ng/ml. La recuperación de cantidades conocidas de bGH añadidas a plasma bovino fue de 98.5 por ciento. El coeficiente de variación intra e interensayo fue menor a 5.1 por ciento y 8.3 por ciento respectivamente. Otras hormonas adenohipofisarias no mostraron reacciones cruzadas. Con este procedimiento se determinaron concentraciones plasmáticas de GH a cuatro vacas Holstein a la 5 y 14 semanas posparto. En cada periodo se tomaron muestras de sangre cada treinta minutos durante 24 horas a través de un catéter colocado en la vena yugular. Las muestras individuales mostraron un coeficiente de variación durante el día entre 25 por ciento y 65 por ciento. Las concentraciones de GH en plasma fueron superiores (P < 0.001) a las catorce semanas (7.80 ng/ml) que a las cinco semanas posparto (6.00 ng/ml). En virtud de que estos animales se encontraban en condiciones de pastoreo con limitada ración rica en energía, es posible que todavía a las catorce semanas de lactancia se hayan movilizado reservas corporales para favorecer la producción de leche