The shift from low to high non-structural protein 1 expression in rotavirus-infected MA-104 cells

A hallmark of group/species A rotavirus (RVA) replication in MA-104 cells is the logarithmic increase in viral mRNAs that occurs four-12 h post-infection. Viral protein synthesis typically lags closely behind mRNA synthesis but continues after mRNA levels plateau. However, RVA non-structural protein 1 (NSP1) is present at very low levels throughout viral replication despite showing robust protein synthesis. NSP1 has the contrasting properties of being susceptible to proteasomal degradation, but being stabilised against proteasomal degradation by viral proteins and/or viral mRNAs. We aimed to determine the kinetics of the accumulation and intracellular distribution of NSP1 in MA-104 cells infected with rhesus rotavirus (RRV). NSP1 preferentially localises to the perinuclear region of the cytoplasm of infected cells, forming abundant granules that are heterogeneous in size. Late in infection, large NSP1 granules predominate, coincident with a shift from low to high NSP1 expression levels. Our results indicate that rotavirus NSP1 is a late viral protein in MA-104 cells infected with RRV, presumably as a result of altered protein turnover.

Frecuencia de rotavirus y adenovirus entre octubre 2005-agosto 2006 en el Instituto Médico La Floresta: Caracas-Venezuela / Frequency of rotavirus and adenovirus from october 2005-august 2006 at the Instituto Medico La Floresta: Caracas-Venezuela

La gastroenteritis clásica por rotavirus y adenovirus ocurre principalmente en niños entre 6 y 24 meses, pero es común en todos los grupos etarios, incluyendo adultos. Generalmente, los adultos han sido infectados, como lo demuestra la presión de anticuerpos séricos, sin embargo, no están protegidos contra nuevos episodios. Determinar la frecuencia de infección por rotavirus y adenovirus en el Instituto Médico La Florestas (IMLF), octubre 2005-agosto 2006. Estudio descriptivo, retrospectivo de datos obtenidos de la detección de rota/ adenovirus en heces por técnica inmunocromatografía del IMFL. Se procesaron 465 muestras de heces para rotavirus y adenovirus en todos los grupos etarios. De éstas, 162 (34,84 por ciento) muestras fueron positivas para ambos virus y sólo en 52 (32,10 por ciento) fue posible precisar si provenían de adultos o niños. En los niños, la frecuencia fue 80,77 por ciento, más elevada para adenovirus 42,31 por ciento, que para rotavirus 38,64 por ciento. En los adultos, fue 19,23 por ciento; con 13,46 por ciento y 5,77 por ciento para rotavirus y adenovirus respectivamente. La coinfección por ambos virus se encontró en 6 casos (11,54 por ciento. La infección por rotavirus, suele ser más leve en adultos; sin embargo, han sido reportadas muertes; y puede ser severa en inmunocomprometidos como lo reportado en esta casuística con shock hipolémico en un paciente trasplantado renal e insufiencia renal aguda y, trombocitopenia, cilindruria y proteinuria en un paicente adulto infectado por VIH. La afectación familiar con un niño como caso índice se reporta en dos grupos de familias. La infección por rotavirus y adenovirus se debe considerar como diagnóstico diferencial en pacientes adultos con diarrea independientemente de su condición inmunológica. Se reporta la casuística en un grupo pequeño de un centro privado. Se recomienda vigilancia epidemiológica nacional a todo nivel para conocer la frecuencia a mayor escala en todos los grupos etarios.

Association of rotavirus viroplasms with microtubules through NSP2 and NSP5

Rotavirus replication and virus assembly take place in electrodense spherical structures known as viroplasms whose main components are the viral proteins NSP2 and NSP5. The viroplasms are produced since early times after infection and seem to grow by stepwise addition of viral proteins and by fusion, however, the mechanism of viropIasms formation is unknown. In this study we found that the viroplasms surface colocalized with microtubules, and seem to be caged by a microtubule network. Moreover inhibition of microtubule assembly with nocodazole interfered with viroplasms growth in rotavirus infected cells. We searched for a physical link between viroplasms and microtubules by co-immunoprecipitation assays, and we found that the proteins NSP2 and NSP5 were co-immunoprecipitated with anti-tubulin in rotavirus infected cells and also when they were transiently co-expressed or individually expressed. These results indicate that a functional microtubule network is needed for viroplasm growth presumably due to the association of viroplasms with microtubules via NSP2 and NSP5.

A reaçäo de imunofluorescência indireta no diagnóstico por rotavírus / The indirect immunofluorescence assay in the diagnosis of human rotavirus gastroenteritis

Utilizando a cepa de rotavírus SA-11, cultivada em células MA-104 e purificada em gradiente de CsCl, prepararam-se soros antirotavírus em cobaias para uso no diagnóstico de gastroenterites por rotavírus, através da reaçäo de imunofluorescência indireta. Num total de 268 casos, obteve-se uma porcentagem de positividade de 14.93 por cento (40 amostras). A comparaçäo desta prova com o ensaio imunoenzimático (EIERA) e a eletroforese em gel de poliacrilamida(EGPA), revelou boa concordância entre os três ensaios, com valores de kappa entre 0.72 e 0.76.