Participação dos receptores Kappa-Opióides centrais no controle da glicemia em ratos submetidos a jejum e estresse de contenção / Involvement of kappa-opioid receptor in the central control of blood glucose in rats fasted and restraint stress

O sistema opiatérgico central participa, assim como outros sistemas neuronais, no controle da glicemia. O presente trabalho foi desenvolvido para investigar a participação do receptor opiatérgico central do tipo Kappa na glicorregulação de ratos submetidos a jejum. Foram utilizados ratos Wistar machos (200 a 250g) submetidos a cirurgia de estereotaxia com canulação do terceiro ventrículo cerebral. Um dia antes da sessão experimental, os animais foram submetidos à cateterização da veia jugular externa direita para coletas sanguíneas seriadas nos tempos 0, 30, 60, 90 e 120 minutos. As amostras sanguíneas, após centrifugação, foram utilizadas para dosagem da glicemia e da insulina. Depois da coleta basal (tempo 0), foram administradas por via intracerebroventricular as drogas ICI 199.441 (agonista seletivo dos receptores kappa-opióides). Injeção do ICI 199.441 promoveu aumento significativo nos níveis glicêmicos dos ratos submetidos a 18 horas de jejum, quando comparado com as concentrações plasmáticas de glicose de animais controles que receberam salina isotônica. O pré-tratamento com o nor-BNI reverteu o resultado obtido pela administração do agonista Kappa-Opióide. A administração da nor-binaltorfimina isoladamente não promoveu alterações significativas na glicemia dos ratos. O nor-BNI também não foi capaz de diminnuir a hiperglicemia induzida pelo estresse de contenção. As concentrações plasmáticas de insulina dos ratos que receberam ICI 199.441 não sofreram mudanças significativas quando comparado com os níveis plasmáticos de insulina de animais controles. Diante destes resultados, sugere-se que os receptores Kappa-Opióides centrais ativa mecanismos que levam ao aumento nas concentrações plasmáticas de glicose em animais submetidos a jejum. Além disso, o componente Kappa-Opióide central parece não ser importante na resposta hiperglicêmica induzida pelo estresse de contenção.

Characterization and analysis of the aggregation of a single-chain chimeric anti-ErbB2 antibody / 生物工程学报

We studied the aggregation of a recombinant engineering antibody (chA21). Anti-ErbB2 antibody chA21 was produced by fusing single-chain Fv (scFv) with human IgG1 Fc fragment, and it was proved to be a drug candidate for cancer therapy. We characterized the aggregation of chA21 by high performance sized-exclusive chromatography (HPSEC), dynamic light scattering (DLS), SDS-PAGE, indirect ELISA assay, and compared the influence of temperature and additive on the level of aggregation and binding activity. Conformation changes of different levels of aggregation were also analyzed via circular dichroism (CD). Finally, we analyzed which part of chA21 was involved in aggregation by cleaving it into scFv and Fc fragments. The results showed that chA21 could form aggregates in the storage solution. The aggregates interacted through non-covalent bonds and remained binding activity. Temperature and additive could slightly affect the level of aggregation and binding activity, while the conformations of chA21 were stable. Aggregation propensity of scFv fragment was almost same as chA21, indicating that scFv may be the major part to form the aggregates. The research on aggregation may be helpful to develop a suitable formulation for chA21 clinical application as well as provide direction for future antibody design and reconstruction.

CD43 cross-linking increases the Fas-induced apoptosis through induction of Fas aggregation in Jurkat T-cells

CD43 (sialophorin, leukosialin) is a heavily sialylated surface protein expressed on most leukocytes and platelets including T cells. Although CD43 antigen is known to have multiple and complex structure, exact function of CD43 in each cell type is not completely understood. Here we evaluated the role of CD43 in Fas (CD95)-induced cell death in human T lymphoblastoid cell line, Jurkat. Crosslinking CD43 antigen by K06 mAb increased the Fas-mediated Jurkat cell apoptosis and the augmentation was inhibited by treatment with caspase inhibitors. Further, CD43 signaling of Jurkat cells induced Fas oligomerization on the cell surfaces implying that CD43 ligation have effects on early stage of Fas-induced T cell death. These also suggest that CD43 might play an important role in contraction of the immune response by promotion of Fas-induced apoptosis in human T cells.

Effect of 11 beta OH pregna-1,4-diene-3,20-dione (deltaHOP) on thymocyte plasma membranes

En trabajos anteriores se demostró que la acción inibitoria del esteroide delta HOP a altas concentraciones no era consecuencia de un efecto genómico como en el caso de los glucocorticoides. Para investigar si este efecto se producía a traves de la membrana plasmática, en este trabajo se estudió , en tromocitos de ratas, las alteraciones producidas por estos esteroides en la fuidez de la membrana por polarización de fluorescencia con 1,6-difenil-1, 3, 5-hexatrieno (DPH) y la movilidad de las proteínas de susperficie por la formación de "caps" con concanavalina A fluorescente (Con A-fl). La polarización de fluorescencia disminuyó con los glucocorticoides por aumento de la fluidez de la membrana, mientras que la alfa HOP no produjo ningún cambio. En los experimentos con Con A-fl se observó una disminución del inúmero de células con "cap" cuando se incubó con delta HOP y con los inhibidores de "caps" (citocalasina B y acida sódica), mientras que los glucocorticoides no tuvieron efecto inhibidor. El tratamiento "in vitro" con delta HOP o glucocorticoides produjo el mismo efecto que "in vitro". Estos resultados sugieren que la delta HOP actúa en forma superficial sobre la membrana plasmática, in hibiendo la movilidad de las proteínas de superficie, pero no alterando la fluidez de la bicapa lipídica